Transcript What is Pertussis (Whooping cough

‫دکتر فرشته شاهچراغی‬
‫دانشیار‪-‬عضو هیأت علمی انستیتو پاستور ایران‬
‫مدیر گروه بخش میکروب شناس ی‬
‫مسئول فنی آزمایشگاه مرجع کشوری سیاه سرفه‬
What is Pertussis
(Whooping cough)
• Highly contagious respiratory infection caused by Bordetella pertussis
• Outbreaks first described in 16th century
• Pertussis is a world wide disease
•Bordetella pertussis is an exclusively human pathogen
•Dramatic for neonates and infants but can be very severe for children and
adults.
• Pertussis remains one of the top 10 causes of
death in children under 1 years old worldwide
• 10 million cases worldwide
• 400,000 deaths worldwide
90% in developing countries and mostly in
infants
Pertussis—as a re-emerging infection
Case fatality rates
 Developing countries
 Developed countries
1 - 2% (important problem)
0.04% (re-emerging problem
France, USA, Sweden, Japan, England,
Netherland, Canada
Pertussis incidence in US
• Duration of protection and waning immunity
following infection and vaccination
• Incomplete protection from vaccination
• Infection source for infants
• Infection source for adolescents
• Strain polymorphism
• Increased diagnosis and reporting.
Estimating
rates of pertussis is difficult
lack of access
to
diagnostic
methods
misdiagnosis
Under
reported
cases
different reporting
criteria between
countries
Cause of pertussis?
• Gram negative coccobacillus (Bordetella pertussis)
• Isolated in 1906
• Obligate aerobe
•Non-motile
•optimal growth at 35-37 С° with humidity
•Fastidious
•No growth on routine blood agar
•Catalse and Oxidase positive
•Slow growing, requires 3-10 days of culture for identification
•Media:
Bordet-Gengou
Regan-lowe
Colony:
smooth, tiny, glistening
Appearance = “mercury-drop” or “pearl”
Bordetella spp.
B. pertussis,
Bordet and Gengou(1900)
B. parapertussis,
Bradford and Slavin
(1937)
 B.bronchiseptica, Ferry:1910
 B. holmesii
 B. avium
 B. Hinzii
 B. Trematum
 B.petrii
B. pertussis
virulence
factors
1. Adhesions
2. Toxines
1st Pertussis vaccine- whole cell (1940s)
 Acellular vaccine (PT, FHA, PRN, FIM)


Combination vaccines
Pathogenesis
The bacteria enter the mouth or
nasopharynx as aerosols
The bacteria binds to ciliated
cells in the respiratory mucosa
produces a number of adhesins
which aid in its ability to colonize
Ptx is also released into the
extracellular fluid and can affect
host cells
Kills ciliated epithelial cell.
Inflammation in respiratory tract
Attack to lymphocytes of immune
system
75% transmitted from close contacts
25% Others
Other
25%
Mom
32%
Grandparent
8%
Sibling
20%
Dad
15%
8% grandparents
20% sibling
47% Mom or Dad
Prevention
● Vaccination of children
● Treatment by azithromycine
and erythromycine 50 mg/kg in
10 days
● Sampling of other persons
contact to patients
● Daily control of the family of
patients
What affects the clinical presentation of pertussis?
Age
Adults and older children are less likely to have
typical symptoms—eg, simple cough
Very young infants might present atypically—eg, with
apnoea alone—and not cough
Previous infection
Subsequent infections are milder
Previous vaccination
Time since previous vaccination or infection
Longer time, increased severity of infection
Co-infection
Pertussis in adults and
adolescents
 Symptoms ………………… less typical
 Duration of cough……….. 36-48 days
 Accompanied……………. Other symptoms
 pool of frequently undiagnosed pertussis
cases ……….. Reservoir in very young
patients
Laboratory diagnosis
‫مراحل تشخيص آزمايشگاهي بيماري‬
‫تشخيص آزمايشگاهي‬
‫سرولوژي‬
‫كشت‬
‫‪PCR‬‬
‫ایمونوفلورسنت‬
‫اهمیت نمونه برداری‬
‫کیفیت نمونه بستگی دارد به‪:‬‬
‫‪ ‬جدی گرفتن از سوی پرسنل‬
‫‪ ‬استفاده از دستورالعملهای مناسب و دقیق‬
‫در استفاده از مواد و محیطهای تراسپورت‬
‫‪ ‬رعایت زمان مناسب در انتقال نمونه به‬
‫آزمایشگاه‬
‫‪Specimens of bacterial culture must‬‬
‫‪not be stored for more than 24‬‬
‫‪hours prior to sending laboratory.‬‬
‫مقدمات نمونه گيري از بیمار‬
‫• نمونه گيري از طريق پزشك مربوطه صورت مي گيرد‬
‫• آماده كردن بيمار با توضيح در خصوص نمونه گيري‬
‫• كامل كردن پرسش نامه‬
‫• آماده كردن دستكش و ماسک و دو محیط ترانسپورت و دو عدد سواب داكرون‬
‫(از سواب پنبه ای نمی توان استفاده کرد)‬
‫• محيط ترانسپورت رگان‪ -‬لوحاوی سفالکسين (به صورت در بسته تا دو ماه در‬
‫یخچال می توان نگه داشت)‬
‫نمونه گيري از بیمار از کجا باید انجام شود؟‬
‫‪‬نازوفارنکس‬
‫‪ ‬نازال‬
‫‪ ‬خلط (بزرگساالن)‬
‫ناوه نمونه گيري از بیمار‬
‫س ووواب را ب ووه انتر وواخي ت وورير بخ ووش بين و ب وورده و ن وود حظ ووه‬
‫نگووه مووي داريوور تووا ترآووحات بووه آن جو ب شووود و ب فاصوله‬
‫به محيط ترانسپورت انتقال داده مي شود‪.‬‬
‫☻ در مووورد نوووزادان در صووورت عوودم موفقیووت در نمونووه‬
‫گيووری از نازوفووارنکس یووا نووازال پليووت حوواوي محوويط كش وت‬
‫(ب وورده‪ -‬ژانگ ووو) را ‪ 3‬ب ووار جل ووو ده ووان ك ووود در هنگ ووام س وورفه‬
‫شديد نگه مي دارير‪)cough plate( .‬‬
‫☻اي نني ما ننيب ابت نندا باي نند ‪ 24‬س ننارت در دم نناي ‪37°C‬‬
‫انكوبه شده سپس به آزمايشگاه ارسال گردد‪.‬‬
‫نمونه های موردنظر بایستی شرایب ذیل را دارا باشند‪:‬‬
‫‪‬حتما" نمونه های مورد نظردرمایب ترانسپورت سیاه سرفه (‪Regan-‬‬
‫‪ )Lowe Agar‬رگان لوآگارحمل گردند‪.‬‬
‫‪‬برای حفظ رطوبت مایب ترانسپورت‪ ،‬نمونه ها باید درکیسه فریزر که حاوی‬
‫پنبه نم دار باشد حمل گردند‪.‬‬
‫‪‬همراه با سرم و نمونه شرح حال بیمار نيز الزامی است‬
‫‪‬نمونه بیمار در زنجيره سرد نگهداری و حمل گردد‪.‬‬
‫‪‬نمونه گيری با سواب داکرون انجام شود‪ ( .‬زیرا سواب مورد نظر توکسیک‬
‫نبوده ورطوبت الزم برای بقای باکتری را دارا می باشد)‪.‬‬
‫شرايب نگهداري نمونه سياه سرفه گرفته شده از بيمار‬
‫• در صورتی که ارسال نمونه ها ب فاصله پس از نمونه گيری انجام شود (فاصله زمانی ‪ 4‬ساعت ارسال به‬
‫آزمایشگاه) نمونه هاي جمع آوري شده را می توان در دمای محیط نگهداری و در داخل ظرف درب دار حاوی‬
‫پنبه نر دار انتقال داد‪.‬‬
‫•در صورت ارسال نمونه ها حداكثر طي‪ 2‬روز (‪ 48‬ساعت) به آزمایشگاه‪ ،‬نمونه های جمع آوری شده در‬
‫محیط ترانسپورت باید در یخچال نگهداری شده و در زنجيره سرد ارسال گردند‪ .‬در ایر صورت بايد با پارافيلر‬
‫درب لوله ها را كام محكر كرد و دور آنرا را پنبه يا ابر نرم پيچيد و اير مجموعه را در داخل يك نايلكس‬
‫حاوي پنبه مرطوب قرار داد و پرسشنامه تكميل شده را همراه با نمونه در داخل ظرف درب دار ديگري قرار‬
‫داده و درب ظرف را كام بست‪ .‬پس از سب زدن درب آن‪ ،‬هر ه سرخعتر نمونه ها را به آزمایشگاه مرجع‬
‫ارسال نمود‪.‬‬
‫•اگر تاخير در ارسال نمونه بیش از ‪ 48‬ساعت باشد جهت انتقال نمونه ابتدا باید نمونه های جمع آوری شده‬
‫در محیط ترانسپورت در دمای ‪ 35˚C‬به مدت ‪ 2‬روز انکوبه گردد و سپس در زنجيره سرد انتقال یابد‪.‬‬
‫فرم ارسال نمونه های مشكوك به‬
‫سياه سرفه‬
‫نام استان‪:‬‬
‫نام بيمارستان‪ ,‬دانشگاه‪ ,‬آزمايشگاه‪:‬‬
‫تاريخ ارالم بيماري به مركز بهداشت استان‪:‬‬
‫نام و نام خانوادگي بيمار‪:‬‬
‫جنسيت‪ :‬مرد‬
‫تاريخچه بيماري‬
‫شماره تلفي ‪:‬‬
‫فاكس‪:‬‬
‫نام پزشك معالج‪:‬‬
‫سال‬
‫تاريخ تولد‪ :‬روز ماه‬
‫زن‬
‫تاريخ شروع بيماري‪ :‬روز‬
‫ماه‬
‫سال‬
‫رالئم‪:‬‬
‫‪ -‬سرفه هاي قطاري و ادامه دار ‪:‬‬
‫بله‬
‫ حالت تهوع همراه با سرفه‪:‬‬‫‪ -‬بيمار تب دارد‪:‬‬
‫خير‬
‫بله‬
‫بله‬
‫نامشخص‬
‫خير‬
‫خير‬
‫نامشخص‬
‫نامشخص‬
‫خير‬
‫ آنتي بيوتيك مصرف كرده است؟ بله‬‫سال‬
‫ماه‬
‫زمان مصرف ‪ :‬از روز‬
‫ نام دارو‪:‬‬‫واكسيناسيون قبلي (ديفتري‪-‬كزاز‪-‬خردساالن)‪(-‬ديفتري‪-‬كزاز بزرگساالن)‪( -‬ديفتري‪-‬كزاز‪-‬سياه سرفه)‬
‫خير‬
‫بله‬
‫تاريخ آخريي دز‪ :‬روز‬
‫ماه‬
‫سال‬
‫موارد تماس با بيمار مشكوك به سياه سرفه‪:‬‬
‫تاريخ نمونه برداري‪:‬‬
‫نوع نمونه هاي ارسالي‪:‬‬
‫سال‬
‫ماه‬
‫نمونه گرفته شده از نازوفارنکس روي مايب ترانسپورت روز‬
‫سياه سرفه‬
‫روز‬
‫ماه‬
‫سال‬
‫بله‬
‫خير‬
‫نمونه سرم خون بيمار‪:‬‬
‫نام و نام خانوادگي فرد مسئول ارسال کننده نمونه‪:‬‬
‫آدرس مركز‪:‬‬
‫فاكس‪:‬‬
‫شماره تلفي ‪:‬‬
‫ایي قسمت توسب انستیتو پاستور تکمیل می گردد‪:.‬‬
‫تاریخ دریافت نمونه‪:‬‬
‫نام ونام خانوادگی فرد دریافت کننده نمونه‪:‬‬
‫اشکاالت نمونه ارسال شده‪:‬‬
‫پاستور‬
‫پاستور‬
‫ایران– بخش ميكروبشناس ي‬
‫پالك ‪ – 69‬كدپستي ‪ -13164‬انستیتو‬‫نشاني‪ :‬تهران‪ -‬خيابان‬
‫تلفکس‪ - 66405535 :‬روزهاي تعطيل ‪66953311 -20‬‬
‫اشتباهات معمول پرسنل در نمونه برداری‬
‫‪ ‬خطا در بر سب زدن نمونه ها‬
‫‪ ‬خطا در پر کردن صحیح اط عات الزم در فرم مربوط به بیمار‬
‫‪ ‬مناسب نبودن مقدار نمونه جهت انجام آزمایش و بدست اوردن نتایج قابل قبول‬
‫‪ ‬خطا در انتخاب محیط ترانسپورت مناسب ( ‪specific, leak proof,‬‬
‫‪)unbreakable, sterile‬‬
‫‪ ‬آماده نکردن و عدم آموزش بیمار قبل از نمونه برداری‬
‫‪ ‬محکر نبستن در محیط ترانسپورت که منجر به بيرون ریختن و در نتیجه آلودگی می‬
‫شود‬
‫‪ ‬رعایت نکردن شرایط نگهداری نمونه و ارسال آن در مدت زمان صحیح‬
‫كشت‬
‫روش استاندارد طاليي در ميان روشهاي آزمايشگاهي است‬
‫‪.1‬‬
‫‪.2‬‬
‫‪.3‬‬
‫‪.4‬‬
‫‪.5‬‬
‫‪.6‬‬
‫كش ووت نمونو ووه هو وواي ارسو وواژي بو وور روي محو وويط ب وورده ژانگو ووو و رگو ووان لو ووو(بو ووا سفالكسو ووين و بو وودون‬
‫سفالكسين)‬
‫انكوباسوويون در ‪ 35-37 °C‬و كنتوورل كشووت بوواكتري تووا ‪ 9‬روز در شورايط مناسووب هموراه بووا‬
‫رطوبت‬
‫در صورت رشد باكتري بر روي محيط‪ ،‬تريه اسمير از كلن هاي مشكو و رنگ آميزي گرم‬
‫در صورت مشاهده كوكوباسيلهاي گرم منفي‪:‬‬
‫انجام تستراي تشخيص اكسيداز (‪ )+‬و حركت (‪ )-‬و ‪API‬‬
‫انج ووام تس ووت اسو و يد آگلوتوناس وويون ب ووا اس ووتفاده از آنپو و س وورمهاي پ ووي كلون ووال بو وراي تايي وود‬
‫باكتري بوردت پرتوسوس و پارا پرتوسوس‬
‫مايب برده ژانگو‬
‫اولين مايب براي رشد باكتري بوردتال پرتوسيس‬
‫حاوی سفالکسين و بدون سفالکسين‬
‫شامل‪:‬‬
‫رصاره سیب زمینی‪ %1 ،‬گلیسرول‬
‫و ‪ %15‬خون دفيبرينه گوسفندي‬
‫كلني هاي كوچك‪ ،‬براق و مرواريد مانند‬
‫مايب رگان لو (رگان لو شاركل آگار)‬
‫مايب مناسب ترانسپورت براي گونه هاي بوردتال‬
‫حاوي سفالكسين‬
‫شامل‪:‬‬
‫رصاره گوشت‪ ،‬كازئين هضم شده با آنزيمهاي‬
‫پانكراتيك‪ ،‬نشاسته‪ ،‬ذغال فعال‪ ،‬نياسين و ‪%10‬‬
‫خون دفيبرينه حیوانی‬
‫سرولوژی‬
‫● سرولوژي ربارت است از تعيين تيتر آنتي بادي )‪ (IgG and IgA‬ايجاد شده بر‬
‫رليه آنتی ژنهای توکسين بوردتال پرتوسيس و ‪FHA(Filamentous‬‬
‫)‪ hemagglutinin‬در سرم خون فرد بيمار‬
‫● ايي تست بيانگر حضور آنتي بادي در خون چه در اثر ابتال به بيماري و چه در اثر‬
‫واكسيناسيون است (بنابرايي هم در افراد مبتال و هم در افراد واكسينه نتيجه مثبت‬
‫خواهد داشت)‬
‫● براي افراد باالي ‪ 11‬سال صورت مي گيرد و در صورت منفي بودن كشت و ‪PCR‬‬
‫پيشنهاد مي شود‬
‫‪ ‬به دليل توليد آنتي بادي در فرد واكسينه جهت بررس ی افزایش ميزان ‪IgG ,‬‬
‫‪ IgA‬در اثر ابتال به بیماری‪ ،‬در تست سرولوژی به دو نمونه سرم نیاز است‪.‬‬
‫‪ ‬بهتریي تست سرولوژی مربوط به تیتر آنتی بادی ‪ IgG‬رلیه توکسين پرتوسیس‬
‫(‪ )PT‬است که ویژه بوردتال پرتوسیس بوده بیانگر ایجاد بیماری حاد در فرد‬
‫مبتال می باشد‪) 100-125 EU/ml( .‬‬
‫‪ ‬در ‪ 2-3‬هفته زمان سرفه کردن بیمار استفاده از هر دو روش سرولوژی و‬
‫‪ PCR‬پیشنهاد می شود‪.‬‬
‫آنتي بادي فلورسنت مستقيم‬
‫‪(Direct Fluorescent Antibody (DFA‬‬
‫معايب‬
‫• حساسيت پايين (‪)%18-78‬‬
‫• نياز به تعداد زياد باكتري )‪(>104 CFU/ml‬‬
‫• مناسب در مراحل اوليه بيماري‬
‫• نياز به مهارت و تجربه در استفاده از ميكروسكوپ‬
‫• آنتي بيوتيك درماني بر اتصال آنتي باديها ي فلورسنت‬
‫بر ديواره سلولي باكتري موثر است‬
‫• اختصاصيت پايين ( ‪ )%7-44‬مثبت كاذب‬
‫مزايا‬
‫سرخعتر از كشت‬
‫‪Real-Time PCR‬‬
‫ربارت است از تكثير ناحيه بسيار اختصاص ي از ژنوم باكتري با استفاده از پرایمر و پروب‬
‫اختصاص ی‬
‫مزایای ‪ real-time PCR‬نسبت به کشت‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫•‬
‫بهتريي و دقیقتریي تست تشخيص ي‬
‫زمان كوتاه مورد نیاز جهت ارائه نتایج‬
‫حساسيت باال )‪(<= (1CFU/ 5 µl sample‬‬
‫اختصاصيت باال‬
‫ردم نياز به باكتري زنده (مشكالت ناش ي از نمونه گيري و طريقه انتقال‬
‫نمونه را ندارد)‬
‫معايب ‪Real Time PCR‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫نیاز به آماده سازی ‪ DNA‬باکتری‬
‫نياز به وسايل و تجهيزات دقيق‬
‫هزينه بسيار بيشتر از روش كشت و ‪DFA‬‬
‫ردم استاندارد سازي ايي روش‬
‫‪ ‬بازدارنده هاي ‪PCR‬‬
‫‪ ‬واكنش متقاطع با گونه هاي ديگر باكتري مانند‬
‫‪ B. bronchiseptica, B. holmesii, ‬در صورت استفاده از ‪IS481‬‬
‫استفاده از روش ملکولی جایگزیي که هزینه کمتری داشته و‬
‫امکان استفاده از آن در سراسر کشورفراهم باشد‬
‫آيا سياه سرفه قابل پيشگيري و درمان است؟‬
‫آنتي بيوتيك‬
‫واكسيناسيون‬
‫كموپروفي كس‬
‫وضعیت موارد ارسالی مشکوک به سیاه سرفه به انستیتو‬
‫پاستور ایران طی سالهای‪1391-1386‬‬
‫‪Culture‬‬
‫‪Total‬‬
‫‪PCR‬‬
‫‪817‬‬
‫‪688‬‬
‫‪643‬‬
‫‪500‬‬
‫‪452‬‬
‫‪263‬‬
‫‪2 27‬‬
‫‪1386‬‬
‫‪5 32‬‬
‫‪1387‬‬
‫‪92‬‬
‫‪133‬‬
‫‪10‬‬
‫‪1388‬‬
‫‪2 39‬‬
‫‪1389‬‬
‫‪116‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1390‬‬
‫‪21‬‬
‫‪1391‬‬
‫موارد کشت مثبت سیاه سرفه از سال ‪1386-1392‬‬
‫‪Culture‬‬
‫‪1335‬‬
‫‪Total‬‬
‫‪1301‬‬
‫‪817‬‬
‫‪688‬‬
‫‪643‬‬
‫‪452‬‬
‫‪263‬‬
‫‪31‬‬
‫‪1392‬‬
‫‪34‬‬
‫‪1391‬‬
‫‪1‬‬
‫‪2‬‬
‫‪1390‬‬
‫‪1389‬‬
‫‪10‬‬
‫‪1388‬‬
‫‪5‬‬
‫‪2‬‬
‫‪1387‬‬
‫‪1386‬‬
‫موارد کشت مثبت سال ‪1392‬‬
‫استان‬
‫کشت مثبت‬
‫واکسینه شده‬
‫مصرف آنتی بیوتیک‬
‫اشکاالت‬
‫آذربایجان شرقی‬
‫‪13‬‬
‫‪6‬‬
‫‪9‬‬
‫‪4‬‬
‫البرز‬
‫‪1‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0‬‬
‫تهران‬
‫‪5‬‬
‫‪4‬‬
‫‪4‬‬
‫‪0‬‬
‫خراسان رضوی‬
‫‪2‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪0‬‬
‫خراسان شمالی‬
‫‪1‬‬
‫نامشخص‬
‫نامشخص‬
‫‪1‬‬
‫زنجان‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪0‬‬
‫‪0‬‬
‫قم‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪0‬‬
‫کرمانشاه‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪1‬‬
‫‪0‬‬
‫مازندران‬
‫‪5‬‬
‫‪4‬‬
‫‪2‬‬
‫‪0‬‬
‫نامشخص‬
‫‪1‬‬
‫نامشخص‬
‫نامشخص‬
‫‪1‬‬
‫موارد مثبت سیاه سرفه از نظر گروه های سنی بیماران‬
‫(‪)1392‬‬
‫‪13‬‬
‫‪11‬‬
‫‪14‬‬
‫‪12‬‬
‫‪10‬‬
‫‪8‬‬
‫‪6‬‬
‫‪4‬‬
‫‪1‬‬
‫‪4‬‬
‫‪2‬‬
‫‪2‬‬
‫‪0‬‬
‫نامشخص ‪12-6‬ماه‬
‫‪ 6-4‬ماه‬
‫‪ 2-4‬ماه‬
‫‪ 2-0‬ماه‬
‫اشكاالت معمول در موارد ارساژي‬
‫يك سواب‬
‫سواب پنبه اي‬
‫بدون ترانسپورت‬
‫بدون سواب‬
‫بدون فرم‬
‫آ لودگی محیط‬
‫فقط سرم ارسال شده است‬
‫فرم ديفتری پر شده است‬
‫نقص در تکمیل فرم‬
‫بی نام وشماره تماس‬
‫استفاده از محیط ترانسپورت تاريخ‬
‫گذشته‬
‫تاخیر در ارسال نمونه‬
‫اشکاالت مربوط به نمونه های ارساژی امسال تا اسفند ماه ‪1392‬‬
‫‪1600‬‬
‫‪1335‬‬
‫‪1400‬‬
‫‪1200‬‬
‫‪1000‬‬
‫‪800‬‬
‫‪600‬‬
‫‪400‬‬
‫‪276‬‬
‫‪200‬‬
‫‪0‬‬
‫اشکاالت‬
‫کل‬