Transcript diagnosticul gestatiei-met. de lab.

DIAGNOSTICUL GESTATIEI PRIN
METODE DE LABORATOR
Metode
Metode
Metode
Metode
Metode
fizice
chimice
histologice
biologice
imunologice
Metode fizice
1.
-

Radiografia si radioscopia:
La animalele de talie mica si mijlocie
Permit diagn. gestatiei tardiv, dupa initierea
osificarii scheletului fetal
Avantaje: precizeaza nr. produsilor, asezarea
si dispunerea lor in uter, diagn. malformatiilor
si monstruozitatilor fetale. Riscuri: aproape
nule, atata timp cat organogeneza este
terminata
Golden Retriever, gestatie 49 zile- Rx lateral si dorsal
2. Electrocardiografia


Inregistrarea grafica a activitatii cardiace materne
(secusele mari) peste care se suprapun secusele
mici (activitatea cardiaca fetala)
Martor al viabilitatii fetale- clinica animalelor mici
3. Metoda Sokolovskaia


Vaca, fidelitate 80%: cresterea densitatii mucusului
cervical la vacile gestante evidentiata printr-o reactie
cu sulfat de cupru
Cu(SO4)2 sol.+ 1 pic mucus
in 5-6 sec. mucusul
cade la fundul paharului (react.+,femela gestanta)
4. CRISTALIZAREA MUCUSULUI CERVICAL LA
VACA


o
Metoda de diagn. a starii de negestatie, fidelitate
Se realizeaza un frotiu din mucusul cervical- se
examineaza la microscop:
In proestru si estru: mucusul cristalizeaza sub forma
unei frunze de feriga, excluzandu-se gestatia
Frotiu din mucus cervical- imagine de “feriga”
5. Examinarea ecografica




Diagnosticul ecografic reprezintă o metodă neinvazivă şi
nedureroasă de vizualizare a diferitelor structuri ale
organismului.
Ultrasunetele- se propaga liniar (f. bine in mediu lichid, nu si
in aer sau mediu solid) si genereaza un ecou la suprafata de
separare intre doua medii cu densitate diferita.
Efectul Doppler: la limita de separare intre cele doua medii
exista particule in miscare (circulatie fetala, placentara, cord
fetal, circ. materna) ce det. modificarea frecventei undei
ultrasonice
Efectul puls-ecou: ecoul este captat si convertit in semnal
acustic/luminos
Frecventa sondei mare = imagine mai clara = penetrabilitate
mai redusa
Diagnosticul ecografic al gestatiei la catea
Aspect ecografic Doppler
Diagnosticul ecografic al gestatiei la catea
Gestaţie, 24 zile: se observă
ecoul hiperecogen dat de
embrion
Gestaţie, 35 de zile: se observă
capul şi corpul fetal, precum şi
brâul placentar
Gestaţie, 35 de zile: secţiune
transversală la nivelul fetusului,
vezicula vitelină, brâul
placentar şi ampula fetală
GESTAŢIE 31 ZILE – SE POT
DECELA
BCF,
SEMN
AL
VIABILITĂŢII FETALE
GESTAŢIE 32 ZILE – SAC
GESTAŢIONAL ÎN CONTACT
CU APEXUL VEZICII URINARE
GESTAŢIE 35 ZILE – BRÂUL PLACENTAR UŞOR DE EVIDENŢIAT
Diagnosticul ecografic al gestatiei la iapa
Gestatie iapa, 57 zile
Gestatie gemelara iapa, 30 zile
Diagnosticul ecografic al gestatiei la scroafa
Gestatie scroafa, 28 zile
Embrioni 28 zile
Metode chimice

Reactia Cuboni
-evidentierea calitativa a hormonilor estrogeni, printr-o
reactie de fluorescenta a estrogenilor in prezenta acidului
sulfuric
-folosita la iapa intre lunile 4-9 de gestatie (estrogeni la nivel
urinar), fidelitate 98%
-15 ml urina+ 3 ml HCl – (incalzire, filtrare, decantare,
racire)- examinare la UV-fluorescenta verde= reactie+
Metode histologice
1.Metoda Benesch-Kurasava, folosita la iapa
- Evidentierea in frotiul de la nivelul mucusului cervical a
celulelor epiteliate ciliate,in mici conglomerate, fara leucocite
2. Metoda Ciurea la scroafa si oaie, fidelitate precoce- 95%
-aprecierea modificarilor histologice ale epiteliului vaginal
anterior (recoltare biopsica, includere in gheata, sectiuni,
colorare)
-la scroafa: in estru epiteliul =20-25 straturi, in metestru 4-5
straturi, in gestatie 2-3 straturi
-la oaie: 10-12 strauturi la negestante, la gestante 3-4 straturi,
cu celule cubice (dupa ziua 40 de gestatie)
Metode biologice
Principiu: evidentierea modificarilor specifice induse de
gonadotropina serica asupra aparatului genital la animalele
de laborator
-gonadotropina serica = h. glicoproteic secretat de cel.
trofoblastului fetal ce invadeaza cupele endometriale in
intervalul 36-120 de zile de gestatie, cu un maxim intre 55-75
Metoda
Animal de experienta
Reactie pozitiva= femela de
testat gestanta
1. Ascheim –Zondeck
Soricele impubere
saptamani
3-4 Ovare cu foliculi maturi, edem tract
genital
2. Freidman- Schneider
Iepuroiace impubere
Foliculi numerosi, hipertrofie uterina
3. Brouha-Hinglais Simmonet
Soareci masculi impuberi
Hipertrofia vez.sem. & testiculara
4. Zavadovschi-Nesmeianova
Cocosi impuberi
Hipertrofia crestei si a testiculelor
5. Galli- Mainini
Broscoi
ex.microsc.al urinii: spermatozoizi
6. Allen-Doisy
Soricele
impubere/castrate
Frotiu din fluidul vaginal:cel Schollen
Metode imunologice
1.
Inhibarea reactiei de aglutinare dintre eritrocitele
de oaie si un ser antiPMSG, daca aceste eritrocite
sunt puse in prealabil in contact cu serul provenit
de la iapa de testat, cand aceasta este gestanta
ERITROCITE
Ser anti PMSG
Aglutinare (martor)
ERITROCITE
Ser iapa de testat
Fara reactii vizibile
ERITROCITE
Ser iapa de testat
Aglutinare=reactie -
Ser anti PMSG
Lipsa aglutinarii=reactie+
(iapa gestanta)
2.Imunoforeza in gel de geloza
-ser antiPMSG concentrat si specific se introduce
intr-un godeu central, intr-o placa Petri, seruri de la
iepele de testat introduse in godeuri periferice
-camp electroforetic - proteinele vor migra specific in
functie de masa lor moleculara, intensitatea liniilor
de precipitare ce se formeaza este d.p. cu cant. de
PMSG din serul de analizat
ser 1
ser 6
ser 2
Ser
antiPMSG
ser 5
ser 3
ser 4
3.Determinarea factorului de gestatie timpurie
-complex proteic dependent de gestatie, produs de
ovar si oviduct care impiedica rejectia embrionului
de catre mama
-se identifica la 24 de ore dupa monta la oaie si 4
ore la scroafa
4. RIA- Ac.antiP se obtin prin inj.repetata a P la iapa
Ac.antiP+ Ag(P din ser,lapte)
Ac-Ag+Ac.antiP (excesul)
Ac.antiP + Ag (P marcat cu tritiu)
Ac - Ag + Ag (excesul)
-cu ajutorul unui spectometru de scintilatie se determina numarul
dezintegrarilor radioactive- se raporteaza la o curba etalon si se
precizeaza astfel cantitatea de P (ng/ml) din ser sau lapte.
5. ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
Acelasi principiu ca RIA, doar Ag este marcat cu o
enzima.
Ag+enzima - determina degradarea unui substrat,
apare o reactie de culoare, a carei intensitate se
determina spectofotometric
Diverse valori ale progesteronemiei la cateva specii domestice
P ng/ml
VACA
SCROAFA
OAIE
0.5
0.5
0.3
0.2-0.3
Faza luteala
>5-6
>5
In gestatie
>2
>2
Mom.recoltarii
dupa monta
18-23 zile 23-24 zile
NIVEL BAZAL
IAPA
2
9
7-8
17-24 zile
>50 zile
1. Godeurile sunt captusite cu un anticorp specific.
2. Se adauga proba (Ac poate capta Ag din proba).
3. Se adauga un Ac secundar de detectie, care se fixeaza pe Ag
capturat de primul Ac.
4. Se adauga substratul enzimatic, care se fixeaza pe complexul
format.
5. Intensitatea culorii complexului format este d.p. cu cant. de
Ag din proba de analizat.
6. Intensitatea se apreciaza spectofotometric la 450 nm.