Transcript 实验八关于一侧迷路视野盲点血红蛋白血型的测定

人体解剖生理学实验
第八课PPT
动物一侧迷路破坏的效应，
视野的测定，
盲点的测定，
血红蛋白测定，
ABO血型鉴定
华南师范大学. 生命科学学院
胡学军设计2012.3.5
题目：
动物一侧迷路破坏的效应
视野和盲点的测定
血红蛋白和ABO血型鉴定
作者：胡学军
日期：2012年4月23日
胡学军设计2012.3.5
引言：
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什么是迷路？迷路功能是什么？p194
什么叫视野？如何测定？p199
什么是盲点？如何检测？p199
什么是血红蛋白？P63
什么是ABO血型？P71
这些实验的基本原理是什么？
今次实验的目的要求是什么？
要记录哪些实验数据？
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实验对象与实验材料
• 蛙 豚鼠 人
• 氯仿、乙醚；常规手术器械、探针、棉球、滴管、
水盆、蛙板、纱布
• 视野计 遮眼板 米尺 白色、黑色、红色和绿色视
标 视野图纸 白纸 铅笔
• 一次性刺血针 细长滴管 小试管 75%酒精棉球 吸
耳球 0.1mol/L盐酸 一次性毛细取血管 稀释管 比
色架
• 0.9%生理盐水
• 双凹玻片 消毒牙签 抗B定型试剂（黄色，标准A
型血清）抗A定型试剂（蓝色，标准 B型血清）
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实验方法
(一）蛙类一侧迷路破坏的效应
1. 先观察蛙正常姿势和游泳（对照）
2. 用纱布包住蛙的躯干部，使其腹面向上握于左手
中，翻开下颌用左手拇指压住。用手术剪沿颅底
中线剪开黏膜(勿损伤中线两侧的血管)，向两侧
分离，可看到“十”字形的副蝶骨。迷路位于副
蝶骨横突的左右两旁。用手术刀削去薄薄一层骨
质，可看到小米粒大的白点，此处即是内耳囊。
将毁髓针刺人内耳囊2--3mm，转动针尖，搅毁其
中的迷路。
3. 观察蛙游泳和姿势
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（二）豚鼠迷路破坏的效应（示范）
• 取正常豚鼠一只，侧卧保定，使动物头部侧位不
动，抓住耳廓轻轻上提暴露外耳道，用滴管向外
耳道深处滴注2～3滴氯仿。氯仿通过渗透作用于
半规管，破坏该侧迷路的机能。7～10min后放开
动物，观察动物头部位置、颈部和躯干及四肢的
肌紧张度。
• 可见到动物头部偏向迷路功能破坏了的一侧，并
出现眼球震颤症状。任其自由活动时，可见豚鼠
向迷路功能破坏了的一侧作旋转运动或滚动。
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（三）视野的测定（2人配合）
1. 观察视野计的使用
2. 明亮光线下调节眼和弧架中心点在同一水
平线上
3. 遮一眼，另一眼凝视中心点。实验者从周
边向中央移动紧贴弧架的白色视标，直到
受试者看到，记下刻度。重复测试一次，
得到相同结果后标记在视野图纬度上。
4. 下一次转45°角，重复步骤3，共测8个刻
度
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5.换红色、绿色视标重复上述步骤测红色和绿
色视野大小范围。
6.同法可测另一眼。
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（四）盲点的测定
1. 将白纸贴在墙上，受试者立于纸前50cm处，用遮跟板遮
住一眼，在白纸上与另一眼相平的地方用铅笔划一“+”
字记号。令受试者注视“+”字。实验者将视标由“+”字
中心向被测眼颞侧缓缓移动。此时，受试者被测眼直视
前方，不能随视标的移动而移动。当受试者恰好看不见
视标时，在白纸上标记视标位置。然后将视标继续向颞
侧缓缓移动，直至又看见视标时记下其位置。由所记两
点连线之中心点起，沿着各个方向向外移动视标，找出
并记录各方向视标刚能被看见的各点，将其依次相连，
即得一个椭圆形的盲点投射区。
2. 根据相似三角形各对应边成正比定理，可计算出盲点与
中央凹的距离及盲点直径。
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血红蛋白和ABO血型的测定
取血
方法1：
扎手指取血，一血两用：血红蛋白和血型的测定，
要求动作快，难度大。
方法2：试管法，取试管一支，加0.9%生理盐水5
滴，用于制备红细胞生理盐水悬液。具体操作
参考有关资料。
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（五）比色法测血红蛋白
• （1） 先检查血红蛋白计的测定管和吸血管是否清洁，如
不清洁则依次用自来水、蒸馏水(３次)、９５％酒精(２次)
和乙醚(１～２次)清洗。
• （2）将０.１mol/L盐酸加入测定管中至刻度“２”或“１
０％”处。
• （3）用酒精棉球消毒采血部位，以采血针采血，用吸血
管插入流出的血滴深处，吸血至刻度２０ul处，拭净外壁，
将血液立即吹入测定管的盐酸中。反复吸吹，使吸血管中
血液全部进入盐酸液中(避免起气泡)。混匀，１０min后，
逐滴加入蒸馏水使液体颜色变浅，边加边混匀并与标准比
色板比较，至二者颜色相同止。
• （4）读出测定管内液体凹面最低处的刻度，即为每１０
０mL血液中血红蛋白的克数。另一方面刻度表示百分率，
可参照血红蛋白计的说明换成克数以核对读数。
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（六）ABO血型的测定
1. 取一载玻片，左右两侧分别滴加抗A（蓝
色）和抗B（橙黄）标准血清。
2. 常规消毒，用70%的酒精棉球对采血部位，
采血针，牙签进行消毒。
3. 穿刺采血部位，用牙签取血后，放在抗A
血清中混匀，同样方法用另一根牙签（或
牙签的另一端）取血放在抗B血清中混匀。
4. 观察现象
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注意事项
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氯仿有毒性
单眼注视一点，勿转动
消毒针和手指
不要混用混淆血液：牙签两端
摇晃与静置 均匀
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作业：实验报告
实验报告要求文字通顺，简洁明了，书写工整。报告
的项目及要求如下：
1．实验题目
2．实验日期、室温、作者及合作者
3．实验对象或材料
4．实验方法(简要说明)
5．实验结果(是报告的主要部分)
6．讨论(根据已知的理论知识对该实验结果进行解释
和分析)
7．结论(对实验结果中所能验证的概念、原则或理论，
作出简明的概括和总结。必须注意在结论中不应罗
列和重复具体的实验结果，更不能将实验中未能得
到充分证实的理论和判断写入结论)。
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附录：本次实验相关原理参考
• 视力又称视敏度，指眼（中央凹）分辨物体细微结构的功
能力。
• 临床规定，当能分辨二点间最小视角为1分时，视力为1.0，
两点距离为1.5mm。
• 视野是单眼固定注视正前方时所能看到的空间范围，又称
为周边视力，也就是黄斑中央凹以外的视力。借助此种视
力检查可以了解整个视网膜的感光功能，并有助于判断视
觉传导通路以及视觉中枢的机能。
• 正常人的视力范围在鼻侧和额侧的较窄，在颞侧和下侧的
较宽。在相同的亮度下，白光的亮度最大，红光次之，绿
光最小。不同颜色视野的大小，不仅与面部结构有关，更
主要的是取决于不同感光细胞在视网膜上的分布情况。
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弧形视野计
• 最常用的是弧形视野计。他是一个安在支架上的
半圆弧型金属板，可围绕水平轴旋转360°。该圆
弧上有刻度，表示由点射向视网膜周边的光线与
视轴之间的夹角。视野界线即以此角度表示。在
圆弧内面中央装一个固定的小圆镜，其对面的支
架上附有可上下移动的托颌架。测定时，受试者
的下颌至于托颌架上。托颌架上方附有眼眶托，
测定时附着在受试者眼窝下方。此外，视野计附
有各色视标，在测定各种颜色的视野时使用。
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【盲点基本原理】
• 视网膜在视神经离开视网膜的部位
（即视神经乳头所在的部位）没有视
觉感受细胞，外来光线成像于此不能
引起视觉，故称该部位为生理性盲点。
由于生理性盲点的存在，所以视野中
也存在生理性盲点的投射区。此区为
虚性绝对性暗点，在客观检查时是完
全看不到视标的部位。
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• 根据物体成像规律，通过测定生理性
盲点投射区域的位置和范围，可以根
据相似三角形各对应边成正比的定理，
计算出生理盲点所在的位置和范围。
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• 根据相似三角形各对应边成正比定理，可
计算出盲点与中央凹的距离及盲点直径。
– 盲点距中央凹的距离＝盲点投射区至
“＋”字距离×15/500(mm)
– 盲点直径＝盲点投射区直径×15/500(mm)
【参考值】
• 生理性盲点呈椭圆形，垂直径7.5cm±2cm，
横径5.5cm±2cm。
• 生理性盲点在注视中心外侧15.5cm，在水
平线下1.5cm。
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眼的折光装置
包括角膜、房
水、晶状体和
玻璃体
前房
虹膜
角膜
巩膜静脉窦
睫状体
后房
瞳孔
晶状体
玻璃体
巩膜
视神经盘
视神经
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中央凹
 内膜(视网膜 retina)：内外两层
色素上皮层
外层：色素上皮层
水平细胞
内层：具有感光功
视杆细胞
能的视部
视锥细胞
视网膜
双极细胞
无长突细胞
神经节细胞
光路
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视野
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盲点
视神经乳头
视神经盘
黄斑
中央凹
黄斑
中央凹
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视神经盘
血红蛋白和ABO血型的测定
基本原理参考
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基本原理
• 血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一
定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白
质。血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作
用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床
上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。
• 测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量
的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红
素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml血
液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml血液平均含14.4g，
女子为13.1g。
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测定血红蛋白的意义
• 人血红蛋白参考值 成年男性：13--15克/dl ；成年女性：11--14克/dl ；
儿童：（依年龄而异）12--14克/dl。
• 临床意义：大致与红细胞增减相似。高原地区居民的血红蛋白浓度一般
比平原居民为高，这是机体对低气压环境的一种适应现象。一般来说，
在疾病状况下，血红蛋白的增减是与红细胞的改变相平行的，即引起红
细胞增多的疾病，也会使血红蛋白含量增加。使红细胞减少的疾病，也
使血红蛋白含量减少。在贫血时，血液中的红细胞数量和血红蛋白浓度
都有不同程度的下降，但不一定按相同的比例变化。有时红细胞数量可
以减少很多，而血红蛋白的浓度的降低却相对地不那么显著，见于大细
胞性贫血，由于单个红细胞所含的血红蛋白量较正常者为多。相反，也
有的红细胞减少得不很多，而血红蛋白浓度却显著降低，例如缺铁性贫
血，这是由于每个红细胞的血红蛋白含量比正常明显减少，故血红蛋白
减低的程度较红细胞减少更为显著。 依据检验结果，分析病因，做到准
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确的诊断和治疗都是很必要的。
血红蛋白的生理特性
• 除了运载氧，血红蛋白还可以与二氧化碳、
一氧化碳、氰离子结合，结合的方式也与
氧完全一样，所不同的只是结合的牢固程
度，一氧化碳、氰离子一旦和血红蛋白结
合就很难离开，这就是煤气中毒和氰化物
中毒的原理，遇到这种情况可以使用其他
与这些物质结合能力更强的物质来解毒，
比如一氧化碳中毒可以用静脉注射亚甲基
蓝的方法来救治。
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正常参考值及异常结果分析
正常参考值（在我国平原地带）
成年男性：120～160g/L
成年女性：110～150g/L
新 生 儿：170～200g/L
儿
童：110～160g/L。
• 一般成年男性血红蛋白＜120g/L,成年女性血红蛋白＜110g/L则为贫血。
• 根据血红蛋白减低的程度贫血可分为四级。
轻度：血红蛋白<90g/L、
中度：血红蛋白90～60g/L、
重度：血红蛋白60～30g/L、
极度：血红蛋白＜30g/L。
红细胞和血红蛋白减少分为生理性和病理性两种。
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人类的血型
凝集原：人类红细胞膜上存在不同的特异糖蛋白
抗原，称为凝集原。
凝集素：血浆中存在着能与红细胞膜上相应凝集
原发生反应的抗体，称为凝集素。
凝集：将含有不同凝集原的血混合，将会发生红
细胞聚集成簇，同时伴有溶血发生，这种现象称
为红细胞凝集。
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人类的血型
凝集反应是红细胞膜上的凝集原和血浆中相应的凝
集素发生了抗原抗体反应造成的。
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人类的血型
A型：红细胞表面只含有凝集原A
B型：红细胞表面只含有凝集原B
AB型：红细胞表面同时含有凝集原A、B
O型：红细胞表面凝集原A、B都不存在
A
红细胞抗原
（凝集原）
A
血浆中抗体
（凝集素）
抗B
B
B
抗A
AB
AB
无抗A或无抗B
O
或A或B
抗A或抗B
血型
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一、人类的血型
ABO血型鉴定原理：利用抗原、抗体发生特异性结
合的原理。
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ABO血型鉴定
A型血清(抗B)
A型
B型
AB型
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B型血清(抗A)
附件1 动物生理学实验技术
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附件2：生理实验中生理盐水的配制
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附件3：探究实验设计和实验方法研究
参考《生理学实验》第3版 P27~35
（1）实验设计：
设计目的：科学思维、创新、钻研、科学态度
设计要求：创新性、有文献、科学性与可行性
设计原则：科学公正、条件一致、对照重复、量效
关系、测试定标、统计处理、综合论证
（2）实验的组织和实施
（3）生理学实验方法的研究
（4）实验报告的撰写
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附件 实验设计的内容
• 1.实验原理，包括立题的理论根据；拟采取的研究路线、
实验方法、使用的仪器设备的工作原理。
2.实验方案、技术路线，即先作啥、后做啥，由几个实验
组成，分几个层次完成；是依次完成或是平行完成，每个
过程（实验）的因果关系或递进关系、平行关系。要有通
过多方面的实验可取得目标性成果的方案。
3.实验方法步骤，具体每一个实验的方法步骤（如同实验
指导），要具体到药品的配制、动物标本（或动物模型）
的制备、仪器线路的连接等这一步要尽量详尽。
4.所需的仪器、器械、药品、动物、辅料，要明确名称、
规格、数量、厂家，动物还要标出大小、雌、雄、健康、
饲喂（驯养）条件等。
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