Transcript Ariane Zamoner SAF

Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Estudo de novos biomarcadores em
câncer de próstata e instalação do banco
catarinense de tumores e tecidos
Coordenadora: Ariane Zamoner Pacheco de Souza
Equipe: FLÁVIO LOBO HELDWEIN; ANTÔNIO ATALIBIO HARTMANN;
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Câncer de próstata
A saúde do homem idoso aparece como uma das mais relevantes áreas
de atenção no SUS. O tumor prostático é o tumor mais comum em
homens com mais de 50 anos de idade.
Os refinamentos em âmbito nacional resultaram em aumento da
expectativa de vida e, consequentemente, no envelhecimento da
população atendida pelo SUS. Espera-se, portanto, para as próximas
décadas um maior número de pacientes diagnosticados com a doença.
O desenvolvimento de técnicas que permitam o diagnóstico
precoce dessa neoplasia podem ser extremamente úteis no
prognóstico da doença.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Fatores supostamente associados ao desenvolvimento
da neoplasia prostática
Fator genético (história familiar).
Fator hormonal: regressão do tumor com a supressão dos
hormônios masculinos.
Dieta: dietas hiperlipídicas predispõem ao desenvolvimento
tumoral (dados epidemiológicos).
Fatores ambientais e/ou regionais: fumaça de automóveis,
cigarro, fertilizantes e outros produtos químicos.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Taxa de incidência anual de neoplasias malignas por 100.000
habitantes, por localização, segundo Região
Sexo masculino - Brasil - 2006 e 2007
Região e
UF
Pulmão,
traquéia e
brônquios
Esôfago
Estômago Cólon, junção
retossigmóid
e, reto e ânus
Próstata
Lábio e
Melanoma
cavidade oral maligno da
pele
Brasil
Região
Norte
Região
Nordeste
Região
Sudeste
Região
Sul
Região
CentroOeste
19,41
8,64
16,30
12,36
51,41
10,91
2,92
Outras
neoplasias
malignas da
pele
60,74
7,99
1,82
10,71
2,96
22,04
3,12
0,56
29,66
8,07
3,47
9,07
4,07
34,53
5,48
0,78
43,61
23,59
10,68
20,29
16,89
63,26
15,33
3,71
69,57
36,96
17,38
22,97
21,52
68,13
14,53
6,60
89,01
15,55
6,41
13,29
9,60
46,00
7,27
1,77
52,37
Fonte: Ministério da Saúde/Instituto Nacional do Câncer – Inca
Fonte: http://tabnet.datasus.gov.br/cgi/idb2009/d05_08ufm.htm
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Taxa de incidência anual de neoplasias malignas por 100.000 habitantes,
por localização, segundo Região e UF
Sexo masculino - Brasil - 2008 e 2009
Região e UF
Pulmão,
traquéia e
brônquios
Esôfago
Estômago
Cólon, junção
retossigmóide
, reto e ânus
Próstata
Lábio e
cavidade oral
Melanoma
maligno da
pele
Brasil
18,86
8,35
14,92
13,23
52,43
11,00
3,09
Outras
neoplasias
malignas da
pele
59,16
Região Norte
8,04
1,88
9,92
3,11
22,09
3,23
0,68
27,40
Região
Nordeste
8,55
3,62
9,18
4,40
37,97
5,93
0,86
46,78
22,45
10,16
18,01
18,97
63,17
15,21
3,76
67,97
35,60
16,64
20,94
20,58
68,72
14,38
7,31
82,13
15,68
6,36
12,18
9,95
46,66
7,74
1,88
45,04
Região
Sudeste
Região Sul
Região
Centro-Oeste
Fonte: Ministério da Saúde/Instituto Nacional do Câncer - Inca
Fonte: http://tabnet.datasus.gov.br/cgi/idb2009/d05_08ufm.htm
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Realidade da região SUL do Brasil, em especial SC
•A agroindústria: pilar econômico, principalmente da região Oeste
Catarinense
•Excesso de agrotóxicos utilizados na agricultura
•Correlações em estudos do consumo de agrotóxicos com anormalidades
endócrinas e reprodutivas
•Trabalhadores rurais como população vulnerável
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Por que falar de agrotóxicos?
Agroquímicos como desreguladores
endócrinos
Alterações morfológicas do esperma, neoplasias, abortos e defeitos congênitos,
decréscimo na idade do início da puberdade, disfunções hormonais
Experiência prévia:
HORMÔNIOS X REPRODUÇÃO
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Levantamento da exposição ocupacional a agentes químicos
disruptores do sistema endócrino nos trabalhadores rurais de
municípios do oeste catarinense
• 924 indivíduos, sendo 508 homens entre 18 e
85 anos de idade
• 98,48% dos agricultores utilizavam Roundup®
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Tabela 10. Frequência absoluta de neoplasias, alterações endócrinas
e reprodutivas nas famílias estudadas entre os anos de
2000 a 2006, municípios da 29ª SDR, 2007.
Variáveis
Frequência absoluta*
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Neoplasias
Pulmão, traquéia e brônquios
Esôfago
Estômago
Cólon, reto e ânus
Próstata
Mama
Colo do útero
Neoplasias da pele
Testículo
Hipófise
Tireóide
Leucemia
Fígado
Garganta
4
1
5
1
10
7
7
10
2
2
1
9
4
2
Alterações Reprodutivas
Criptorquidia
Dificuldade para engravidar
Abortos
Aborto por anencefalia
Partos pré-maturos
Infertilidade
Endometriose
2
9
38
5
6
2
5
Alterações tireoídeanas
Hipertireoidismo
15
10/398
indivíduos, se extrapolarmos:
Secretaria de Estado
da
Saúde
Hipotireoidismo
18
Secretaria
de
Estado
do
Desenvolvimento
1968 / 100.000Econômico
indivíduos
Total
165
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Biomarcadores para tumor
prostático
PSA: fraca associação com mortalidade
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Gene Twist inativo: as células
tem grande adesão entre si
(expressão de caderina e
cateninas em verde).
Gene Twist superativo:
diminui a expressão de
caderinas.
Células perdem a adesão e
podem se dispersar,
ocasionando metástases
Yang et al.Cell, 117: 927-939, 2004
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Metalloproteinases da
matriz (MMPs), são
envolvidas na degradação
da matriz extracelular, que é
essencial para processos
como metástases e
angiogênese.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Novos biomarcadores propostos para
estágios iniciais do desenvolvimento
tumoral
•
•
•
•
•
•
PTEN: perda desta fosfatase associada a ativação Akt/mTOR
AMACR
PCA3
PSCA
SRD5A1
CYP17A1
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sítios de ação de drogas utilizadas no
tratamento de tumor prostático.
Sustentável
Detchokul & Frauman.
British J. of Clinical Pharmacol, 2011.
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Objetivo
Detectar polimorfismos nas metaloproteinases da matriz
extracelular e a hipermetilação no promotor do gene
TWIST em tecidos tumorais e definir sua associação
quanto à predisposição do câncer de próstata.
Implementar o Banco de Tumores e de DNA em Santa
Catarina para utilização em pesquisas que visem a
definição do perfil genético de tumores em nossa região.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Metodologia
Identificar grau de metilação do gene TWIST através de
PCR em tempo real e polimorfismos na
metaloproteinases (através de sondas marcadas
com fluoróforos). Polimorfismo de nucleotídeo único
demonstrado em MMP.
Implantação de uma unidade de pesquisa com sistema
para identificação, armazenamento e recuperação
de amostras de tecido e DNA.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Metodologia
ANÁLISE GENÉTICA: O DNA genômico será extraído dos tecidos
parafinados, a partir do sangue periférico e da coleta de urina após
massagem prostática padronizada imediatamente antes da realização
das biópsias trans-retais.
Será utilizada a técnica do PCR em tempo real, utilizando sondas
específicas para aumentar a especificidade e sensibilidade da
detecção. A adição de sondas fluorescentes torna a técnica mais
informativa, quantitativa, e adequada ao formato clínico.
Níveis altos ou baixos de metilação podem ajudar a estratificar diferentes
tipos ou estágios do carcinoma.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Metodologia
CRITÉRIOS DE INCLUSÃO:
Os homens devem possuir os seguintes critérios clínicos e patológicos de
doença indolente pré-operatório:
(a) grau histológico da biópsia (Escore de Gleason ≤7)
(b) diagnóstico de adenocarcinoma de próstata evidenciado em apenas 1
fragmento positivo da biópsia prostática em um mínimo de 6 fragmentos
(sextante);
(c) estágio clínico T1c e T2a registrado pelo médico auxiliar conforme
AJCC/TNM 1992, além de concordar e assinar o TCLE. Pacientes serão
excluídos se tiverem sido tratados de forma neoadjuvante ou pela falta
de registro de informações.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Equipamentos adquiridos:
-Freezer -860C equipado com backup de CO2
-Espectrofotômetro UV/Vis
-Balança
-pHmetro
-Pipetas
-Tanque de nitrogênio para transporte de material
-Estufa de CO2
-Cilindro de gas
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Metodologia
Banco de tumores:
PRETENDIA-SE utilizar a plataforma de bioinformática, que foi
especialmente desenvolvida para atender a organização e o
armazenamento de dados da rede do Banco Nacional de Tumores (BNT).
A equipe do BNT desenvolveu protocolos de coleta, armazenamento e
transporte das amostras que garantem ao pesquisador o controle de
qualidade total para as pesquisas na área de genômica e proteômica. O
BNT havia colocado-se inteiramente a disposição para a
implementação do banco catarinense de tumores, iniciativa de grande
impacto para o SUS, assim como para o desenvolvimento da ciência e
da tecnologia em saúde para o Estado de SC.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada
Rainha
de
Souza
UFSC
Resultados e Discussão
A Diretoria do HU e os pesquisadores estiveram reunidos com a Direção do
Banco Nacional de Tumores do Instituto Nacional do Câncer (Dr. José Claúdio
Casali da Rocha, pesquisador líder do BNT-INCA) e acordaram com a
implementação do Biobanco seguindo normas do BNT, estabelecendo um
convênio formal entra a UFSC e o INCA. Áreas físicas: prédio anexo ao HU.
Participação da consulta pública do SUS, votando e contribuindo para
a portaria que aprova as diretrizes nacionais para Biorrepositórios e Biobancos
no país.
Através do convênio com o INCA alguns aparelhos seriam cedidos pelo INCA.
O grupo aguardou instruções e efetivação do convênio, que até o momento
não ocorreu. A nova direção do INCA informou que não terá condições de
manter o acordo feito anteriormente.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Resultados e Discussão
O projeto é apoiado pelo BNT/INCA, que havia se responsabilizado pela
implementação do banco de tumores catarinense na UFSC.
O BNT faria o treinamento dos membros da equipe em todos os passos de
montagem e implementação do banco de tumores catarinense, assim
como na implementação dos “softwares” para controle de estoque do
material. Entretanto, com a mudança do diretor do INCA a UFSC encontrase em estágio de negociação sobre como será a participação do INCA no
projeto.
O suporte financeiro da FAPESC para este projeto está sendo fundamental
na tentativa de concretização e viabilidade deste projeto.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
• Segunda visita técnica do representante do
INCA ocorreu no final de julho de 2011.
• Já foram coletadas amostras que estão
armazenadas em parafina tamponada para
análise genômica assim que chegarem os
próximos reagentes.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Impactos do Projeto
Um dos grandes desafios das pesquisas sobre o câncer de próstata é
como identificar os genes silenciados nos estágios iniciais do
desenvolvimento tumoral, e que podem ajudar potencialmente no
diagnóstico precoce e/ou funcionarem como marcadores terapêuticos para
o desenvolvimento de futuras medicações alvo-específicas.
A detecção desta neoplasia em estágios iniciais é a fundamental para um
tratamento bem sucedido e para uma resposta favorável, atendendo uma
das demandas específicas da saúde pública da SES.
Espera-se, na seqüência das pesquisas, também chegar-se a melhor
compreensão do papel de determinados genes no câncer de próstata como
biomarcadores em potencial. O desenvolvimento de marcadores tumorais
está em consonância com a política nacional e estadual de saúde.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Impactos do Projeto
No momento atual vivido pelo Brasil, cabe ressaltar ainda que este tema
tem recebido atenção de vários segmentos da sociedade, desde a
administração pública, via Instituto nacional do Câncer (INCA), que está
atualmente tratando deste tema, via elaboração de um Banco Nacional de
Tumores (BNT) instituído em e coordenado pelo Ministério da Saúde,
expandindo continuamente a pesquisa genética brasileira em oncologia
para diversos Estados da União, para fazer face a demanda crescente
ocasionada pelo envelhecimento da população brasileira.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Aplicabilidade para o SUS
Após a implementação e funcionamento pleno do banco de
tumores,
poderemos
fornecer
condições
para
desenvolvimento de estudos na área de marcadores de
diagnósticos e terapêuticos em amostras representativas da
população catarinense.
Além disso, será possível permitir que sejam padronizados
e informatizados os procedimentos de coleta de amostras,
dados clínicos e seguimento de pacientes para estudos
prospectivos de tumores prostáticos.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Produção Científica
Produção de artigos científicos a serem publicados em
periódicos internacionais.
Biobanco de amostras tumorais e DNA que poderá ser
analisado mesmo no futuro, fornecendo uma importante
biblioteca genética.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Considerações Finais
Os dados desta pesquisa poderão auxiliar no melhor entendimento das
alterações moleculares em câncer de próstata, podendo ser utilizado como fator
prognóstico, bem como poderá influenciar a indicação e escolha de tratamentos e
a possível prevenção de complicações.
A hiperexpressão de TWIST resulta na perda da adesão célula-célula
favorecendo o potencial de metástases precoces e da agressividade do tumor,
podendo portanto ser utilizado como fator prognóstico da doença.
A instalação do banco de tumores em Florianópolis já está em andamento e em
breve o Estado terá um banco de dados genéticos de sua população. Depois de
conversa com o diretor do INCA (Dr. José Claúdio Casali da Rocha), foi proposto
que o banco de tumores, seja utilizado para armazenar amostras de diversos
tecidos tumorais, o que deixará um banco de DNA para inclusive análises futuras.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Considerações Finais
Os resultados a serem obtidos com este projeto permitirão um melhor
entendimento das neoplasias prostáticas e permitirão a difusão dos
conhecimentos obtidos, assim como a geração de prováveis novas
técnicas para diagnóstico desta importante patologia.
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável
Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Agradecimentos mais que especiais
• FAPESC
• Fernanda: disponibilidade, atenção,
generosidade
• CNPq
• SES
• DECIT
• SUS
Secretaria de Estado da Saúde
Secretaria de Estado do Desenvolvimento Econômico
Sustentável