Transcript Luiz Miletti SAF

Ilíada Rainha de Souza - UFSC
Determinação do genótipo de Giardia sp
em fezes de crianças, cães e animais de produção
residentes na região periférica da cidade de Lages, SC.
Coordenador: Prof. Dr. Luiz Claudio Miletti
Laboratório de Bioquímica de Hemoparasitas e Vetores- CAV-UDESC
Equipe: Med. Vet. MSci Rosiléia Marinho Quadros- UNIPLAC
Med. Vet. MSci Carlos José Raupp Ramos- UFFS-campus Laranjeiras do Sul
Acadêmicos: Cícera Regina Lazzarotto (UDESC)
Geison William Ezequiel (UNIPLAC)
Paulo Henrique Extterchotter Weiss (UNIPLAC)
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Introdução - Giardíase
 Infecções por giárdia podem causar significativas alterações sistêmicas,
entre elas: anorexia, letargia, vômitos, diarréia e perda de peso.
 Animais doentes são potenciais fontes de infecção para os seres
humanos e outros animais..
 A ingestão de apenas 10 cistos já é capaz de desencadear a infecção
clinica em humanos e cães.
 Animais assintomáticos, são cada vez mais freqüentes, aumentando a
população de portadores não tratados.
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Introdução - Giardíase
 Testes de rotina dificultam o diagnóstico da enfermidade. O exame direto de fezes pode revelar falsos
resultados negativos.
 Os testes tradicionais de flutuação são inadequados e poucos sensíveis em detectar a giardiase.
 A não repetição desses testes pareadamente, pode comprometer o sucesso do diagnóstico laboratorial
(1 amostra = 70% de acerto / 3 amostras = 96% de acerto).
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Genótipos
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Objetivos
GERAL :
Determinar o genótipo de Giardia sp em fezes de crianças,cães e animais de produção residentes na
região periférica da cidade de Lages, SC.
ESPECÍFICOS :
 Determinar a freqüência de cistos de Giardia sp em fezes de crianças assim como o sexo, idade e
escolaridade de maior frequência de Giardia com genótipo zoonótico em fezes de crianças
analisadas;
 Determinar a ocorrência e freqüência de Giardia sp em cães domiciliados, correlacionado com o
sexo e a idade do animal;
 Determinar a relação entre as amostras positivas entre as fezes de crianças e de cães analisados;
 Determinar através do teste de ELISA a presença de antígenos específicos para Giardia sp em
amostras de fezes de crianças e cães;
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Objetivos
Alterações na 2ª fase:
 Os animais de produção foram retirados , uma vez que se
observou que poucas casas tinham esses animais em seu
entorno.
 Adicionou-se amostras de cães errantes recolhidos a CCZ de
Lages.
 Adicionou-se amostras cedidas por um laboratório particular da
cidade de Lages.
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Metodologias
1. Prospecção geográfica - Contato com as escolas
2.
Questionário circunstanciado - Coleta de amostras
3. Avaliação parasitológica – Teste de Faust e Teste de Hoffmann
4. Teste de ELISA - RIDASCREEN® Giardia (r-biopharm)
5. Extração de DNA – QiAmp® DNA Stool Kit ( Qiagen)
6. PCR-RFLP – Protocolo segundo Read et al 2004
Read et al, 2004. Discrimination of all genotypes of Giardia duodenalis at the glutamate
dehydrogenase locus using PCR-RFLP. Infect. Gen. Evol 4, 125-130.
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Metodologias
Amostras positivas por Faust ou Hoffman
Amostras negativas por Faust ou Hoffman
Teste de ELISA
Extração DNA
+
PCR- RFLP
PCR-RFLP
-
PCR-RFLP
(10%)
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Resultados e Discussão
CCZ- Lages – Amostra de 357 cães errantes:
 7,8% com exame parasitológico positivo
05 escolas do município de Lages – 193 amostras ( 101 cães e
92 crianças) de 75 residências
 Positivas para exame parasitológico (21): 9,9% dos cães e
11,9% das crianças.
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Resultados e Discussão
Laboratório particular– Amostra de 472 crianças:
 4,44% com exame parasitológico positivo
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Resultados e Discussão
 Dificuldade na
extração pelos
métodos descritos na
literatura.
 Padronização da
quebra dos cistos por
sonicação.
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Resultados e Discussão
Uso dos primers da glutamato desidrogenase
External Forward Primer GDHeF: TCA ACG TYA AYC GYG GYT TCC GT
Internal Forward Primer GDHiF: CAG TAC AAC TCY GCT CTC GG e
Reverse Primer GDHiR: GTT RTC CTT GCA CAT CTC C.
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Impactos do Projeto – Científico
1. Primeiro trabalho sobre a genotipagem de Giardia sp no Estado de
Santa Catarina.
2. Aumento do conhecimento dos genótipos circulantes e sua correlação
zoonótica.
3. Publicação de resumos e artigos científicos de divulgação.
4.
Formação de recursos humanos na área de pesquisa em Saúde
(acadêmicos).
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Impactos do Projeto – Econômico/Social
1. Demonstrar a importância higiene para evitar infecções.
2. Demonstrar a importância dos cães errantes como vetores de zoonoses.
3. Demonstrar a importância do cuidado responsável dos animais.
4. Prover mais dados epidemiológicos para campanhas de
conscientização sobre a portabilidade responsável.
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Aplicabilidade para o SUS
 Conhecimento da distribuição espacial dessa zoonose na região
Serrana de Santa Catarina.
 Visão geral da epidemiologia (circulação de diferentes genótipos).
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Melhor gerenciamento de recursos para saneamento básico.
Aplicabilidade de ferramentas de diagnóstico.
Educação para saúde junto a comunidade.
Vacinação de cães em conjunto com centro de zoonoses.
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Produção Científica
1.
Occurrence of parasites of zoonotic importance in stray dogs collected in Center for Zoonosis Control (CCZ) of Lages,
Santa Catarina. – Resumo apresentado no 23rd. International Conference of the World Association for the Advancement of
Veterinary Parasitology em Buenos Aires-ARG, de 21-25 de agosto de 2011.
2.
Prevalência de Giardia duodenalis em fezes de crianças e câes residentes em bairros periféricos da cidade de Lages, SC,
Brasil. - Resumo apresentado no XXII Congresso Brasileiro de Parasitologia em São Paulo-SP, de 24-27 de agosto de
2011.
3.
Prevalência de Giardia duodenalis em cães errantes recolhidos pelo Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Lages, SC,
Brasil.- Resumo apresentado no XXII Congresso Brasileiro de Parasitologia em São Paulo-SP, de 24-27 de agosto de
2011.
4.
PREVALENCE OF Giardia intestinalis IN FAECES FROM CHILDREN, PET AND STRAY DOGS IN LAGES, SANTA
CATARINA, BRAZIL. Resumo aser apresentado no XVIII International Congress for Tropical Medicine. Rio de janeiro, 2012
5.
Prevalence of Giardia duodenalis among dogs seized by the Center for Control of Zoonoses (CCZ) of the City of Lages,
Santa Catarina, artigo a ser submetido ao periódico Zoonoses and Public Health
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Considerações Finais
 Dificuldade:
 Conscientização da população em colaborar com a pesquisa.
 Padronização da extração de DNA.
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Agradecimentos
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