Transcript Recherche de la thermonucléase

RECHERCHE DE LA
THERMONUCLÉASE
Test d’identification de Staphylococcus aureus
SOMMAIRE
1.But
2.Composition
3.Principe
4.Utilisation
5.Lecture
BUT
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La thermonucléase est une enzyme spécifique que seules quelques
espèce bactériennes possèdent. Ce test est donc un test
d’identification de l’espèce pathogène Staphylococcus aureus.
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C’est donc un test fondamental pour identifier S.aureus mais il faut
compléter ce test d’indentification par d’autres tests : recherche de
la protéine A, recherche de la coagulase libre, etc.
COMPOSITION DU MILIEU POUR
LA RECHERCHE
ADN
Bleu de toluidine
Chlorure de calcium
Chlorure de sodium
Agar
Tampon TRIS pH:9
Ce « milieu » ne permet pas la croissance des bactéries !!!
PRINCIPE
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Il suffit de mettre la bactérie portée 10 minutes à 100°C en
présence
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du substrat de l’enzyme : l’ADN
ainsi que d’un indicateur d’ADN : le bleu de toluidine
Si la bactérie possède la thermonucléase :
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l’enzyme résiste à la chaleur
l’enzyme dépolymérise l’ADN en nucléotides ce qui fait virer au rose le
bleu de toluidine.
UTILISATION
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Réaliser des puits réguliers
Réaliser un repérage des dépôts sur les tranches de la boîte de
Pétri
Déposer la suspension bactérienne de façon suffisante (ne pas
déborder!!!)
Dans le cas d’un test de recherche de thermonucléase, test le
plus souvent réalisé, il faudra appliquer un traitement thermique
à la suspension bactérienne.
Incuber 24h, 37°C, NE PAS RETOURNER LA BOITE
Lire
FIN
bon courage à vous!!!