Transcript BACTERIES

Objectifs:
- On veut prouver l’existence d’un patrimoine génétique dans tous
les êtres vivants.
- On cherche à savoir si le patrimoine génétique est identique chez
toutes les espèces.
- On cherche à savoir si le patrimoine génétique est transmissible
expérimentalement d’une espèce a une autre.
Existe-t-il un matériel
génétique chez tous les êtres
vivants?
On veut extraire de l’ADN de différentes espèces
cellulaires telles que:
- Espèce végétale : l’oignon
- Espèce animale eucaryote* pluricellulaire : la salive
- Espèce animale eucaryote pluricellulaire : foie de
souris
- Espèce animale procaryote** : bactéries
*: cellule contenant un noyau
**: cellule n’ayant pas de noyau
Matériel
Adn
humain
Adn
d’oignon
Adn de
foie
Adn de
bactéries
- Salive
-Oignon
- Tube a essai
de 50ml
- Tampon (TE*,
SDS, Na Cl)
- Une
centrifugeuse
- Alcool
(éthanol)
-Un morceau de
foie (2g)
- un Potter
- Tube de 50
ml
-Tampon
(TE*,SDS,NaCl)
-Alcool
(éthanol)
-Bactéries
- une
centrifugeuse
- Étuve
- milieu de
culture
- Tampon (
TE*+ SDS+
NaCl)
-Alcool
(éthanol)
- Tube à essai
de 15ml
-Tampon (
TE*,SDS, Na
Cl)
- Alcool
(éthanol)
*: tampon Tris-EDTA, pH 8
Procédure d’extraction d’ADN de
foie
•
FOIE:
•
Hacher le foie
•
Mettre dans un Potter et
broyer
•
Mettre dans un tampon
(SDS+NaCl+ TE) afin de faire
éclater les cellules.
•
Centrifuger
•
Eliminer le surnageant
•
Ajouter l’éthanol
•
Récupérer la pelote supposée
être de l’ADN
•
Procédure d’extraction de l’ADN
de bactérie
BACTERIES:
•
Mise en culture des bactéries
•
Mettre dans un tube eppendorf
•
Centrifuger
•
Éliminer le milieu de culture
•
Mettre le tampon
(SDS+NaCl+TE)
•
Agiter puis rajouter l’éthanol
•
Mettre dans le réfrigérateur
•
Récupérer la pelote supposée
être de l’ADN
Procédure d’extraction de l’ADN
de salive humaine
SALIVE HUMAINE:
Récolter la salive humaine
La verser dans un tube de
15ml
Verser le tampon (SDS
+NaCl+TE) dans ce tube
Verser l’éthanol
Laisser reposer
Récupérer la pelote supposée
être de l’ADN
Pelote d’ADN
Procédure d’extraction de l’ADN
d’oignon
•
OIGNON:
•
Hacher l’oignon
•
Mettre dans un tube de 50mL
•
Mettre dans un tampon
(SDS+NaCl+TE)
•
Centrifuger
•
Ajouter l’éthanol
•
Récupérer la pelote supposée
être de l’ADN
Test de caractérisation de l’ADN
• Grâce au bleu de méthyle qui prend une
coloration bleue en présence de matériel
génétique on peut effectivement affirmer
que la pelote observée est bien le l’ADN.
CONCLUSION DE L’OBJECTIF 1 :
Nous observons une pelote , qui est de l’ADN,dans
les quatre tubes des différentes espèces
cellulaires testés .
Est-ce que le patrimoine
génétique est identique entre
espèces?
• On traite l’ADN à la protéinase K pour
« dégrader » les protéines liées à l’ADN.
• Une fraction de cet ADN à été traitée
avec des enzymes de restriction.
Analyse par électrophorèse sur gel d’agarose des ADNs extraits
1
2
3
4
5
6
7 8 9
1
MARQUEUR DE
TAILLE
2
ADN DE FOIE
3
ADN DE BACTERIE
4
ADN D’OIGNON
5
ADN DE SALIVE
6
ADN DE FOIE DIGERE
7
ADN DE BACTERIE
DIGERE
8
ADN D’OIGNON
DIGERE
9
ADN DE SALIVE
DIGERE
Conclusion de l’objectif 2:
• On a observé grâce à la technique d’électrophorèse
qu’entre les espèces testées le patrimoine génétique
n’était pas identique car les migrations des ADN de
chaque espèce ne sont pas les mêmes.
Peut-on transmettre le patrimoine
génétique d’une espèce à l’autre?
•
MATERIELS:
• - Bactéries
• - ADN codant la GFP ( Green Fluorescent Protein)
prélevée à la méduse
• - boîte de pétri contenant une gélose
• - Plasmide ( ADN circulaire )
• -Amorces
• -Taq DNA polymérase
• -dNTP
• -Tampon pour PCR
• -Thermocycleur
• -Tubes de PCR
Technique de la PCR
Séquence cible
GFP
Dénaturation
de l’ADN
Cycle 1
Hybridation
Élongation
Cycle 2
Cycle 3
Nous avons réaliser 29 cycles
TRANSFERT DU GENE DE GFP ISSU DE LA
MEDUSE A LA BACTERIE (Escherichia Coli)
GFP
Plasmide
Transformation
(introduction du plasmide)
Bactérie
Bactérie transformée
(OGM)
Obtention de bactéries
génétiquement modifiées:
fluorescence GFP
Bactéries
(contrôle)
Bactéries
génétiquement
modifiées
Conclusion générale
• Nous avons réaliser trois expériences
visant à prouver l’existence de l’ADN
dans toutes les espèces.
• Nous avons déduis l’existence de l’ADN,
son authenticité entre les espèces et la
possibilité de transmission de
l’information génétique d’une espèce a
l’autre en laboratoire.
Matériel :
Pour réaliser nos expériences, nous avons besoin de divers matériels
Concernant l’expérience sur la salive nous devons utiliser:
•
Salive humaine
•
Tube à essai de 15ml
•
Tampons ( SDS, EDTA,Na Cl)
•
Alcool (éthanol)
Maintenant intéressons nous a l’expérience sur l’oignon :
•
Oignon
•
Tube a essaie de 50ml
•
Tampons ( SDS, EDTA,Na Cl)
•
Une centrifugeuse
•
éthanol
Au vue des résultats de nos
expériences, nous pouvons déduire
qu’ il existe effectivement un
patrimoine génétique chez tous les
êtres vivants testés.