Quality Control
Download
Report
Transcript Quality Control
بنا م خداوند بخشنده مهربان
کنترول کیفی آزمایشهای سرولوژی
1. Labeled Immunoassay
Enzyme Linked Immuno Sorben Assay ( ELISA )
Radio Immuno Assay ( RIA )
Immuno Flurescent Antibody Technique ( IFAT )
Electrochemilominsance ( ECL )
2.Non Labeled Immunoassay.
Agglutination tests
Precipitation tests
Fluccolation tests
Agglutination Reactions
Ab + particulate Ag
Agglutination (clumping)
Direct agglutination
Passive agglutination
Agglutination inhibition
Direct agglutination
Example # 2 – Using bacteria
(Ag) looking for Ab in serum.
Indirect or Passive agglutination
Results when inert particles
are coated with soluble Ags
which may react with Ab.
Particles include latex, rbc’s,
charcoal, etc.
Example – Ag attached to latex
particle (known) + serum
looking for (unknown) Ab. If
Ab present, you get visible
agglutination.
Reverse passive agglutination
Involves the adherence of Ab
to inert particles which can
then be used to detect the
presence of Ag.
Example – latex particle
coated with Ab (known) +
serum looking for (unknown)
Ag. If Ag present, then you get
visible agglutination. (CRP
test)
Agglutination inhibition - pos
Agglutination inhibition - neg
عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون
PH
عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون
Ionic strength
قدرت یونی محیط در حقیقت موالریته نمکهای محلولی است
که آنتی زن و آنتی بادی در آن محلول قرارمیگیرند
عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون
Amount of lattice
YY
Y
Y
Y
LATTICE
excess antibody
Dilution of antibodies
Y
Y
Y
Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
YY
Y
excess antigen
CRP نحوه جلوگیری از منفی کاذب در آزمایش
CRP
Serum
< 6 mg / L
6 – 20 mg /L
20 – 200 mg/L
> 200 mg/L
10 uL
_
_
+
+
Serum 50 uL
_
+
+
_
عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون
Temperature
Cold agglutinin test
عوامل موثر در واکنشهای آگلوتیناسیون
Incubation time
Direct Coombs’ Test
Differential Diagnosis
1.
Anti-IgG Positive +
Antibodies to Rh protein, Drug induced warm AIHA (penicillin, methyldopa)
2.
Anti-IgG Positive +
Anti-C3 Negative Anti-C3 Positive +
SLE, idiopathic warm AIHA, rarely drug associated
3. Anti-IgG Negative Anti-C3 Positive +
Cold agglutinin disease, Paroxysmal cold hemoglobinuria, rarely warm
AIHA if low-affintiy IgG
عوامل موثر در تفسیر نتایج آزمایشهاي سرولوژي
سن و سابقه قبلي بیمار :تیتر آنتي بادي بیشتر از افراد تازه بیمار شده.
آیا بیمار تاكنون واكسینه شده است :تیتر باال مربوط به واكسني كه تازه
دریافت كرده ،اشتراك آنتي ژن با عامل بیماري جدید ،به همان بیماري كه
واكسینه گشته است.
وضعیت جغرافیائي محیط :محل شایع و یا آندمیك در این مناطق حد نصاب
تیتر قابل قبول براي آن بیماري خاص باالتر از سایر مناطق مي باشد.
شغل بیمار :تماس مكرر تیتر قابل قبول براي آنها با سایر افراد متفاوت
است.موقع بیماري عالئم +افزایش تیتر
قرابت یا تشابه آنتي ژني :افزایش غیر معمول آنتي بادي
...
نقص در سیستم ایمني بیمار :كاهش گاماگلوبولین ارثي یا اكتسابي یا بیماري
ثانویه _لوسمي –تومورپیشرفته نتایج آزمایشات منفي
موسسه تولید كننده آنتي ژن :حد نرمال و عدم فریز آنتي ژن ها
مصرف دارو :تجویز بي موقع -مصرف كورتون-پرتو درماني
مرحله بیماري :اكثر در اواخر هفته دوم بیماري ظاهر مي گردند
خطا در آزمایشگاه :جواب آزمایش –پي پت آلوده – قرائت نتیجه – مواد
فاسد و آلوده
Trouble Shooting
بررسی کیفیت کیت ها
TP
Sensitive = ------------- *100
TP+FN
TN
Specificity = --------------* 100
TN+FP
TP
Predictive valve of positive= -----------* 100
TP+FP
TN
Predictive valve of Negative= ------------* 100
TN+FN
Variables that affect the quality of
results
The educational background and training of the
laboratory personnel
The condition of the specimens
The controls used in the test runs
Reagents
Equipment
The interpretation of the results
The transcription of results
The reporting of results
The Impact of Prevalence on Predictive
Value
DISEASE
Absent
Present
Positive
TEST
Negative
45
5
a b
c d
5
Sens = 45/50
i.e. 90%
Prevalence = 50%
45
Spec = 45/50
i.e. 90%
Positive predictive
value
a = 45 = 90%
a+b
50
Negative predictive
value
d
= 45 = 90%
c+d
50
Different of Cold Autoantibodies
Ig
Clonality
DAT
Hemolysis
Primary cold
Agglutinin disease
Secondary cold
autoantibodies
Paroxysmal cold
Hemoglobinuria
IgM
Monoclonal
C3
Chronic ,mild
IgM
IgG
Polyclonal
C3
Mono/polyclonal
C3
Self-limited,mild to severe
I,i
Target RBC
antigen
I
Episodic, selflimtied: mild to
severe
P
Cold Auto Antibodies (IgM)
IgM directed against ‘Antigen I’ on red cells
Seen in
Elderly –
Lymphomas –
Infections - EBV, mycoplasma –
DAT (Coombs) - + for C3, negative for IgG
Treat - stay warm
Warm AIHA - Treatment
Folic acid supplementation
Steroids
Splenectomy
Immunosuppressives
Cyclophosphamide –
Azathioprine –
Intravenous immune globumin (IVIG)
Plasmapheresis
Differential Diagnosis
Anti-IgG Positive + Anti-C3 Negative -
.1
Idiopathic Warm AIHA, Drug induced warm AIHA (penicillin, methyldopa)
Anti-IgG Positive + Anti-C3 Positive +
.2
SLE, idiopathic warm AIHA, rarely drug associated
3. Anti-IgG Negative - Anti-C3 Positive +
Cold agglutinin disease, Paroxysmal cold hemoglobinuria, rarely warm
AIHA if low-affintiy IgG
Antibody and antigen can form a lattice
Amount of lattice
YY
Y
Y
Y
LATTICE
excess antibody
Dilution of antibodies
Y
Y
Y
Y
Y
Y Y
Y
Y
Y
YY
Y
excess antigen
c. Applications
These include detection of anti-rhesus factor (Rh) antibodies. Antibodies to the Rh factor generally
do not agglutinate red blood cells. Thus, red cells from Rh+ children born to Rh- mothers, who
have anti-Rh antibodies, may be coated with these antibodies. To check for this, a direct Coombs
test is performed. To see if the mother has anti-Rh antibodies in her serum an Indirect Coombs
test is performed.
patient red cells
+
AHG
=
agglutination
Flocculation tests
Flocculation tests for Ab detection are based on the
interaction of soluble Ag with Ab, which results in the
formation of a precipitate of fine particles. (Ag consists
of lipid type particles)
Examples VDRL & RPR’s. (See syphilis tests – to follow)
Concentration of Ag and Ab
also affects agglutination reactions, both
the first and second stages.
Affinity
• Strength of the reaction between a single antigenic
determinant and a single Ab combining site
High Affinity
Low Affinity
Ab
Ab
Ag
Ag
Affinity = ∑ attractive and repulsive forces
Avidity
• The overall strength of binding between an Ag
with many determinants and multivalent Abs
Keq =
104
Affinity
106
Avidity
1010
Avidity
Cross Reactivity
• The ability of an individual Ab combining site to
react with more than one antigenic determinant.
• The ability of a population of Ab molecules to
react with more than one Ag
Cross reactions
Anti-A
Ab
Anti-A
Ab
Anti-A
Ab
Ag A
Ag B
Ag C
Shared epitope
Similar epitope
آب مصرفي آزمایشگاه
نوع :1هدایت الكتریكي < o.1میكروزیمنس بر سانتي متر مكعب جهت
كشت سلولي تهیه Standard
نوع :2هدایت الكتریكي < 1میكروزیمنس بر سانتي متر مكعب براي
آزمایشات
نوع : 3هدایت الكتریكي < 10میكروزیمنس بر سانتي متر مكعب جهت
شست وشو و غیره
دستگاه مربوطه Conductometer :جهت مقاومت هر چه مقاومت
خالص تر است یعني آبي كه 10مگااهم مقاومت ،داشته
بیشتر باشد آب
باشد خالص تر است .از 5اهم یا كمتر
كنترل آب مقطر
:Aیك قطره روي الم
: Bجهت تشخیص كلر +كمي نیترات نقره آب آلوده به كلر كدر میشود.
: Cمواد آلي در یك بالن ژوژ 500میلي لیتري SO4H2 ، 1CCغلیظ +
%3از محلول پر منگنات پتاسیم 10/1نرمال اگز بعد از 1ساعت رنگ ثابت
ماند آب د یونیزه است ولي اگر رنگ پر منگنات از بین رفت آب آلوده به مواد
آلي است.
سانتریفورژ
نوع :1سطح رسوب افقي است ،عیب گرما تولید مي كند.
نوع :2سطح رسوب مایل زاویه 25-40درجه سرعت زیادتر از نوع 1و
زودتر مي ایستد.
نوع :3اولترا سانتریفوژ ضمنا
سانتریفوژ با دستگاه تاكامترهر 3ماه یكبار چك مي شود و تا %5خطا اشكال
ندارد.
برنامه هاي اطمینان از كیفیت
تست باید داراي صحت و دقت كافي باشد.
روش كار –سرعت – هزینه –اهمیت و نقش آزمایش در كارهاي كلینیكي.
جهت رسیدن به كیفیت مطلوب بایستي با پزشك ارتباط برقرار نمود .
آیا نتیجه تست صحیح است.
آیا وقتي تكرار شود نتیجه مناسبي بدست مي آید.
آیا براي استفاده پزشك در درمان از سرعت كافي برخوردار است.
آیا هزینه و استفاده بیمار جهت درمان منطقي است .
منابع خطا
فردي –تجربه –آموزش – شرایط استخدامي
عوامل محیطي فضاي كار – نور – تهویه – دما -سروصدا زیاد -عدم ایمني
نمونه ها روش و زمان نمونه برداري –انتقال –ذخیره-آماده سازي
حمل ونقل
مواد آزمایشگاهي –كیفیت مواد -ظروف شیشه اي –رنگها
روش انجام تست (آسان –سخت)
دستگاه :غیر استاندارد-نتایج غیرق
قابل اطمینان مي دهند
قرائت آزمایش :قرائت عجوالنه
گزارش نتیجه :نظم –تكرار
Direct agglutination