Transcript Imunohematologická diagnostika, gelový systém a

Imunohematologická diagnostika,
gelový systém a automatizace
MTC INVITRO Diagnostics AG
Eliška Rýznarová
Eurex Medica s.r.o.
1
MTC INVITRO Diagnostics AG
Historie:
• Firma MTC (Micro Typing Concepts) byla založena v
roce 1987 jako výrobce a distributor produktů pro
klinickou diagnostiku.
• Více než 20 let je průkopníkem technologie
gelové centrifugace.
Nový směr vývoje:
• Od roku 1990 se podílí na vývoji
poloautomatizovaných a plnoautomatizovaných
systémů pro imunohematologické laboratoře a
poskytuje software.
2
MTC INVITRO Diagnostics AG
Současnost:
• 2008 zahájila vývoj a výrobu vlastních diagnostik
produktové řady MTC INVITRO a zahajuje vývoj a výrobu
inovovaného gelového systému INVITROGEL TESTSYSTEM.
• 2009 získává první certifikaci CE na gelové karty,následují
další včetně certifikace diagnostických erytrocytů.
• 2010 na mezinárodní úrovni spouští kompletní řadu
gelových karet pro AB0 systém, Rh fenotyp, screening a
identifikaci protilátek a další aplikace. Představuje novou
řadu automatizovaných přístrojů INVITROLYZER.
• Následně rozšiřuje výrobu o INVITROFLOW RAPID TEST
SYSTEM, který umožní stanovit krevní skupinu AB0 a Rh
fenotyp bez přístrojového vybavení.
3
MTC INVITRO Diagnostics AG
Cíl:
• Inovace a vývoj nových produktů.
• Představení svých novinek na 33. mezinárodním kongresu ISBT v
Soulu, v Jižní Koreji ve dnech 31.5. - 5.6.2014:
INVITROLYZER OCTAVIAN – hybridní plnoautomat (walk away)
pro testování na gelových kartách INVITROOCTA s 8 gelovými
sloupci současně s testováním na mikrotitračních deskách
INVITROPLATE
INVITROLYZER CA-120 – plnoautomat (walk away) pro gelové
karty INVITROGEL se 6 gelovými sloupci
INVITROREADR SIRACUSE – readr 2. generace pro gelové
karty INVITROGEL
INVITROFLOW karty pro vyšetření krevních skupin rychlou
laterální difuzí
4
MTC INVITRO Produkty
•
INVITROGEL TEST • SYSTEM:
6 sloupcové gelové karty
8 sloupcové gelové karty INVITROOCTA
•
INVITROCLONE Liquid Reagents
•
INVITROLIQ Liquid Reagents
•
INVITROPLATE Microplates
•
INVITROFLOW Rapid Test System
•
INVITROLYZER Automated Immunohematology
5
Gelový systém
INVITROGEL TEST • SYSTEM
Způsob aplikace sloupcové chromatografie pro použití v
imunohematologii objevil francouzský vědec Yves Lapierre.
Vynález gelové matrice ve sloupcích plastových karet vyvolal
revoluci v rutinním testování v imunohematologických laboratořích
na celém světě a stal se zlatým standardem v sérologii krevních
skupin.
Kromě jiných výhod, jako jediná technika testování, umožní vizuálně
rozlišit reakci dvojí populace erytrocytů (v jedné mikrozkumavce
pozorujeme sediment erytrocytů + aglutinaci v gelu). Příčinou může
být chybný pracovní postup a nebo je přirozeným jevem.
6
Reakce dvojí populace ery
Srovnání s běžnými výsledky
Sediment ery + aglutinace v gelu
7
Gelový systém
Příčiny reakce dvojí populace erytrocytů
1. Vzájemná kontaminace krevních vzorků (pacientů, dárců, diagnostických ery).
2. Po alogenní transfuzi krve. Dvojí populace ery je umělá a dočasná. Je cílená
nebo způsobená administrativní či laboratorní chybou. Lze pozorovat i PAT s dvojí
populací ery po transfuzi: aloprotilátka pacienta se váže pouze na ery DK.
3. Po transplantaci KD, kmenových buněk. Prvním průkazem přijetí dřeně je
zjištění populace ery antigenně odlišných, je možno ji pozorovat již 14 dnů po
transplantaci. V konečné fázi po přijetí se všechny antigenní systémy mění v
dárcovské.
4. Po intrauterinní transfuzi.
5. V případě fetomaternálních a maternofetálních inkluzí.
6. Slabé podskupiny A, B (zejména A3).
7. Částečná ztráta antigenu jako důsledek leukémie.
8. Získaný antigen B u krevní skupiny A1.
9. Polyaglutinabilita ery (T-Tn aktivace ery, bakteriální kontaminace roztoků !)
10. Mozaicismus (Rh při myeloproliferativních nemocněních). V jednom organismu
se vyskytují dvě nebo více buněčných linií s odlišným genotypem, které pochází z
1 zygoty.
11. Chimérizmus (dvě nebo více buněčných linií s odlišným genotypem v jednom
organismu pochází z jednoho či více více původních jedinců).
8
Faktory, způsobující částečné
zadržování ery na povrchu gelu
Částečně zadržované ery se jeví jako velmi tenká červená linka na
povrchu gelu. Nejedná se o obraz dvojí populace ery a neznamená
to pozitivní výsledek.
Příčiny:
• Vlákna fibrinu – u čerstvých vzorků ne zcela řádně odebraných
nebo nedostatečně centrifugovaných.
• Koagulační faktory - uvolněné do plazmy (starší vzorky).
• Vysoký počet leukocytů – vytváří bariéru na povrchu gelu.
• Podpovrchové antigeny (kryptoantigeny), odhalené působením
bakteriálních enzymů u ne zcela čerstvých ery, mohou reagovat s
protilátkami v séru vzorků.
• Přítomnost protilátek proti tzv. senescentním (stárnoucím) antigenům.
9
INVITROGEL Test • System
Přístrojová technika pro manuální testování
10
INVITROREADER Sicaruse
Přístrojová technika pro manuální testování
Readr 2. generace pro gelové karty INVITROGEL (6 sloupcové)
Software:
NAVEGATOR
Váha 2,6 kg
š 18 / v 11 / h 35 cm
11
INVITROGEL Test • System
Srovnání gelových karet 6 a 8 sloupcových
pro manuální testování možno kombinovat
12
Gelové karty INVITROGEL
se 6 mikrozkumavkami
• AB0 RH A-B-D-CDE-CTL
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
AB0 Newborn A-B-AB-D-AGH-CTL
A-B-D / A-B-D dva typy karet, rozdílné klony, DVIAB0 DII DAT A-B-D-D-CTL-AGH obě DVIABD VI+ Donor
AB0 reverse A-B-D(VI-)-Neutral-Neutral-Neutral (CTL)
AB0 Crossmatch A-B-D (VI-)-Neutral-AGH-AGH (CTL)
Podskupiny A1 a H na jedné kartě
Rh fenotypizace + K 2 typy karet (klony 1 + klony 2)
Rh fenotypizace + D
Kell DUO (anti-Kell klon 1 + klon 2)
Neutral
Polyspecifické AGH (anti-IgG + C3d) • Monospecifické anti-IgG
AGH (Coombs) + Neutral
DAT Screen (IgG-C3d-CTL/IgG-C3d-CTL)
13
Gelové karty INVITROGEL
se 6 mikrozkumavkami
14
Gelové karty INVITROGEL
se 6 mikrozkumavkami
Ověření krevní skupiny, „půlené karty“, rozdílné klony, DVI-
15
Gelové karty INVITROOCTA
s 8 mikrozkumavkami
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
AB0 RH1 RH1 Reverse: A-B-D(VI-)-D(VI-) 4 x Neutral (CTL)
ABD: A-B-D-Neutral / A-B-D-Neutral
AB0 CC: A-B-D-3x Neutral-2x AGH
AB0 Crossmatch
Podskupiny A1 a H
Anti-D (VI-) 8x
Anti-D (VI+) 8x
Rh Pheno DUO: C-c-E-e (klony 1) / C-c-E-e (klony 2)
Rh Complete Pheno + K: C-Cw-c-E-e-D(VI-)-D(VI+)-K
Kell DUO: 4 x klon 1 + 4x klon 2
Neutral
Polyspecifické AGH (anti-IgG + C3d) • Monospecifické anti-IgG
AGH Anti-IgG
16
Gelová karta INVITROOCTA
s 8 mikrozkumavkami
17
Tekutá diagnostika pro gelové karty
Testování na kartě NEUTRAL:
Testování na kartě Coombs:
Anti-A1 lektin
Anti- H monoclonal
Anti-Cw monoclonal
Anti-M monoclonal
Anti-N monoclonal
Anti-P1 monoclonal
Anti-s monoclonal
Anti-k
Anti-Fya
Anti-Fyb
Anti-Jka
Anti-Jkb
Anti-Lua
Anti-Lub
Anti-S
Anti-s
Potenciátory reakce, roztoky pro gelový systém:
Invitropapain, Invitrobrom, Invitroliss
18
Tekutá diagnostika INVITROCLONE
pro sklíčkové a zkumavkové testy, (MP)
• Monoklonální diagnostika pro AB0 systém
•
•
•
•
•
•
•
Lektiny anti-A1 a anti-H
Anti-D(VI-) IgM (klon P3x61)
Anti-D(VI-) IgM (klon MS-201)
Anti-D(VI-) IgM+IgG (klony P3x61 + MCAD6)
Rh Control
Diagnostika pro fenotypizaci Rh + K (klony 1 + 2)
Vzácná monoklonální diagnostika:
Anti-Jka, Anti-Jkb
Anti-Lea, Anti-Leb
Anti-P1
Anti-M, Anti-N
Anti-S
19
Tekutá diagnostika INVITROLIQ
Vzácná polyklonální IgG pro NAT ve zkumavce
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Anti-K
Anti-k
Anti-Kpa, Anti-Kpb
Anti-Fya, Anti-Fyb
Anti-Jka, Anti-Jkb
Anti-S, Anti-s
Anti-Lua, Anti-Lub
Anti-Xga
Anti-Coa, Anti-Cob
Anti-Dia
Anti-Wra
Anti-P1 (pro test v solném prostředí)
20
Potenciátory reakce a roztoky
pro zkumavkové testy
• AGH polyspecifické Anti-IgG+C3d
• AGH monospecifická:
Anti-IgG, Anti-C3d, Anti-C3b, Anti-C4, Anti-IgA, Anti-IgM
• LISS
• Bromelin
• Control Solution
• Bovine Albumin 6%, 22% a 30%
21
Diagnostické erytrocyty
3% INVITROCYTE:
0,8% INVITROCELL:
Reverse A1, A2, B, 0
Reverse A1, B
Scan I, II
Screen I, II, III
Screen IP, IIP, IIIP
Ident 11
Ident 11P
Coombs Control
Reverse A1, A2, B, 0
Reverse A1, B
Pool
Scan I, II
Screen I, II, III
DUO Screen I, II, III + IP, IIP, IIIP
Ident 11
Ident 11P
22
Univerzální kontroly kvality
INVITROQC-C Plná krev 4 x 6 ml
Zkumavka A: KS A, R1R1 (CCD.ee), K+, anti-B
Zkumavka B: KS B, R1R2 (CcD.Ee), K-, anti-A a anti-K (nereaguje v enzym. testu)
Zkumavka 0: KS 0, R2R2 (ccD.EE), K-, anti-A, anti-B
Zkumavka AB: KS AB, rr (ccddee), K-, nepravidelná anti-D
INVITROQC-S Séra (Anti-Fya weak) 3 x 5 ml
INVITROQC-S Séra (Anti-c weak) 3 x 5 ml
INVITROQC-S Séra (AB serum) 3 x 5 ml
INVITROQC-S Kombi (Anti-Fya weak, Anti-c weak, AB serum) 3 x 5 ml
23
INVITROFLOW
Rychlá technologie laterální difuze
Postup vyšetření:
10 µl plné krve, za 1 minutu přidat 50 µl pufru, do 3 minut odečíst výsledek
A-B-D(VI-)-CTL
A-B-D(VI+)-CTL
C-c-E-e
24
Plnoautomaty INVITROLYZER
INVITROLYZER CA-120 – plnoautomat (walk away) pro gelové
karty INVITROGEL se 6 gelovými sloupci
INVITROLYZER Bartolomeu – plnoautomat (walk away) pro
mikrotitrační desky INVITROPLATE
INVITROLYZER OCTAVIAN – hybridní plnoautomat (walk away)
pro testování na gelových kartách INVITROOCTA s 8 gelovými
sloupci současně s testováním na mikrotitračních deskách
INVITROPLATE
25
INVITROLYZER CA-120
Plně automatizovaný analyzátor pro testování na 6 sloupcových
gelových kartách INVITROGEL
• Pro 72 karet, 5 x 20 vzorků
• 20 pozic pro reagencie
• Odečet čárových kódů
• Přední kryt s bezpečn. senzorem
• Pro zk.o průměru 10 až 15 mm
• Minimální objem vzorku 1 ml
• Maximální objem vzorku 5 ml
• Detekce bublin a sraženin
• 48 pozic pro pipetování/inkubaci
• Centrifuga pro 24 karet
• Integrovaný readr
• Software NAVEGATOR
• Intuitivní dotykový monitor
• 120 kg, š 120 / h 90 / v 100 cm
26
• non
27
INVITROLYZER Bartolomeu
Plně automatizovaný analyzátor pro testování na mikrotitračních
deskách INVITROPLATE
• Pro 10 MP, 64 vzorků
• 20 pozic pro reagencie
• 400 testů za hodinu
• Kontinuální vkládání vzorků
• Urgentní vzorky
• Odečet čárových kódů
• Pro zk.o prům.12 až 20 mm
• Minimální objem vzorku 1 ml
• Maximální objem vzorku 5 ml
• Centrifuga pro 2 MP
• Třepačka pro 1 MP
• Integrovaný readr
• Software NAVEGATOR
• 120 kg, š 103 / h 90 / v100 cm
28
INVITROLYZER OCTAVIAN Centurion
Plně automatizovaný hybridní analyzátor pro testování na gelových
kartách INVITROOCTA s 8 gelovými sloupci současně s testováním na
mikrotitračních deskách INVITROPLATE
29
INVITROLYZER OCTAVIAN Centurion
• Kapacita 96 vzorků, 24 gelových karet, 10 MP
• Dvě nezávislá pracovní ramena
• Detekce hladin
30
INVITROLYZER OCTAVIAN Centurion
• Odečet čárových kódů vzorků, reagencií, MP, gelových karet
• Intuitivní dotykový monitor
• Modul pro pipetování a třepání MP
31
INVITROLYZER OCTAVIAN Centurion
• Centrifuga pro 24 gelových karet
• Inkubátor pro 24 gelových karet
• Readr gelových karet a MP
• Váha 140 kg
• š 140 / v 100 / h 90 cm
32
Děkuji za pozornost
33