Transcript poruchy fagocytózy

Imunodeficience
Imunodeficience



Stavy se zvýšenou náchylností k infekcím
Vrozené - spojené s poruchou genů kódující
proteiny důležité pro funkci imunitního systému
Získané - v důsledku různých příčin (léčba,
onkologické onemocnění aj).
Imunodeficience
Poruchy antigenně specifické imunity
- ID protilátkové
- poruchy T lymfocytů
- kombinované ID
■ Poruchy nespecifické imunity
- poruchy fagocytózy
- poruchy komplementu

Imunodeficience




Chlapci 2x častěji než dívky
Vazba na chromozom X
Mutace genů - bodové mutace, delece
Důsledkem je chybění nebo dysfunkce
proteinů(receptor, enzym, signalizační protein
Primární ID - protilátkové




70% frekvence v rámci výskytu
Klin.projevy po 6.měsíci věku do
dospělosti
Symptomatologie – IDC, otitidy, artritidy
Etiol.agens – opouzdření mikrobi,
echoviry
Primární ID protilátkové







Brutonova agamaglobulinémie
Selektivní deficit podtříd IgG
Selektivní deficit IgA
CVID
Syndrom hyper IgM
Syndrom hyper IgE
Syndrom hyper IgD
Brutonova agamaglobulinémie





O.C.Bruton 1952
Bez přítomnosti B ly v periferní krvi a nejsou
protilátky všech tříd
Mutace genu na X chromozomu pro proteinkinázu
Btk
Výskyt 1:50-100 000, projevy po 6 měsíci
Substituce, genová terapie
Selektivní deficit IgA





Nejčastěji se vyskytující – 1:500
Příčina – geny HLA
Sekreční IgA chybí zcela, částečná náhrada
sekrečním IgM, IgG
Zvýšená náchylnost k alergickým , autoimunitním
a nádorovým onemocněním
Substituce není možná, cave anafylaktický šok
Selektivní deficity podtříd IgG




IgG1-IgG4
V kombinaci s deficitem IgA
Defekt tvorby protilátek proti specifickým
antigenům – polysacharidům
Přechodná hypogamaglobulinémie v dětství
- opožděná tvorba IgG
- transplacentární přenos
- spontánní úprava
CVID





Common variable immunodeficiency
Heterogenní skupina onemocnění
IgG a IgA obvykle chybí, IgM variabilní
Počet B ly je normální
Genetický podklad – MHC systém
ID buněčné a kombinované






Frekvence 20%
Počátek symptomatologie od narození, nejpozději
do 2 let
Symptomatologie – neprospívání, IDC, průjmy,
dermatitidy
Etiol.agens – pneumocysty, plísně, mykobakterie
Úmrtí obvykle v dětství
Příčina smrti – infekce, maligní lymfoproliferace,
autoimunitní onemocnění
Těžké kombinované defekty imunity
SCID (Severe Combined Immunodeficiency)




Nejzávažnější forma prim. ID
Těžké infekce virové, oportunní a intracelulární
mikroorganismy
Bez léčby obvykle umírají do 1.roku
Molekulární podstata je heterogenní
Těžké kombinované defekty imunity



Porucha adenosin-deaminázy (ADA)
Hromadění produktů metabolismu purinů- toxické pro
thymocyty
SCID T- B- nejsou B a T ly, molekulární příčina heterogenní
SCID T- B+
- 60% všech SCID, v 70% vázána na chromozom X
Retikulární dysgeneze
postižení kmenové buňky, blokace vývoje myeloidních bb.
DiGeorgeův sy




Vývojový defekt 3.a 4. žaberní výchlipky
Absence nebo redukce thymu
Snížení T ly
Poruchy genů na 10. nebo 22.chromozomu
Funkční poruchy T lymfocytů

Poruchy v antigenní prezentaci
- defekty exprese HLA I nebo II. Třídy…dysfunkce
CD4 a CD8..porucha tvorby protilátek
Skupina aktivačních poruch T ly

Syndrom hyper IgM – defekt v expresi CD40L na
Tly
- úloha CD40L – nezbytná pro interakci T a B
lymfocytů , umožňuje maturaci a isotypový
přesmyk
- klinicky zvýšená náchylnost k bakteriálním,
virovým a oportunním infekcím
Skupina aktivačních poruch T ly

Wiskottův-Aldrichův sy
- gen WAS – jeho produkt multifunkční
signalizační molekula
- ID, trombocytopenie a ekzem
Chediakův-Higashiho sy
- parciální albinismus
- defekt cytotoxických ly a NK buněk
Skupina aktivačních poruch T ly

Omennův sy
- autosomálně recesivně dědičné
- erytrodermie, alopecie, průjmy, neprospívání
Familiární hemafagocytující lymfohistiocytóza
- maligní proliferace T ly a sy hemofagocytozy
Lymfoproliferativní sy vázaný na chromozom X
-mutace SAP molekuly-protein regulující aktivitu ly
receptorů
Syndrom hyperimunoglobulinémie IgE




Sy Jobův, sy Buckleyové
Vysoká koncentrace IgE, eosinofilie
Nedostatečná zánětlivá reakce – porucha funkce
fagocytů
Infekce St.aureus a Candida albicans
Syndrom hyperimunoglobulinémie IgD



Sy periodických horeček – autoinflammatory
disorders
Mutace enzymu mevalonátkinázy – metabolismus
cholesterolu
Recidivující horečky, uzlinový sy, zvýšená
produkce IL-6 a zvýšené zánětlivé parametry
Mukokutánní kandidoza


Chronická kandidóza kůže a sliznic
Molekulární podstata není známa
ID fagocytární






Frekvence 10%
Symptomatologie ihned po narození
Symptomatologie – pyodermie, abscesy,
osteomyelitidy
Etiol.agens – stafylokoky, plísně, enterobakterie
Přežívání i do dospělosti
Chronická granulomatozní choroba, sy poruchy
adhezivity leukocytů
ID v produkci komplementu






Frekvence 1%
Začátek symptomatologie v dětství i v
dospělosti
Symptomatologie – pyogenní infekce, SLE
Etiol.agens – Neisserie
Přežívání do dospělosti
Hereditární angioedém, deficity
jednotlivých složek komplementu
ID sekundární






Metabolická onem. – DM, uremie,
hypothyreóza
Nádorové choroby
Stavy po virových infekcích a chronické infekce
HIV infekce
Malnutrice a stavy spojené s poruchou výživy
Poranění – polytraumata, popáleniny
Základní struktura imunoglobulinů
2 lehké řetězce
-lambda ()
-kappa (κ)
2 těžké řetězce
Turbidimetrie







Optická metoda spočívající na měření procházejícího světla
zeslabeného rozptylem na částicích (zákalu)
Stupeň zákalu – turbidita
Precipitační reakce mezi antigenem(Ag) a protilátkou (Ab)
Na částicích dochází k rozptylu záření a částečně i jeho absorpci
Sleduje se pokles intenzity záření procházejícího absorbující a
rozptylující vrstvou.
Nutno získat reakční směs dostatečně stálou (ochranný polymér –
polyetylenglykol)
Fotometrická citlivost je nepřímo úměrná vlnové délce, proto je
vhodné měřit při nejkratší vlnové délce dosažitelné standardním
fotometrem (340 nm v blízké UV oblasti
Nefelometrie



Optická metoda měření intenzity difuzně rozptýleného
světla na dispergovaných částicích
k měření se využívá světelného toku rozptýleného disperzní
soustavou
Rozptýlené (Tyndallovo) světlo vychází z roztoku všemi
směry a měří se pod úhlem, který je odlišný od směru
dopadajícího záření
Světelný zdroj – helium neonového nebo argonového
laseru
Vyšetření počtu B lymfocytů




Průtoková cytometrie, předtím KO a diff.
CD19
Brutonova agamaglobulinémie x CVID
CLL
Funkční testy B lymfocytů




Nepřímé stanovení – sleduje se produkce
protilátek proti proteinovýcm nebo
polysacharidovým antigenům
Protilátky proti tetanu a proti pneumokokům
Test stimulace mitogenem – PWM
Koncentrace Ig v supernatantu kultury
stimulovaných lymfocytů
Fagocytóza





Jeden z evolučně nejstarších obranných mechanismů
Součást přirozené imunity
Schopnost buněk imunitního systému pohlcovat, usmrcovat a
rozkládat mikroorganismy (u živých)
Schopnost rozpoznat cizorodou částici, navázat se a pohltit ji
Fagocytující buňky - neutrofily, eosinofily, monocyty, makrofágy
Poruchy fagocytozy v klinice



Defekty fagocytózy u poruchy funkce neutrofilů
samotných, poruchách v tvorbě protilátek nebo defektu
komplementu
Dysfunkce actinu, tuftsinu, nebo C3bi receptoru
Získané poruchy fagocytózy – trauma, diabetes, renální
insuficience, infekce
Fagocytóza jako mnohastupňový
proces






Interakce mezi fagocytujícími buňkami a endotelem
Adhezní molekuly
Chemotaxe s účastí chemoatraktantů
Ingesce – pohlcování částic , > 0,5um
Nitrobuněčné zabíjení
Mechanismy zabíjení nezávislé na kyslíku a závislé na
kyslíku (NADPH oxidázový komplex)
Vrozené poruchy fagocytózy





Imunitní nedostatečnost
Primární poruchy – geneticky podmíněné – nízká
incidence 1:100000-1:1000000
Sekundární poruchy
Poruchy v počtu granulocytů (retikulární dysgeneze)
Poruchy funkce granulocytů – LAD syndrom (Leukocyte
Adhesion Deficency, mutace genu pro podjednotku beta
CD18)
Poruchy v počtu neutrofilů

Kostmannů sy – vrozená agranulocytóza
Mutace neutrofilní elastázy
Cyklická neutropenie
Mutace neutrofilní elastázy
Poruchy ve funkcích fagocytujících
buněk

Chronická granulomatózní choroba
defekt v enzymatickém systému NADPHoxidázy
defekt v tvorbě kyslíkových radikálů…snížená
baktericidie a dysfunkce lysosomálních degradačních
enzymů
tvorba gramnulomů
Tesaurismózy



Střádající choroby
Defekty lysosomálních degradačních enzymů
Postižení nervového systému
LAD – (leukocyte adhesion deficiency) I
syndrom



Defekt leukocytárních integrinů
Dysfunkce neutrofilů – ztráta adhezivity ganulocytů k
endoteliím…migrace do místa zánětu je porušena
LAD II
defekt exprese ligandu pro selektiny
Poruchy fagocytózy



Poruchy chemotaxe
Poruchy ingesce
Poruchy tvorby granulí neutrofilních
granulocytů ( Chediak-Higashiho sy, poruchy
myeloperoxidázy)
Fagocytóza – princip metody (testy postihující
pohlcení)







Substráty
MSHP – hydroxyetylmetakrylátové partikule
Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans
MSHP – hydrofilní charakter částic (omezení nespecifické
adherence), standardní velikost 1um (nízká spontánní
agregace)
Inkubace s plnou krví 1 hodinu při 37C, po inkubaci nátěr
na podložní sklo , fixace , obarvení a počítání ve světelném
mikroskopu
Alternativa průtoková cytometrie – E.coli FITC
Hodnocení určitého počtu buněk, pozitivní obsahují 3 a více
partikulí.
Baktericidní test







Screeningová metoda
Rozdílné mikrobicidní systémy s druhovou specificitou
mikroba
Substrát – živý mikroorganismus!!!
Candida albicans, Staph.aureus, pseudomonády
Vyšetření z plné krve nebo na izolovaných granulocytech
Vitální barvení kandid trypanovou modří, živé kandidy mají
schopnost trypanovou modř eliminovat
Staphylokok – očkování na plotny a počítání kolonií nebo
průtoková cytometrie s barvením přežívajících
mikroorganismů
Testy oxidačního metabolismu









Testujeme schopnost granulocytů tvořit kyslíkové radikály
aktivací NADPH oxidázy
NBT - nitroblue-tetrazolium chlorid
INT – iod-nitroblue tetrazolium
Schopnost granulocytů redukovat bezbarvé tetrazoliové soli na
barevné formazány
Kyslíkový metabolismus, zabíjení stafylokoků, enterokoků, kandid
Sklíčkový test – optický mikroskop , pozitivní buňky jsou s
modrými skvrnami ( redukovaný formazán)
Mikrotitrační destičky s fotometrickým odečtem
Klinické koreláty – chronická granulomatozní choroba
Zpracování do 2 hodin po odběru
Chemiluminiscence









Měření chemiluminiscenční aktivity fagocytů
Kvantitativní sledování oxidačního vzplanutí
Redukce molekulárního kyslíku na superoxid a následně peroxid
vodíku
Peroxid vodíku je substrátem pro myeloperoxidázovou reakci s
emisí fotonů a chemiluminiscencí fagocytů
Pro chemiluminiscenci je stimulem phorbol-myristát-acetát, který
aktivuje proteinkinázu C a následně NADPH oxidázu
Chemické světlo se zesiluje akceptací fotonů luminolem
Spontánní aktivita a aktivita stimulovaných fagocytů
Chemiluminiscenční analyzátor
Hodnotí se vrchol odpovědi a čas nezbytný k jeho dosažení
Sekundární buněčné imunodeficience



HIV – AIDS
Infekce CD4 ly
Selhání imunity – infekce oportunními mikroorganismy,
nádorová onemocnění, autoimunitní onemocnění
Sekundární imunodeficince

Sepse
dysfunkce imunitního systému
humorální imunita
buněčná imunita