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NEFELOMETRÍA
T.E.L. Juan José Sánchez Mora
DEFINICIÓN
La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que
atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una
suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa
turbia. La intensidad de ésta depende de: el número de partículas suspendidas, su tamaño, su forma, los
índices refractivos de la partícula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiación
dispersada. El procedimiento generalmente es empírico y sólo se consideran 3 factores:
•
•
•
La concentración: Mayor sea el número
de partículas, mayor es la dispersión.
Tamaño de la partícula: Factores como el
pH, la velocidad y orden de la mezcla,
concentración de los reactivos, duración
del estado de reposo y la fuerza iónica.
Longitud de onda: Generalmente las
muestras se iluminan con luz blanca,
pero si están coloreadas, se debe escoger
una porción del espectro
electromagnético en la que la absorción
del medio se reduzca al mínimo.
APLICACIÓN
Generalmente, nefelometría y turbidimetría se utilizan en el análisis de la calidad
química del agua para determinar la claridad y para el control de los procesos de
tratamiento.
Estos métodos pueden ser también apropiados para ensayos cuantitativos que
usan complejos antígeno-anticuerpo o para medir la cantidad de proteínas en fluidos.
A continuación se describen las determinaciones que se realizan mediante
nefelometría en la sección de inmunoproteinas del laboratorio de bioquímica del
Hospital Severo Ochoa (Leganés) donde se utilizan dos aparatos BN II y BN-Prospect.
Ambos tienen el mismo uso, pero están programados para determinar diferentes
técnicas en función del uso y el tipo de muestra a determinar:
BN II
BN-PROSPECT
• IgG, IgA e IgM: Son unas proteínas denominadas gammaglobulinas, formadas
por dos cadenas pesadas y dos ligeras. También se las conoce por
inmunoglobulinas de las cuales la mayoría es IgG, por tanto forma la mayor parte
de los anticuerpos circulantes. La IgA se encuentra sobre todo en secreciones
gastrointestinales, saliva y lagrimas. La IGM en menor medida se encarga
fundamentalmente del sistema ABO y factor reumatoide, es la primera en
aparecer en un proceso infeccioso. Hay otra, la IgD que rara vez se evalúa. Se
utilizan para la detección de deficiencias inmunes, infecciones virales crónicas,
mielomas múltiples, enf. autoinmunes, etc.
• C3 y C4: También llamado complemento. Favorecen la permeabilidad vascular,
quimiotaxis, fagocitosis y la adherencia Ag-Ac. Son importantes para la detección
de enf. autoinmunes.
El sistema del complemento está formado por una
serie de proteínas que en su mayoría son
apoenzimas, es decir, precursores enzimáticos. La
activación de los componentes iniciales conduce a la
hidrolisis enzimática secuencial del resto de las
proteínas del sistema. La activación del
complemento por la vía clásica se inicia con la
activación del complejo C1qrs por complejos
antígeno-anticuerpo. Este complejo ataca
enzimáticamente a C4, que al adquirir a su vez
actividad proteolítica, produce la hidrolisis de C2,
que al ser activado, es capaz de degradar
enzimáticamente a C3. La hidrolisis secuencial
continúa hasta C8 que, al activarse, provoca la
polimerización de C9 y conduce a la lisis osmótica
de la célula "blanco". El sistema puede asimismo
activarse por microorganismos o toxinas sin la
intervención de anticuerpos a través de la llamada
vía alterna. A partir de C3, ambas vías de activación
utilizan una secuencia común de producir citólisis.
• AAT ó α 1-antitripsina: Proteína
enzimática relacionada por tendencia
hereditaria con el enfisema. También la
podemos encontrar disminuida en lesiones
hepáticas y síndrome nefrótico.
• COE ó ceruloplasmina: Proteina que
se une al cobre y facilita su transporte
por la corriente sanguínea. Es muy
importante su detección precoz en la
enfermedad de Wilson, ya que puede ser
mortal.
• PCR ó proteína C reactiva: Es un
reactante de fase aguda no específico que
se utiliza para diagnosticar enfermedades
infecciosas y alteraciones inflamatorias
tales como la artritis reumatoide y fiebre
reumática aguda. La PCR interacciona con
el complemento. También se puede usar
para la detección de infecciones en
postoperatorios, después de infarto de
miocardio, etc.
• B2MG ó β2-microglobulina: Se utiliza
tanto como marcador tumoral, como de
seguimiento en VIH. También en infecciones
víricas, prcesos inflamatorios, etc.
• ApoA: Sus valores son válidos para
estudio de cardiopatías y riesgo
aterogénico.
• ApoB: Los niveles séricos elevados
de esta proteína están asociados con
hiperlipidemia, angina de pecho y
ataque cardiaco.
• Transferrina: Es una proteína que se
une al hierro para transportarlo por el
torrente sanguíneo.
• CDT ó Transferrina carbohidrato deficiente: Se asocia como marcador en el
abuso alcohólico.
• Receptor soluble de la transferrina: Nueva medición para la detección de
deficiencia de hierro. La regulación de tranferrina está relacionada con los depósitos
de hierro intracelular y guarda relación constante con el receptor soluble presente en
el plasma. Se ha demostrado que en las anemias por deficiencia de hierro cuando se
produce la disminución de los depósitos de éste aumenta la expresión del receptor.
• Haptoglobina: Es una glucoproteína producida por el hígado usada para detectar
la hemolisis, ya que la hemoglobina liberada se une fácilmente con la haptoglobina
haciendo que ésta disminuya. Por el contrario su elevación suele indicar
enfermedades inflamatorias.
• α 1-Microglobulina: se usa como
marcador de pielonefritis, afectación del
túbulo renal.
• Cistatina: Se utilizacomo nuevo marcador de función renal, se correlaciona
con el aclaramineto de creatinina. Recientemente se ha estudiado por su papel
en la predicción de la aparición o empeoramiento de la enfermedad
cardiovascular. También parece jugar un papel importante en los trastornos
cerebrales que involucran amiloide (un tipo especifico de la disposición de
proteínas) como en la enf. de Alzheimer.
• Cadenas ligeras kappa y lambda (κ y λ): Forman parte de las inmunoglobulinas. Se
utilizan para seguimiento y control de mieloma múltiple y enfermedades
autoinmunes.
• α 1- Glicoproteína ácida u orosomucoide: Se utiliza para el diagnostico de
enfermedades reumáticas y enf. de Crohn. Es una proteína típica de fase aguda.