Transcript تدوين و گردآوري

‫تدوين و گردآوري‪:‬‬
‫آزمايشگاه مرجع سالمت‬
‫اسفند ماه ‪1392‬‬
‫ايدز يا سندرم نقص ايمنی اکتسابی نوعی بيماري است كه در دستگاه ايمنی‬
‫و توسط ويروس ‪ HIV‬ايجاد مي شود‪.‬‬
‫تاكنون فرضيه های متعددي براي توضيح چگونگي پيدايش اين بيماري شكل‬
‫گرفته است‪.‬ديده شده كه ميمون هاي سبز آفريقايي با ويروس هايي كه بسيار‬
‫شبيه به ‪HIV‬هستند مبتال مي شوند اما بيمار نخواهند شد‪ .‬گمان مي رود كه‬
‫نوعي جهش در يكي ازاين ويروسها منجر به پيدايش ‪ HIV‬شده و احتماال‬
‫از طريق تروما به انسانها انتقال يافته است‪ ،‬لذا ‪ HIV‬هيچ مخزن شناخته‬
‫شده انساني ندارد‪.‬‬
‫انواع ‪HIV‬‬
‫ويروس ‪ HIV‬از رترو ويروس هاي حيواني است كه بر دو نوع اصلی می باشد‪:‬‬
‫‪ : HIV1‬شايع ترين عامل ايدز است و چندين زيرگروه دارد‪.‬بيش از‪ %90‬افراد‬
‫آلوده به ‪ HIV1‬در كشورهاي در حال توسعه زندگي مي كنند‪.‬روش انتقال در‬
‫‪ %80‬موارد از راه جنسي مي باشد و از زمانيكه اولين مورد ابتال به ايدز در سال‬
‫‪ 1981‬درآمريكا(درمعتادان تزريقي وهمجنس گرايان مشاهده شد)گزارش گرديد تا‬
‫به امروز بيش از ‪25‬ميليون نفر در اثر ابتال به اين بيماري از دنيا رفته اند‪.‬‬
‫‪ :HIV2‬درآفريقاي غربي اندميك بوده و ازنظر آنتي ژنييسيته با ‪ HIV1‬متفاوت‬
‫است‪ .‬قدرت بيماري زايي كمتري داشته و نوعي از ايدز با پيشرفت آهسته تري‬
‫ايجاد ميكند‪.‬‬
‫راه انتقال ويروس به انسان‪:‬‬
‫‪ ‬استفاده ازسوزن وسرسرنگ مشترك وياتجهيزات مورداستفاده براي تزريق‬
‫‪ ‬رابطه جنسي بافرد آلوده به ويروس‬
‫‪ ‬متولد شدن از مادر مبتال به ايدز‪ :‬اين ويروس در دوران بارداري‪،‬موقع تولد‬
‫نوزاد وياشيردهي ميتواند ازمادر به فرزند منتقل شود‪.‬‬
‫‪ ‬دريافت خون وفراورده هاي خوني وياپيوند اعضاازفردي كه مبتال به اين‬
‫ويروس مي باشد‪.‬‬
‫‪ ‬از طريق تزريق غيربهداشتي وشيوه هاي دندان پزشكي‬
‫‪ ‬غذايي كه فرد مبتال به ‪HIV‬جويده است واز دهان خود بيرون آورده است‬
‫‪.‬اين مورد بيشتر در مراقبان كودكان مبتال به ‪ HIV‬ديده شده است‪.‬‬
‫‪ ‬گازگرفتن توسط فرد مبتال كه باعث زخمي شدن وتخريب بافت وخون آمدن‬
‫شود‪.‬‬
‫‪ ‬تماس باپوست زخمي ‪،‬جراحت ويا خلط بيمار مبتال به ايدز‬
‫‪ ‬اگر لب ولثه بيمارخوني باشد وشمارا ببوسد‪.‬‬
‫‪ ‬خالكوبي باوسايل غيراستريل‬
‫ازچه طريق منتقل نمي شود‪:‬‬
‫‪.1‬‬
‫‪.2‬‬
‫‪.3‬‬
‫‪.4‬‬
‫آب وهوا‬
‫گزش حشرات ازقبيل پشه‬
‫بزاق ‪،‬اشك وياعرق بدن‬
‫دست دادن به بيمارويااستفاده مشترك از ظرف غذا‬
‫وضعيت بيماري ايدز در ايران‪:‬‬
‫اولين مورد ايدز در ايران در سال ‪ 1366‬در يك پسر بچه ‪ 6‬ساله مبتالبه‬
‫هموفيلي شناخته و گزارش شده(ازتعداد‪ 2000‬بيماري كه فاكتور‬
‫‪ 8‬و ‪9‬‬
‫وارداتي رادريافت كرده بودند‪ ،‬آزمايش ايدزبه عمل آمد كه ‪ %15‬اين افراد آلوده‬
‫به ويروس بودند) و تا سال ‪ 1375‬مواردی به صورت پراكنده در مصرف كنندگان‬
‫داروهاي مشتق از خون وارداتي و افرادي كه در خارج از كشور اقامت طوالني‬
‫داشته اند گزارش مي شد‪.‬‬
‫در سال ‪ 1375‬اولين همه گيري ‪ HIV‬در يكي از زندان ها مشاهده شد وبه‬
‫سرعت در بين جمعيت مصرف كنندگان مواد مخدر تزريقي در تمام كشور گسترش‬
‫يافت‪.‬‬
‫ميتوان گفت كه در حال حاظر كشور در وضعيت بحراني قرار گرفته و خطر‬
‫گسترش آلودگي به توده مردم وجود دارد‪.‬‬
‫بايدددد خاطرنشدددان كدددرد يرخدددي از بيمددداراني كددده اكندددون بددده مدددداواي ايددددز نيددداز دارندددد قبدددل از‬
‫كشدددف ‪ HIV‬و اتخددداذ معيارهددداي بهداشدددتي عمدددومي بدددراي پيشدددگيري از ايددددز بددده آن مبدددتال‬
‫شددددده انددددد‪ .‬از ايددددن رو پدددديش بينددددي سددددير آتددددي بيمدددداري بدددده دليددددل فقدددددان اطالعددددات دربدددداره‬
‫مبتاليددداني كددده در سدددالهاي آيندددده بدددراي دريافدددت خددددمات پزشدددكي مراجعددده خواهندددد كدددرد بددده‬
‫درسددددتي امكددددان پددددذير نيسددددت‪ .‬بنددددابراين تددددا هنگددددام مراجعدددده ايددددن بيمدددداران هيچگوندددده آمددددار‬
‫دموگرافيدددددك دربددددداره آنهدددددا در دسدددددترس نخواهددددددبود ‪.‬ايدددددن تددددداخير باعدددددث ميشدددددود اتخددددداذ‬
‫راهكارهددداي بهداشدددتي عمدددومي بدددراي مقابلددده بدددا ايددددز در مقايسددده بدددا نحدددوه برخدددورد بدددا سددداير‬
‫عوامل بيماري زا پيچيده ترگردد‪.‬‬
‫ساختار و چرخه زندگي ويروس‪:‬‬
‫ويروس ‪ HIV‬يك رترو ويدروس پوشدش دار اسدت‪ .‬ژندوم آن از دو نسدخه ‪ RNA‬تدك‬
‫رشته اي تشكيل يافته و توسط غشاي سلول ميزبان كه داراي پدروتيين هداي ويروسدي‬
‫می باشد احاطه شده است ‪.‬‬
‫ايددن ويددروس انددواع مختلفددي از سددلول هدداي ‪ CD4+‬شددامل منوسدديت هددا‪ ،‬ماكروفاژهددا‬
‫‪،‬دندددرتيك سددل هددا وميكروگليددان هدداي مهددز را آلددوده ميكنددد‪.‬بدده سددبب آن كدده آنتددي ژن‬
‫‪ CD4‬گيرنده اصلي جهت ورودويروس به داخل سلول ميباشد و اين ماركر بر روي‬
‫سلول هاي فوق وجود دارد‪ ،‬عفونت سلول ها با ‪HIV‬با اتصال گليكوپروتيين پوششي‬
‫ويروس(‪ )env‬به ‪ CD4‬و گيرنده هاي گلوكداين بده عندوان گيرندده هداي كمكدي آغداز‬
‫ميشود‪.‬‬
‫سلول هاي‪ CD4+‬به دليل داشتن نقش بنيادين در هماهنگ ساختن پاسخ ايمني‬
‫سلولي يکی از اجزاي حياتي اين پاسخ راتشكيل مي دهد‪.‬نقايص كمي و كيفي‬
‫در اين سلول ها منجر به بروز انواعي از اشكاالت ايمني همچون كاهش واكنش‬
‫هاي مختلف لنفوسيتي ‪،‬كاهش پاسخ گويي در برابر آنتي ژن هاي محلول‪،‬‬
‫اختالل توليد لنفوكاين ها‪ ،‬كاهش سايتوتوكسيسيته اختصاصي ‪،‬كاهش ايمني‬
‫طبيعي ‪،‬فعال سازي پلي كلونال سلول هاي ‪، B‬اختالل در سنتز ايمنوگلوبولين‬
‫هاي اختصاصي و كاهش مرگ پاتوژن هاي درون سلولي ميگردد‪.‬‬
‫اثر‪HIV‬بر سیستم ايمنی‬
‫به طوركلي دستگاه ايمنی به دو نوع ذاتي و اكتسابي تقسيم ميشود‪:‬‬
‫ايمني ذاتي (طبيعی)‪ :‬شامل آن دسته از پاسخ هاي ايمني غيراختصاصي‬
‫ميباشد كه بدون برخورد با آنتي ژن معين فعال مي شود ازقبيل فعال سازي‬
‫كمپلمان وفعاليتهاي سلول هاي كشنده طبيعي‪.‬‬
‫ايمني اکتسابی (اختصاصی)‪ :‬شامل آن دسته از پاسخ هاي اختصاصي ميباشد‬
‫كه در مواجهه با آنتي ژن معين فعال ميشود ودر قالب دو سيستم ايمني همورال‬
‫و ايمنی سلولی بروز ميابد‪.‬‬
‫‪ HIV‬باعث آسيب عملكردي هر دو سيستم ايمني اكتسابي و ذاتي ميشود‪.‬‬
‫از جمله نقص هاي ايمني اکتسابی كاهش تعداد سلول هاي ‪TCD4 +‬به‬
‫خصوص در مرحله حاد عفونت است كه به علت اثرسايتوپاتيك مستقيم‬
‫ويروس بر روي سلول است‪ .‬سير بيماري ‪HIV‬ميتواند توسط اندازه گيري‬
‫ميزان ويروس در پالسماي بيمار و توسط شمارش سلول هاي ‪TCD4+‬‬
‫مشخص گردد‪.‬‬
‫در اثر كاهش سلول هاي ‪ T CD4+‬خون به زير ‪ 200‬عدد‬
‫در ميكروليتر ويا كاهش نسبت سلول هاي ‪ CD4+‬به كل‬
‫لنفوسيت ها به كمتر از ‪ ، %14‬افزايش شديد ويرمي در‬
‫سلول هاي مخزن غير از سلول هاي ‪T‬دارد‪ .‬البته عالوه بر‬
‫تعداد سلول هاي ‪ CD4+‬شاخص هاي جايگزين ديگري مانند‬
‫ميزان ‪B2‬ميكروگلوبولين و نيوپترين نيز در تعيين پيش اگهي‬
‫بيماري ارزشمند است‪.‬‬
‫درمان عفونت ‪HIV‬‬
‫درمان کنونی شامل تجويز سه گروه از داروهاي ضد ويروسي است كه به صورت‬
‫تركيبي به كار ميروند و مولكول هاي ويروسي را هدف قرار ميدهند اين درمان دارويي‬
‫سه تايي جديد‬
‫‪ ) HAART‬كه شامل مهار کننده نوکليوزيدی ترانس کريپتاز‬
‫[‪ ]NRTIs‬به عالوه يک مهار کننده پروتياز [‪ ]PI‬و يا يک مهار کننده ترانس کريپتاز‬
‫معکوس [‪ ]NNRTI‬است به عنوان مثال البيتگراوير‪ +‬كبيكيستات‪ +‬تنوفووير‪/‬‬
‫امتريسيتابين)ناميده ميشودو به صورت موثري باعث كاهش ‪ RNA‬ويروسي در‬
‫پالسما تاحد سطوح غير قابل اندازه گيري در اكثر بيماران تحت درمان براي بيش از‬
‫سه سال ميشود‪(.‬به گزارش اسوشيتدپرس ‪،‬شركت مرك آلمان سازنده داروي جديد‬
‫بانام ژنريك ‪ raltegravir‬توسط شخصي به نام ‪ Isentress‬مي باشد‪.‬خصوصيت‬
‫بارز اين دارو اين است كه برروي آنزيم اينتگراز ‪ HIV‬تاثير گذاربوده كه داروهاي‬
‫قبلي فاقد اين خصوصيت بوده اند‪).‬‬
‫روش هاي تشخیص‪HIV‬‬
‫ا‪-‬‬
‫روش االيزا(تايين تيتر آنتي بادي عليه ‪)HIV‬‬
‫‪ -2‬كيت ‪ rapid test‬براي غربالگري بيماران ايدزي از سالم‬
‫‪ -3‬روش فلوسايتومتري( كمك به تشخيص و پايش درمان)‬
‫فلوسايتومتري‬
‫استفاده باليني از فلوسايتومتري در نيمه دوم دهه ‪ 1970‬آغاز شد‪ .‬شايع ترين‬
‫درخواست باليني استفاده از فلوسايتومتري‪ ،‬انجام شمارش سلول هاي‬
‫‪CD8+‬و‪ CD4 +‬درخون محيطي بيماران ‪ HIV +‬جهت تعيين درجه وپايش‬
‫متوالي آن ازديگر كاربرد هاي تحقيقاتي مطالعه پالكت ها براي رديابي آنتي بادي‬
‫هاي ضد پالكتي در بيماري هاي خودايمني وتعيين فعاليت پالكت هايي است كه‬
‫در زمان برخورد خون با پروتزهاي عروقي يا سطح وسايل پزشكي دستخوش‬
‫تهيير ميگردند‪.‬‬
‫سيستم فلوييديك فلوسايتومتر اجزاي متعدد سلول را تعيين و هم زمان مورد‬
‫شمارش قرار مي دهد ‪ .‬اين سيستم با تنظيم فشار هوا از عملكرد پايدار جريان‬
‫هريك از خطوط نمونه و ‪ Sheath‬رسيده به فلوسل اطمينان حاصل مي كند‪.‬با‬
‫ورود نمونه به محفظه فلوسل حركت سريعتر مايع ‪ sheath‬بيروني فلوسل‬
‫باعث مي شود محلول ‪ sheath‬به صورت هيدروديناميكي فوكوس گشته و تنها‬
‫ذرات منفردي از آن در مقابل ناحيه باريكي مقابل پرتو ليزر قرار گيرند‪.‬در رايج‬
‫ترين حالت پرتو نوري يك يا چند ليزر با هر ذره برخورد كرده و سيستم ميزان‬
‫وجهت نور پراكنده شده را كه معياري از اندازه شكل و ساختمان ذرات پراكنده‬
‫مي باشد اندازه گيري مي نمايد‪.‬‬
‫حال اگر ذرات با يك يا چند رنگ فلويورسنت كه تحت عنوان فلوروكروم شناخته‬
‫ميشوند رنگ آميزي شوند منبع نوري با برانگيخته كردن اين مواد اطالعات‬
‫بيولوژيكي اضافه اي درباره هر ذره مانند حضور ماركرهاي سطحي خاصي را‬
‫فراهم مي نمايد‪.‬مزيت منحصر به فرد فلوسايتومتري اين است كه ميتواند‬
‫پارامترهاي چندگانه اي را به طور همزمان به سرعت و به صورت كمي بر‬
‫روي تك تك سلو لها‪،‬هريك به طور منحصربه فرد اندازه گيري كند‪.‬‬
‫به طور كلي ميتوان كاربرد هاي پزشكي فلوسايتومتري را در ‪ 4‬مورد‬
‫خالصه كرد‪:‬‬
‫‪-1‬تشخيص و طبقه بندي سرطان هاي خون‬
‫‪-2‬تشخيص فاكتورهاي بيولوژيكي و حضور برخي ملكول هاي اختصاصي كه‬
‫در تعيين پيش اگهي بيماري نقش دارند‬
‫‪-3‬شناسايي آنتي ژن هايي كه به عنوان هدف هاي درماني استفاده ميشود‪.‬‬
‫‪-4‬شناسايي سلول هاي باقيمانده بدخيم در طول درمان كه در تعيين پاسخ به‬
‫درمان واحتمال‬
‫اجزا و فیلترهاي ‪PARTEC CYFLOW COUNTETR‬‬
‫اين دستگاه با سه پارامتر نوري مجهز گرديده كه از اين سه پارامتربراي‬
‫آشكارسازي پرتوهاي نوري ‪( SSC‬نور پراكنده شده سمتي) و همچنين‬
‫فلويورسانس نارنجي (‪ )FL2‬وفلويورسانس قرمز(‪)FL3‬استفاده ميشود‪.‬‬
‫اين پرتوها تحت زاويه ‪90‬درجه نسبت به ليزر جمع آوري شده و سپس در‬
‫هركانال توسط فيلترهاي اپتيكي به طول موج هاي مختلف تقسيم ميگردند‪.‬‬
‫‪-1‬پردازش سيگنال‬
‫فتو مالتي پلير طول موج هاي مختلف توليد شده در مرحله قبل را جمع اوري نموده‬
‫وتوليد يك پالس الكتريكي مي نمايد وسپس پالس الكتريكي ايجادشده توسط پردازشگر‬
‫الكترونيك پردازش ميگردد ‪.‬‬
‫‪-2‬فيلتر اپتيكي‪:‬‬
‫يك فيلتر اپتيكي تنها اجازه عبور طول موج هاي معيني را داده و ساير طول موجها‬
‫راجذب ميكند‬
‫‪-3‬نمايش اندازه گيري‬
‫داده ها را ميتوان هم به صورت هيستوگرام تك پارامتري (‪ )CD4‬و هم به صورت‬
‫نمودار نقطه اي (‪ )CD4%‬نمايش داد‪.‬‬
Histograme showing human mononuclear cells incubated with anti-CD4
‫‪( Gain - 4‬بهره)‪ :‬بهره معياري از تقويت يك سيگنال است‪.‬‬
‫‪ Regions :Regions and Gates -5‬براي تعريف و تعيين يك‬
‫جمعيت سلولي معين ترسيم مي شوند ‪.‬در هيستوگرام هاي يك بعدي براي‬
‫ترسيم ‪ Region‬از ‪ range‬ودر نمودارهاي دو بعدي از ‪polygon‬‬
‫استفاده مي شود‪.‬‬
‫‪ :fluorescence staining -6‬اغلب براي داشتن اطالعات بيشتر‬
‫از سلولها بايد انها را با يك ماركر فلويورسانس نشان داركرد‪.‬‬
‫لكوسيت ها را به دليل داشتن ‪ CD‬ماركرهايشان به زيرجمعيت هايشان‬
‫تقسيم نمود‪.‬‬
‫نكات قابل توجه قبل از كار با ‪cyflow counter‬‬
‫‪-1‬محلول هايپكلرايت (محلول سفيد) براي رفع گرفتگي دستگاه است‪.‬‬
‫‪-2‬بهتر است ايزوتون ‪ sheath‬را هر دو يا سه هفته بعد از كاربا دستگاه دور بريزيم‪.‬‬
‫‪-3‬درب (قرمز رنگ) ‪ waste‬بايد محكم بسته شود تا دستگاه بتواند خال ايجاد كند‪.‬‬
‫‪ -4‬در ظرف ‪ waste‬بايد مقداري وايتكس بريزيم تا آلودگي به ‪ HIV‬از بين برود‬
‫‪-5‬نمونه استفاده شده براي ازمايش خون حاوي ضدانعقاد ‪ EDTA‬موجود در ويا ل‬
‫‪CBC‬است‪.‬‬
‫‪-6‬بهتر است خون استفاده شده تازه باشد و اگر مكان نمونه گيري دور از آزمايشكاه است تا‬
‫حداكثر ‪ 48‬ساعت به ازمايشگاه ارسال شود‪.‬‬
‫‪ -7‬به طور تجربي مشاهده شده مقادير آزمايش شده بعد از ‪ 24‬ساعت ‪ %10-+‬تفاوت با مقادير‬
‫اوليه دارد‪.‬‬
‫روشن و آماده كردن دستگاه ‪Cyflow counter‬‬
‫‪ )1‬ابتدا كليد برق اصلي واقع در پشت دستگاه را روشن نموده سپس كليد سبز رنگ واقع‬
‫شده در سمت چپ لوگوي پارتك كه در جلوي دستگاه واقع گرديده را فشار دهيد‪.‬‬
‫‪ )2‬استفاده از نرم افزار ‪Cyview‬‬
‫اين نرم افزار به طور اتوماتيك پس از روشن نمودن كامپيوتر اجرا مي گردد‪.‬‬
‫‪ )3‬شستشو‬
‫يك لوله حاوي ‪ 1/6‬ميلي ليتر محلول شستشوي پارتك (كدپارتك‪ )04-4009‬را به‬
‫صورت پورت نمونه وارد نماييد‪ .‬استارت را براي شروع اندازه گيري كليك كرده و تا زماني‬
‫كه اندازه گيري و پروسه شستشوي بعد از ان به طور اتوماتيك متوقف مي شود منتظر بمانيد‪.‬‬
‫فرايند فوق را با ‪ 1/6‬ميلي ليتر مايع ‪ sheath‬براي حذف محلول هاي شستشوي‬
‫ته مانده تكرار نماييد‪.‬‬
‫كنترل كيفيت دروني دستگاه بطري حاوي بيدهاي سبز را ‪2‬دقيقه تكان داده سپس‬
‫‪ 850‬ميكرون ( الندا ) از آن رادر لوله نمونه ريخته و آن را در پورت نمونه دستگاه‬
‫قرار داده و استارت را براي شروع اندازه گيري كليك نماييد وتا زماني كه اندازه‬
‫گيري و پروسه شستشوي پس از ان متوقف ميشود منتظر بمانيد سپس داده ها را در‬
‫صورت نياز ذخيره سازي و يا چاپ نماييد‪.‬‬
‫داده هاي فوق را با اندازه هاي موجود بر روي برچسب بطري بيد مقايسه كنيد‪ .‬اگر‬
‫تفاوت به ميزان ‪ ± %10‬باشد دستگاه براي آناليز هاي بعدي آماده است‪.‬‬
‫شمارش ‪ CD4‬به دو روش زير صورت ميگيرد‪:‬‬
‫‪ 20 )1‬الندا از خون بيمار ‪ 20 +‬الندا آنتي بادي واقع در كيت مورد استفاده‬
‫راكامال ‪ mix‬كرده و ‪ 15‬دقيقه در دماي اتاق و در جاي تاريك انكوبه مي‬
‫نماييم‪.‬بالفاصله بعد از گذشت زمان انكوبه‪ 800 ،‬الندا بافر اضافه نموده و با‬
‫دستگاه ميخوانيم‪.‬‬
‫‪ 20 )2‬الندا خون بيمار را در تيوپ هايي كه آنتي بادي قبال در آن ‪DRY‬‬
‫شده مي ريزيم و به مدت ‪ 15‬دقيقه در دماي اتاق و در جاي تاريك انكوبه مي‬
‫نماييم ‪.‬سپس ‪ 800‬الندا محلول بافر را در تيوپ ريخته بالفاصله براي خواندن‬
‫به دستگاه مي دهيم‪.‬‬
‫محاسبه درصد ‪)CD4%(CD4‬‬
‫در كيت مورد استفاده آنتي بادي در تيوپ درب زرد رنگ به صورت ‪DRY‬است‪.‬‬
‫‪ 20‬الندا خون تام را در تيوپ فوق ريخته ‪ 15 ،‬دقيقه در دماي اتاق و در جاي‬
‫تاريك انكوبه ميكنيم (نكته قابل توجه ‪:‬هر ‪ 5‬دقيقه تيوپ را ‪ shake‬مي كنيم) بعد‬
‫از گذشت زمان ‪ 15‬دقيقه‪ ،‬ابتدابافر موجود در تيوپ درب نارنجي و سپس بافر‬
‫موجود درتيوپ درب مشكي را در تيوپ درب زرد ريخته و آن را به دستگاه مي‬
‫دهيم‪.‬‬
‫مراحل نرم افزاري طي شده بعد از دادن نمونه ها به دستگاه‪:‬‬
‫بعد از دادن نمونه از گزينه استارت براي شروع اندازه گيري استفاده مي‬
‫كنيم‪.‬‬
‫براي بارگذاري ‪ script‬متناظرو براي اندازه گيريت مطلق تعداد‬
‫‪CD4‬واندازه گيری ‪CD4%‬به روش زير عمل مي كنيم‪.‬‬
‫‪setting → Load script → CD4 scr Or CD4% scr‬‬
‫در اندازه گيري مطلق ‪ CD4‬مي توان محل پيك هيستوگرام را با تهييرمقدار بهره (‪)gain‬‬
‫درحين اندازه گيري تعيين نمود‪.‬‬
‫افزايش بهره ‪،‬پيك ها را به سمت راست و كاهش آن‪ ،‬پيك ها را به سمت چپ جا به جا‬
‫ميكند‪.‬در بيشتر مواقع با تهيير مقدار بهره و سيگنال ها ‪،‬پيك ها را در يك هيستوگرام بهينه‬
‫مي كنند‪.‬ضمنا بايد دقت كرد در طول انجام يك شمارش كه با نوار سبز رنگ سمت راست‬
‫نشان داده مي شود هيچ يك از پارامترهاي سرعت‪،‬بهره و ‪ L-L‬نرم افزار را تهيير‬
‫ندهيم‪.‬همچنين بايد تا زماني كه اندازه گيري و فرايند شستشوي پس از آن به طور اتوماتيك‬
‫متوقف نشده منتظر بمانيم‪ .‬درطي اين فرايند ‪ Flush‬در سمت راست نمايش داده مي شود‪.‬‬
‫در انتها نمايش اندازه گيري بر حسب سلول بر ميكروليتر در پنجره ‪ result‬نشان داده شده‬
‫در پنجره ‪ particles‬تعداد مطلق جمعيت سلولي آناليز شده در حجم ‪200‬ميكروليتر نمايش‬
‫داده ميشوند‪.‬‬
‫مشخصات منوي پايين صفحه نمايش‪:‬‬
‫منوي پايين صفحه نمايش شامل توابع و اطالعات زير ميباشد‪:‬‬
‫‪ : Start‬زماني كه نمونه به دستگاه داده شود از اين گزينه براي شروع اندازه‬
‫گيري استفاده ميشود ‪.‬‬
‫‪ :Break‬زماني كه بخواهيم يك اندازه گيري معين را در يك مرحله خاص قطع‬
‫كنيم لز اين گزينه استفاده ميشود‪.‬فرايند اندازه گيري را ميتوان در زمان ديگري‬
‫ادامه داد‪.‬‬
‫‪ :Cancel‬براي لهو فوري اندازه گيري در حال انجام لز اين گزينه استفاده‬
‫ميشود‪.‬‬
‫‪ :Bottles‬سطح باالي بطري هاي حاوي ‪sheath‬و‪ waste‬را نشان ميدهد‪.‬‬
‫رنگ قرمز نشان دهنده اين است كه يا بطري ‪ sheath‬خالي از محلول و يا‬
‫بطري ‪ waste‬پر مي باشد‪.‬‬
‫‪ :flow‬مقادير ‪ sheath‬بر حسب ميكروليتر بر وجريان نمونه بر حسب ذره بر‬
‫ثانيه به طور طورمتناوب نشان ميدهد‪.‬‬
‫‪:Clean‬با كليك كردن اين گزينه يك چرخه شستشوي دروني فعال ميگردد‪.‬‬
‫‪:Data‬ظرفيت حافظه براي هر اندازه گيري را نمايش ميدهد‪.‬‬
‫‪:Clear‬با كليك نمودن اين گزينه داده ها را از نمودارهاي نقطه اي و هيستوگرام محو‬
‫خواهيم نمود‪.‬‬
‫‪: Smpl‬سطح بااليي محتواي لوله نمونه را نمايش ميدهد‪.‬رنگ سبز نشان دهنده‬
‫پربودن لوله نمونه و رنگ قرمز نشانگر خالي بودن ان ميباشد‪.‬تركيب رنگ سبز و قرمز‬
‫نشان دهنده اين است كه سطح نمونه بين دوالكترود مي باشدبنابراين نبايد در هيچ بك از‬
‫تنظيمات دستگاه تهييري ايجاد كرد‪.‬‬
‫روند خاموش كردن و شستشوي روزانه‪:‬‬
‫‪ 1/6 )1‬ميلي ليتر محلول گندزدا را در تيوپ نمونه ريخته و آن را به پورت نمونه وصل‬
‫واستارت را كليك کرده و تا زماني كه فاز ‪ PRERUN‬پايان يابد منتظرمانده وسپس سرعت را به‬
‫‪ 20‬افزايش دهيد‪ .‬همچنين تا زماني كه اندازه گيري و فرايند شستشوي پس از آن به طور اتوماتيك‬
‫متوقف مي شود‪.‬‬
‫‪ )2‬مرحله فوق را با ‪ 1/6‬ميلي ليتر محلول شستشو تكرار كنيد‪.‬‬
‫‪ 1/6 )3‬ميلي ليتر مايع شيث را در تيوپ نمونه ريخته و آن را به پورت نمونه وصل نموده‬
‫واستارت را كليك نموده و تا زماني كه فاز ‪ PRERUN‬پايان يابد منتظر بمانيد و سپس‬
‫سرعت را به ‪ 20‬افزايش دهيد‪ .‬پس از يك دقيقه از انجام اندازه گيري‪ stop ،‬را كليك مي كنيم‪.‬‬
‫‪ 10 )4‬تا ‪ 20‬ميلي ليتر محلول هايپوكلرايت را به بطري ‪ waste‬اضافه نموده و آن‬
‫را به مدت ‪ 15‬دقيقه قبل از دور ريختن ‪ waste‬انکوبه نماييد‪.‬‬
‫‪ )5‬دستگاه را خاموش نماييد‪.‬‬