Transcript 维生素E
维生素 E Vitamin E 王巧群 01药剂 化学名称：（±）-2,5,7,8-四甲基-2-(4,8,12-三甲 基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇 分子式：C31H52O3 472.75 结构与性质 鉴别试验 维生素E 主要内容 杂质检查 含量测定 维生素E 维生素E为α-生育酚及其各种酯类。 分天然品（右旋体）和合成品 （消旋体）。 一般药用品为合成品，即消旋体。 中国药典（2000）收录： Vitamin E Injection ; Vitamin E Powder Vitamin E Soft Capsules ; Vitamin E Tablets 维生素的结构 维生素E为苯并二氢吡喃醇衍生物，苯环上有 一个乙酰化的酚羟基，故又称为生育酚。 化学名称为： （±）-2,5,7,8-四甲基-2(4,8,12-三甲基十三烷基）-6-苯并二氢吡喃醇 醋酸酯。 主要有α、β、γ和 δ等多种异构体，其中以α异构体的生理活性最强。 维生素E 紫外吸 溶解性 水解性 氧化性 收特性 维生素E的性质 溶解性：黄色或黄色透明的粘稠液体，在 无水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚中易溶， 在水中不溶 。 水解性：苯环上含有乙酰化的酚羟基，在 酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离生 育酚，故常作为特殊杂质进行检查。 维生素E的性质 氧化性：维生素E在无氧条件下对热稳定，加 热200℃ 也不破坏，但对氧十分敏感，遇光、 空气可被氧化。其氧化产物为α-生育醌和α-生 育酚二聚体。 紫外吸收特性 维生素E中苯环上有酚羟基，固 有紫外吸收，其无水乙醇液在284nm的波长 处有最大吸收，其吸收系数为41.0～45.0。 鉴别实验 硝酸反应：维生素E在硝酸条件下，水解生成生育酚， 生育酚被硝酸氧化为邻醌结构的生育红而显橙红色。 维生素E 生育红（橙红色） 三氯化铁反应 原理：维生素E在碱性条件下，水解生成游离 的生育酚，生育酚经乙醚提取后，可被Fecl3 氧化成对-生育醌；同时Fe3+被还原为 Fe2+， Fe2+与联吡啶生成红色的配位离子。 方法：取本品约10mg，加乙醇制KOH 试液 2ml,煮沸5min,放冷，加水4ml与乙醚10ml， 振摇，静置使分层；取乙醚液2ml，加2-2‘-联 吡啶的乙醇溶液(0.5 100）数滴，应显血红 色。 三氯化铁反应 对-生育酚 三氯化铁反应 血红色 紫外光谱法 维生素E的0.01％无水乙醇液，在284nm的波 长有最大吸收；在254nm的波长处有最小吸 收，可供鉴别。 薄层色谱法 将供试品点于硅胶G薄层板上，以环己烷－乙 醚（4：1）为展开剂，展开10cm～15cm后， 取出，于空气中晾干，喷以浓硫酸，在105℃ 加热5min， α-生育酚醋酸酯和α-生育醌的Rf 值分别为0.5、0.7和0.9。 其他方法（鉴别） 气相色谱法 USP(24) 红外光谱法 BP(2000),JP(14) 三、杂质检查 一、酸度 目的：检查维生素E制备过程中引入的游离醋酸。 方法：取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚 酞指示液0.5ml，滴加NaOH滴定液（0.1ml/L) 至微显粉红色，加本品1.0g，溶解后，用 NaOH滴定液（0.1ml/L)滴定，不得超过0.5ml。 （CH.P) 二、生育酚 来源：制备过程中未酯化 原理：利用游离生育酚的还原性，可被硫酸铈定量 氧化。故在一定条件下以消耗硫酸铈滴定液 （0.01mol/L)的体积来控制游离生育酚的限量。 方法：（硫酸铈滴定法）取本品0.10g,加无水乙醇 5ml溶解后，加二苯胺试液一滴，用硫酸铈滴定 液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈滴定液 （0.01mol/L)不得过0.5ml. 生育酚的检查 生育酚：Ce4+ ＝1：2 生育酚的分子量为430.7 中国药典规定维生素E中所含的游离生育酚 ≤ 2.15％ 每1ml硫酸铈滴定液（0.01mol/L）相当于 0.002154g的游离生育酚。 计算L=（T×V）/S×100% =0.002154×1.0/0.10×100％＝2.15％ 含量测定： 气相色谱法 CH.P（2000） BP(2000) USP(24) 高效液相色谱法 JP(14) （外标法） 荧光分光光度法 鉴别测定方法选择 鉴别： 气相色谱法 USP(24) 红外光谱法 BP(2000),JP(14) 含量测定： 气相色谱法 CH.P（2000） BP(2000) USP(24) 高效液相色谱法 JP(14) （外标法） 荧光分光光度法 气相色谱法Ch.p(2000） 色谱条件与系统适用性实验 以硅酮(OV-17)为固定相，涂布浓度为2％；柱温为 265℃ 。理论板数按维生素E计算应不低于500，维生 素E峰与内标物质峰的分离度应大于2。 校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀 释成每1ml中含1.0ml的溶液，摇匀，作为内标溶液。 另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞 锥形瓶中，精密加入内标溶液10ml，密塞，振摇使溶 解，取1～3ul注入气相色谱仪，计算校正因子。 测定法：取本品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶 中，精密加入内标溶液10ml密塞，振摇使溶解，取1～ 3ul注入气相色谱仪，测定，计算，即得。 气相色谱法 BP(2000)虽采用正三十二烷为内标，但Rf≥ 1.4; USP(24)采用十六酸十六醇酯为内标， Rf≥ 1.0 高效液相色谱法（JP (14)外标法） 色谱条件 色谱柱： 内径4mm，长15cm～30cm的不锈钢柱 固定相：填充粒经5um~10um的十八烷基硅烷键合 硅胶 流动相：甲醇-水（49：1） 检测波长：292nm 高效液相色谱法 方法：取维生素E供试品和生育酚对照品各约 0.05g，精密称定，分别溶于无水乙醇中，并 准确稀释至50.0ml，即得供试品溶液和对照品 溶液；精密吸取两种溶液各20ul注入高效液相 色谱仪，记录色谱图，分别测量维生素E的峰 高Hx和Hr 供试品中生育酚的量（mg)＝mr× Hx /Hr mr为生育酚对照品的量（mg）； Hx和 Hr分别 为供试品和对照品中生育酚的峰高。 同步荧光扫描技术 在同时扫描两个两个单色器波长的情况下，由 测得的荧光强度信号与对应的激发波光或发射 波长构成光谱图，与通常的荧光法比较具有以 下优点： 1、使光谱简化；2、使谱带窄化；3、减小光 谱的重叠现象；4、减少散射光的影响。 同步荧光 荧光法 维生素E的荧光峰和溶剂的拉曼光 谱重叠，影响荧光法的灵敏度及准确性。 同步荧光扫描法 选择适当的△λ，可有效 地消除溶剂拉曼光谱的干扰，提高测定方法的 灵敏度及准确性。 同步荧光扫描法 仪器：日立F-4010型光谱分光光度计。 维生素E对照品溶液：dl-α-生育酚用正己烷配 成1mg/ml，放4℃ 冰箱保存，临用时再用无水 乙醇稀释成4.0mg/L。 方法 U 血清、对照品 水0.1ml，无水乙 正己烷2.0ml，混匀 取上清液置1cm S 液、水各0.1ml 醇0.4ml，混匀30s 60s，离心2min 石英比色池 B 在荧光分光光度计上以发射、激发波长间隔△λ为40nm，在220nm～ 400nm扫描同步荧光光谱，测定同步荧光峰（337nm）的荧光强度信 号值。荧光光度计的工作条件为双狭缝10nm，响应时间2s，扫描速度 600nm/min。 计算 VE=(FU-FB)/(FS-FB)×4.0(mg/L) FU、FB、FS分别为测定、标准和空白管在VE同步荧光峰337nm 处的荧光强度。