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Le Diagnostique
Les Bacilles Gram Positifs
Classification
Aérobie et
aérobie facultatif
Bacillus
Anaérobie
stricte
Clostridium
Aérobie
Listeria
Sporulants
Bacilles Gram
Positifs
Non-sporulants
Caractéristiques des Bacilles
Sporulants
• Tous sont de gros bacilles Gram
positifs
• Font des endospores
• Principalement retrouvés dans le
sol, les eaux et la poussière
• Exigences nutrionelles très
diverses
– Utilisent des sources de carbones
simples et complexes
– Leurs spores leurs permettent de
résister à des conditions extrêmes
Morphologies des Endospores
• Position:
– Terminale (a, d, e)
– Subterminale (b)
– Centrale (c, f).
• Forme:
– Circulaire (b, d)
– Ellipsoïde (a, c, e, f)
• Diamètre:
– Non déformant (a, b, c)
– Déformant (d, e, f).
Les Bacilles d’Importance Médicale
• Bacillus
– Majoritairement inofensifs
– Quelques espèces opportunistes
• Bacillus cereus & Bacillus subtilis
– Empoisonement alimentaire
– Une espèce pathogène
• Bacillus anthracis
– Anthrax
Aérobie et
aérobie
facultatif
Bacillus
Anaérobie
stricte
Clostridium
Aérobie
Listeria
Sporulants
Bacilles Gram
Positifs
Non-sporulants
Les Bacilles d’Importance Médicale
• Clostridium
– Plusieurs espèces pathogènes
• Clostridium perfringens
– Gangrène gazeuse
• Clostridium tetani
– Tétanos
• Clostridium botulinum
– Botulisme
• Clostridium difficile
– Diarrhée
prolonged contraction of skeletal
muscle fibers, neurotoxin
produced by the bacteria
Canned food that has not been
sterilized properly; paralytic illness
Identification: Tests Métaboliques
• Bouillon de phénol rouge
– Métabolisme de sources de carbones simples
– Source de carbone:
• Peptone (protéine  acides aminés)
• Sucre désiré ajouté
– Indicateur de pH
• Phénol rouge
– Jaune pH acide
– Orange pH neutre
– Rouge pH alcalin
Bouillons de Phénols Rouges
• Utilisation de Carbone:
– Sucre
• Réaction acide (Jaune)
• ou neutre (Original)
– Protéine
• Réaction alcaline (Rouge)
Fermentation du Glucose
• Fermentation avec accumulation d’acide:
– Glucose  pyruvate  acide lactique et/ou acétique + CO2
• Fermentation avec accumulation de produits
neutres
– Glucose  pyruvate  acétoine  2 butanediol + CO2
Test de Méthyl Rouge
• Test pour l’accumulation d’acide
– Sources de carbones: Glucose et protéines
– Indicateur -méthyl rouge; Ajouté après
• MR +: rouge (pH < 5.2)
• MR - : jaune (pH > 5.2)
Neutre
Acide
Test de Voges-Proskauer
Réactifs VP:
butanediol + -naphthol + KOH + O2  acétoine
VP + = rouge
VP - = jaune
Résultats habituelle de MR/VP:
MR+/VP-; MR-/VP+ MR-/VPAcide
produite
Pas
Neutre
d`acétoine
Acétoine
- +
Utilisation d’Urée
• Carbone:
– Urée + protéin sur la plaque
Négatif
Positif
• Enzyme
– Uréase
• Indicateur de pH
H2 N
H2 N
– Phénol rouge (rose)
C O + 2 H2O  CO2 + H2O + 2 NH3  (NH4)2CO3
urée
ammonium
carbonate
Acides aminés
(alcalin)
Utilisation du Carbone Complexe
• Trop gros pour le transport à l’intérieur
• Nécessite enzymes exocellulaires pour la
dégradation externe en petites unités
– Polysaccharides
• Amidon (amylase)
– Lipides (lipase)
• Tributyrine
– Protéines (protéase)
• Caséine (caséinase)
Amylase
Avant l’ajout d’iode
Après l’ajout d’iode
Caséinase
Lipase – Spirit Blue
La Respiration Aérobie
La Chaîne de Transport d’e2 H+
extérieur
Fp
2 e-
Fe-S
2 H+
intérieur
2 e-
Q
NADH + H+
FADH2
2 e-
Cyt b
3 H+ + 3 OH-
2 e-
H+
2 H+
Cyt o
3 H2O
3 H+ + 1/2 O2
H2O
Respiration aérobie:
1) Utilise l'oxygène comme capteur
final d'e2) Cytochrome oxydase est impliqué
Les bactéries peuvent
effectuer la respiration
aérobie?
Test d’Oxydase
phenylenediamine
Doit avoir CTE et
cytochrome oxydase.
Tester pour la présence
de cytochrome oxydase.
• Cytochrome oxydase catalyse la réduction du capteur
final d’e-, l’oxygène
• Un donneur artificiel d’e-, la phenylenediamine, est
utilisé pour réduire le cytochrome oxydase
• Si l’enzyme est présente, le réactif incolore (état réduit)
deviendra bleu (état oxydé)
Bactéria devient bleu.
Le média toujour devient bleu.
Vivre dans la présence
d'oxygène génére
beaucoup de radicaux
libres (p. ex. peroxydes).
Catalase
Catalase décompose le
peroxyde en H2O + O2.
Bactéries fait-il cela?
On ajoute ça.
2H2O2
catalase
Détecter les bulles.
2H2O + O2 
Produit de la respiration
dommageable pour l’ADN
Ajout de 3% H2O2 à la
croissance bactérienne
Bulles
(O2)
Métabolisme d’aérobie requière la catalase
Respiration Anaérobie
2 H+
2 e-
Extérieur
Fp
Fe-S
2 H+
Intérieur
2 e-
Q
NADH + H+
FADH2
2 e-
Cyt
b
2 H+
3 H+ + 3 OH -
2 e-
Nitrate
réductase
3 H2O
NO3- + 2 H+ (N = +5) nitrate
Capteur final d’eNO2- + H2O (N = +3) nitrite
Respiration anaérobie :
1) Utilise quelque chose
(nitrate) autres que
l'oxygène comme capteur
final d'e2) Nitrate réductase est
impliquée
Nitrate Réductase
NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O +
nitrate
NO2-
nitrite

NO, N2O,
NH2OH,
NH3, N2
Étape 1: Test pour nitrite
NO2- + acide sulfanilique et alpha naphthylamine  HNO2
Nitrate est réduit
Production de Nitrite
Rouge
Nitrate est réduit au nitrite
Nitrite est réduit
Absence de Nitrite
Jaune
Nitrate n’est pas
réduit
Absence de Nitrite
Jaune
Nitrate Réductase (suite)
NO3- + 2 H+ + 2 e-  H2O +
nitrate
NO2-
nitrite

NO, N2O,
NH2OH,
NH3, N2
Étape 2: Test pour présence du nitrate
NO3- + Zn (s)  NO2-
Nitrate est présent
Réduction au Nitrite
Rouge
Nitrate est absent
Nitrite a été réduit
Jaune
Le Diagnostique
Les Cocci Gram Positifs
Classification
Streptococcaceae
Catalase -
Aérobie &
anaérobie
facultatif
Cocci Gram
Positifs
Streptococcus
Micrococcus
Micrococcaceae
Catalase +
Aérobie
Staphylococcus
C’est quoi le test de catalase?
Caractéristiques des Cocci Gram
Positifs
• Tous sont non sporulants
• Principalement retrouvés
parmi la flore naturelle
des hommes et des
animaux
• Exigences nutrionelles
fastidieuses
– Utilisent des sources de
carbones simples
Aggrégation Cellulaire des Cocci
Gram Positifs
Micrococcus &
Streptococcus
Streptococcus
Micrococcus
Staphylococcus
Les Cocci Gram Positifs d’Importance
Médicale
• Micrococcaceae
– Staphylococcus aureus
• Cause plusieurs types d’infections, maladies alimentaires et choc
toxique
– Staphylococcus epidermidis
• Cause des infections opportunistes
– Staphylococcus saprophyticus
• Cause majeure de cystites chez les femmes
Les Cocci Gram Positifs d’Importance
Médicale
• Streptococcaceae
– Streptococcus pyogenes
• Pharyngite (strep throat) et infection à bactérie mangeuse de
chair
– Streptococcus agalactiae
• Infections génitales
– Streptococcus mutans
• Endocardites
– Streptococcus pneumonia
• Otite, meningite et pneumonie
– Enterococcus spp.
• Infections opportunistes
Identification: Tests Métaboliques
• Microccocus Vs Staphylococcus
• Test d’oxydase (cyto oxidase)
– Micrococci sont +
– Staphylococci sont –
• Bacitracine (antibiotique)
– Micrococci sont sensibles
– Staphylococci sont résistants
Streptococcus pyogenes (Pharyngite
/strept throat)
 Test de sensibilité à la Bacitracin
vs
Streptococcus pneumoniae (pneumonie)
 Test de sensibilité à l`optochin
Identification: Tests Métaboliques
• Différentitation des espèces de Staphylococcus
• Test de coagulase (agglomération de cocci)
– Les staphylococci coagulase positifs
» S. aureus
– Staphylococci coagulase négatifs
» Tous les autres Staphylococci
• Fermentation du mannitol (géloses de mannitol + sels)
– S. aureus et quelques S. saprophyticus sont positifs
– S. epidermidis est negatif
S. epidermidis
S. aureus
Identification: Tests Métaboliques
• Différentiation des espèces de Streptoccocus
• Regroupement sérologique de Lancefield
– Fondé sur le type d’hydrate de carbone dans leur paroi
» 8 groupes (A-H et K-U)
» Groupe A: β-hémolytique - Streptococcus pyogenes
» Groupe B: β-hémolytique - S. agalactiae
» Groupe C: α ou γ hémolytique- S. viridans
» Groupe D: γ –hémolytique – Enterococcus
» Pas classifié d’après le regroupement de Lancefield
» α hémolytique- S. pneumoniae et S. mutans
Hémolyse Sanguine
• Gélose de sang:
– Discrimination d’après patrons d’hémolyses
• Hémolyse alpha - Hémolyse incomplète
• Hémolyse beta - Hémolyse complète
• Hémolyse gamma - Aucune hémolyse
Enzymes = Hémolysines
Identification: Tests Métaboliques
• Identification de Streptoccocus pneumoniae
– Solubilisation par la bile
• Strep. pneumoniae est positif
• Autres Strep. sont négatifs
• Identification d’Enterococcus
– Test de bile-esculin
• Enterococcus est positif
• Autres Strep. sont négatifs