Transcript LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase

LE BOUILLON NITRATÉ :
Recherche de la Nitrate Réductase (NR)
1. Intérêt
Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du
métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE.
2. Composition
Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium NaNO3 (1% = 1 g / 100 mL)
3. Principe
Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO3- sont réduits par la nitrate
réductase :
- Soit en NITRITES NO2- : glucose
produits oxydés + n e-
NO3- + ……… + ………
NO2- + ………
nitrate réductase
(stade nitrites)
- Soit en DIAZOTE N2 :
glucose
produits oxydés + n e-
NO3- + ……… + ………
N2 + ………
nitrate réductase
(stade diazote)
LE BOUILLON NITRATÉ :
Recherche de la Nitrate Réductase (NR)
-LE RÉACTIF DE GRIESS :
 Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) + a-naphtylamine (nitrite 2)
 Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO2- :
Réactif de Griess + ions nitrites NO2-
COMPLEXE ROUGE
-LE ZINC (Zn) :
 Composition : Zinc pur (en poudre)
 Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO3- :
Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO3- (éventuellement présents) en
ions nitrites NO2-. Ces ions nitrites NO2- peuvent alors réagir avec le réactif de
Griess pour former un complexe rouge
4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)
LE BOUILLON NITRATÉ :
Recherche de la Nitrate Réductase (NR)
5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube)
Observation : coloration rouge
Interprétation : présence de NO2- issus de la réduction des NO3Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO2-)
Réactif de
Griess
(nit1 + nit2)
Zinc
Observation : pas de coloration rouge
Interprétation : pas de présence de NO2issus des NO3-. Les NO3- été réduits en N2
par la bactérie
Conclusion : NITRATE REDUCTASE +
(stade N2)
Observation : coloration rouge
Interprétation : le Zn a réduit les NO3encore présents en NO2- qui sont révélés par
le réactif de Griess.
=> Pas de réduction de NO3- en N2
Conclusion : NITRATE REDUCTASE -