Transcript 第十章甾体激素类药物的分析基本结构：环戊烷骈多氢菲

第十章
甾体激素类药物的分析
第一节 基本结构与分类
C21
2
3
18 C20
12
17
11
19
13
C D 16
1
14
9
10
15
8
A
4
B
5
6
7
基本结构：环戊烷骈多氢菲
分类：
肾上腺皮质激素
雄性激素及蛋白
同化激素
甾体激素
性激素
孕激素
雌激素
一、肾上腺皮质激素
O
HO
CH2OH
H
OH
H
H
O
氢化可的松
O
O
HO
O
H
CH3
OH
CH3
F
H
H
O
醋酸地塞米松
主要活性基团
△4 –
3–酮
C17 – α – 醇酮基
性
质
UV、与羰基试剂
反应
还原 性
二、雄性激素及蛋白同化激素
O
CH3
O
H
H
H
O
H
丙酸睾酮
O
O
H
H
H
H
O
苯丙酸诺龙
主要活性基团
△4 –
3–酮
C17 – β – 羟基
性 质
UV、与羰基试剂
反应
(可)成酯
孕激素
CH3
C O
H
H
H
O
黄体酮
主要活性基团
性 质
3–酮
UV、与羰基试剂
反应
C17 –甲酮基
与亚硝基铁氰化纳
反应
C17 –乙炔基
与AgNO3反应
△4 –
雌激素
C CH
OH
H
H
H
HO
炔雌醇
主要活性基团
性
质
A环为3–OH 苯环
UV、与重氮苯磺酸
盐反应
C17 –乙炔基
与AgNO3反应
C17 –羟基
可成酯
第二节 鉴别试验
一、物理常数的测定
1、熔点：
2、比旋光度：偏振光透过长1dm且每1ml中含有旋光物
质1g的溶液，在一定的波长和温度下测得的旋光度。
如醋酸地塞米松：二氧六环中10mg/ml下比旋度+82~88º
3、吸收系数：如醋酸地塞米松在无水乙醇中240nm
（15g/ml）吸收系数为343~371
二、化学鉴别法
（一）与强酸的呈色反应（母核）
甾体激素类
药物
H2SO4 H3PO4
HClO4 HCl
呈色
与硫酸显色反应
显 色
荧光
加水稀释
醋酸可的松
黄或微
带橙
褪色并澄
清
炔雌醇
橙红
黄绿
絮状↓玫红
炔雌醚
橙红
黄绿
↓红色
泼尼松
橙
黄→蓝绿
泼尼松龙
深红
絮状↓灰
(二) 官能团的反应
1、 C17 – α – 醇酮基
还原性
A. 呈色反应
肾上腺皮质激
素药物
四氮唑盐
OHˉ
呈色
B. 沉淀反应
肾上腺
皮质激
素药物
氨制硝酸银
碱性
酒石酸铜
Ag↓黑色
Cu2O↓橙红色
2. C3–酮基和C20–酮基
甾酮类激素
药物
羰基试剂
呈色
常用的羰基试剂：
2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼
CONHNH 2
OH
N
HCl
O
OH
睾酮
CONHN
N
异烟腙（黄色）
CH 3
黄体酮
CONHNH 2
C O
2
N
HCl
CH 3
C NHNOC
O
N
CONHN
N
异烟双腙（黄色）
3. 甲酮基
具有甲酮基
或活泼亚甲
基药物
黄体酮
其他甾体
亚硝基铁氰化纳
间二硝基酚
呈色
芳香醛
亚硝基铁
氰化钠
蓝紫色
淡橙色
不显色
CH 3
C O
[Fe CN  NO ]

    
OH

O
CH
NO CN 5 Fe
4-
C O
+ 2 H 2O
黄体酮
O
蓝紫色
4. 酚羟基
雌激素
类药物
重氮苯磺酸
红色偶氮染料
5. 乙炔基
含炔基的
甾体激素
硝酸银
银盐沉淀
AgNO3
R C CH
R
C
CAg↓
炔雌醇
OH
C CH
AgNO 3
HO
OH
C CAg
HO
白
6. 有机卤素
呈色（蓝紫色）
茜素氟蓝
有机氟
有机破坏
有机氯
硝酸亚铈
Fˉ
Clˉ
硝酸—硝酸银
AgCl↓
O
茜素氟蓝
OH
OH
CH2 COOH
CH2N
CH 2COOH
O
FO
Ce

OH
蓝紫色
O
CH 2 COO
CH 2N
O
Ce
CH 2 COO
F
OH
7.酯的反应
C17或C21位上羟基的酯，水解产生相应的
羧酸，再根据羧酸的性质进行鉴别。
如：
R  OCOCH   
醇制KOH
H SO 
C HOH
CH CH OCOCH 
香
特臭
醇制NaOH
戊酸雌二醇  
  戊酸
 H
醇制OH 
己酸羟孕酮


己酸
 H
特臭
三 、 制备衍生物测定m.p.
（一）缩氨基脲的生成
盐酸氨基脲
苯丙酸诺龙    缩氨基脲衍生物
△
m.p.约℃分解
（二）酯的水解
醇制KOH
丙酸睾酮   
 睾丸素 
△
m.p. ~ ℃
四 、UV法
C CC O
△４-3-酮
240nm
C CC CC C
苯环
280nm
五、 IR法
OH
C CH
炔雌醇
HO
结构特征：酚羟基、C17 –OH
C17 –乙炔基
六、 TLC法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别

方法：对照品法
要求供试品溶液所显主斑点的颜色和
位置与对照品溶液的主斑点相同。
七、 HPLC法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋
酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）

方法：对照品法
要求在含量测定项下记录的色谱图中，供
试品峰的tR与对照品峰的tR一致。
第三节 特殊杂质检查
一、有关物质的检查
来源 ：原料、中间体、异构体、降解产物
特点：（1）可能存在多个甾体杂质
（2）结构类似
方法（具有一定分离能力）：TLC法（高低浓
度对比法）；HPLC法（主成分自身对照）
（一）TLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
 规定杂质斑点数目
 规定杂质斑点颜色
醋酸氟轻松:检查有关物质
取本品加氯仿-甲醇（9 ：1）制成3.0mg/ml作
为供试液，精密量取适量，加氯仿-甲醇（9 ：1）稀
释成0.06mg/ml作为对照液；照薄层色谱法，各取5μl，
分别点于同一硅胶G板上，以氯仿-甲醇（97 : 3）为
展开剂，展开后晾干，在105℃干燥10分钟，放冷，
喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视，供试品溶液如
显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照液的主斑
点比较，不得更深。
特点：
（1）简便易行，不需特殊的仪器；
（2）不需对照品；
（3）只能控制单个杂质的限量；
（4）要求杂质与主成分的显色灵敏度接近。
（二）HPLC法（高低浓度对比法）
判定方法：
 规定杂质峰数目
 规定杂质峰面积
特点：
（1）需特殊的仪器；
（2）不需对照品；
（3）可以控制杂质的总量；
二、硒的检查
来源：
合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢
原理及方法：
氧瓶燃烧

  
 Se
Se

盐酸羟胺

  
 Se
 ,二氨基萘
     ,苯并苯硒二唑
pH .  .
环己烷
A nm
醋酸氟轻松检查硒
取本品50mg，照氧瓶燃烧法进行破坏后，将吸收液转移至
100ml容量瓶中，用水15ml冲洗燃烧瓶及铂丝，并入吸收液中，
用水加至刻度。取硒对照液（0.05ug/ml）和上述供试品溶液分

别用氨试液调节pH值至2.0 0.2后，转移至分液漏斗中，用水
少量分次洗涤烧杯，洗液并入分液漏斗中，使成60ml，各加盐
酸羟胺溶液（1→2）1ml，摇匀后，立即精密加二氨基萘试液
5ml，摇匀，在室温下放置100分钟，精密加环己烷5ml，强烈
振摇2′，静置分层，取环己烷脱水后，测A378nm。
规定 A供＜A对。
三、有机溶剂残留量的检查
（甲醇和丙酮）
GC法
甲醇
≤0.3%
丙酮
≤5.0%
内标法定量
四、游离磷酸盐的检查
原理及方法：
供试液对 钼酸铵
照液
H+
磷钼酸铵
A样
A对
还原
磷钼酸蓝
（钼蓝）
740nm
地塞米松磷酸钠
检查
游离磷酸
精密称取本品20mg，置25ml量瓶中，加水15ml溶
解，精密加钼酸铵硫酸试液2.5ml与1-氨基-2-萘酚-4磺酸溶液1ml，加水至刻度，摇匀，在20℃放置30～50
分钟，照分光光度法，在740nm处测定吸收度，与对
照液4.0ml同法处理的吸收度比较，不得更大。
第四节 含量测定
一、HPLC法
甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体
杂质， 对利用结构特征设计的比色法有干扰。
各国药典多采用RP－HPLC（大多内标法）
特点 用样量少，灵敏度高，分离效果好,
测定速度快.
二、UV法
△４-3-酮 240nm
肾上腺皮质激素
雄性激素和蛋白同化激素
孕激素
苯环
280nm（±）
雌激素
三、比色法
(一)四氮唑比色法
1. 原理
肾上腺皮质激素类
C17 -α－醇酮基
强还原性
四氮唑盐
C  a  醇酮基
    
OH -
[还原]
有色甲臜
N
N
C
氯化三苯四氮唑
（TTC）
红四氮唑（RT）
N
+
NCl
 2e
OH
三苯甲臜↓深红
 max  480 ~ 490nm

N
N
H
C
N
N
蓝四氮唑
（BT）
N
N
C
C
N
N
+
N-
+
N-
Cl
Cl
OCH 3
OCH 3
OH  4e

N
N
N
N
C
N
N
N
H
N
OCH 3
OCH 3
双甲臜（暗蓝）
 max  525nm
C
N
N
H
2. 方法 对照品法
供试液
对照液

    
TTC
氢氧化四甲基铵
暗
A 

25℃
40～45′
3. 讨论
（1） 基团对反应速度的影响
C11= O＞ C11－OH
C21－OH＞ C21-酯
21位酯化后反应速度减慢，酯化基团越大反
应速度越慢
（2） 溶剂、水分的影响
含水量＞5%→ν↓
含水10%→A↓10%
含水30%→几无反应
醛 → A↑
—
— 无水乙醇
无醛无水乙醇
（3）碱的种类及加入顺序
反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行
以氢氧化四甲基铵的结果最佳
加入顺序：
皮质激素溶液 四氮唑盐 碱试液
（4） O2与光线的影响
怕光
反应过程
反应产物
O2影响颜
色强度和
稳定性
→避光、快速
→隔绝空气、
快速、充N2
（5） 温度与时间
t℃↑→ν↑→甲臜分解↑→%↓
ChP
25℃
40～45′
BP
30℃
1h
(二)异烟肼比色法
C3－酮基
肾上腺皮质激素、
雄性激素和蛋白同
化激素、孕激素
1. 原理
异烟肼
C  酮基 
 异烟腙（黄）
HCl
（缩合）
OH
CONHN
N
异烟腙（黄色）
2. 方法： 对照品法
供试液 挥去乙醇
异烟肼
    

对照液 CHCl 
 ℃
A供
C供
＝
A对
C对
A 
 
暗45′
A供
C供＝
×C对
A对
3.讨论
（1）溶剂的选择
异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇
无水甲醇
无水乙醇
(2)
酸、异烟肼的量
盐酸 : 异烟肼 = 2 : 1
（3）水分、温度、O2与光线的影响
含水量↑→腙水解↑→A↓→%↓
不挥发溶剂、不吸收水分时→
O2与光线无影响
温度
t℃ ↑ → ν↑
（4） 反应速度
C3= O ＞ C17= O 、 C20= O
C11= O 不反应
反应专属性 C3－酮基
（三、）Kober反应比色法： 雌激素
1. 原理
H  SO 乙醇
H O
雌激素  




黄色




桃红
△
△
λmax=465
λmax=515
雌二醇-3-甲醚
CH3O
OH
H SO
 
CH3O
CH3
λmax=465
CH3
H O H  SO 
CH3O
λmax=515
四、非水溶液滴定法
五、生物样品中甾体激素的分析