Transcript 7. 141123 Kováč RI Racionálna indi... 321KB Dec 24 2014 01:37:50

Racionálna indikácia laboratórnych
vyšetrení u infekčných chorôb
Vypracovali
prof. MUDr. RNDr. Gustáv Kováč CSc MBA,
MUDr. Anna Porubenová MPH
MUDr. Vladimír Rolný CSc
Pre
Labmed 2014
Dátum
26. 11. 2014
Klinická mikrobiológia
L. Thomas: Labor und Diagnose, Dade Behring,
1998:
Bakterielle Infektionen, Viruskrankheiten,
Virushepatitiden, Parasitosen,
Endomykosen 1199-1329
Bakteriálne infekcie
• Borelióza
Borelióza
• Brucelózy
• Campylobakterové infekcie
• Chlamýdiové infekcie
• Kvapavka
• Legionelózy
• Leptospirózy
• Listeriózy
• Salmonelózy
• Shigellózy
Borelióza
Epidemiológia a klinika
Epidemiológia
•
prenos kliešťom
•
Klinická manifestácia
•
lokalizovaná včasná infekcia :
•
diseminovaná včasná infekcia :
•
neskorá perzistujúca infekcia
Laboratórna diagnostika
Serológia nie je indikovaná v rámci včasnej lokalizovanej
infekcie
•
Skríning
•
ELISA
•
IFT
•
IgM / IgG
•
Likvor/sérum index
•
= sérové IgG x titer / likvorové IgG x titer , dôkaz
intrathekálnej tvorby protilátok
Kultivácia
•
materiál: kožná biopsia nie je štandardná,
Molekulárna biológia
•
Konfirmácia
•
imunoblot
• Stafylokokové infekcie
• Streptokokové infekcie
• Syfilis
• Tularémia
• Yersiniózy
Vírusové infekcie
• Úvod
Adenovísusy
Adeno, Aréna
• Arénavírusy Arbo
Astro
• Arbovísrusy
Vírusy
• Astrovírusy
• Calicivírusy
• Coxackievírusy
• Cytomegalovírusy
Adenovísusy
Epidemiológia a klinika
•
respiračný trakt
•
GIT trakt
•
okulárna oblasť
Laboratórna diagnostika
Dôkaz vírusu
•
EIA
Sérodiagnostika
•
HHT
•
NT
Arénavírusy Epidemiológia a klinika
•
antropozoonóza
•
Lymfocytárna choriomeningitída
Laboratórna diagnostika
•
test protilátok
Arbovísrusy
•
Arbo = ARthropode BOrne
•
Prenos z hmyzu na človeka
Astrovírusy
•
gastroenteritídy
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Dengue vírus
Echovírusy
Enterovírusy
Epstein Barr virus
Flavivírusy
Tick born encephalitis vírusy ( Vírusy
jarnej encefalitídy ) ( FSME vírus )
Herpes simplex vírus 1
Herpes simplex vírus 2
Herpesvírusy
HIV 1, HIV 2
Morbili
Influenza
Slintačka
Mums
Morbili
Vírus slintačky a krívačky
Melkerknoten virus: ( „dojičské uzly“
)
Morbili
Epidemiológia a klinika
•
Koplikove škvrny na sliznici
•
typický exantém na koži
Laboratórna diagnostika
Protilátky
•
väzba komplementu
•
HHT
•
IgG / IgM ELISA
Izolácia
•
stery
•
bunkové kultúry
Vírus slintačky a krívačky
Epidemiológia a klinika
•
slintačka a krívačka zvierat ( človek zriedkavo )
Laboratórna diagnostika
•
izolácia vírusu z vesikúl
•
bunkové kultúry
Mumps
Epidemiológia a klinika
•
parotitis
•
orchitis / ovaritis
•
meningitis
Laboratórna diagnostika
Diagnostika protilátok
•
väzba komplementu
•
ELISA
•
HHT
•
NT
Dôkaz vírusu
•
bunková kultúra
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
•
Vírus molluscum contagiosum
Mumps
Newcastle disease vírus
Papilloma vírusy
Vírus parainfluenzy
Paramyxovírusy
Parvovírusy
Parvovírus B19
Picornavírusy
Poliovírusy
Respiračný synciciálny vírus
Retro vírusy
Rubeilla
Rhino vírusy
Lyssa
Rubeolla vírus
Rubeolla vírus
Epidemiológia a klinika
•
chrípkový syndróm + nuchálny lymfatický syndróm + typický
exantém
•
u tehotných infekcia spôsobuje poruchy vývoja plodu ( 1 mesiac
80%, 2 mesiac 40%, 3 mesiac 10% pravdepodobnosť )
Laboratórna diagnostika
Protilátky
•
HHT
•
IgM ELISA
Dôkaz vírusu
Izolácia z bunkovej kultúry
•
dôkaz ( imunohistologicky )
Molekulárna biológia
•
reverzná PCR
Vírus besnoty ( lyssa )
Epidemiológia a klinika
Zdroje
•
najčastejšie líšky, zriedkavejšie psy alebo mačky
Patofyziológia
•
po pokúsaní človeka sa vírus z miesta pokúsania neurogénne
dostáva do CNS, kde vyovolá smrteľnú encefalitídu
Priebeh
•
inkubácia: 1-3 siace
•
I štádium: bolesť a trhanie v rane
•
II štádium: excitačné štádium: zúrivosť ( manifestná besnota )
•
III štádium: paralýza ( latentná / tichá besnota )
•
aktívna aj pasívna imunizácia do 1 týždňa od pokúsania býva
spravidla úspešná
Laboratórna diagnostika
•
histopatológia bioptického preparátu: priama
imunofluorescencia
•
konjuktiválne preparáty
•
PCR
• Rotavírusy
• Vírus besnoty ( lyssa )
• Varicella Herpes Zoster vírus
Vírusové hepatitídy
• Hepatitis A
Hepaatitis A, B
• Hepatitis B
• Hepatitis C
• Hepatitis D
• Hepatitis E
Parazitózy
• Úvod
• Leishmanióza ( Kala Azar )
• Amébiáza
• Malária
Sekvenácia HBV genómu
dôkaz HBV mutanatov
dôkaz alebo vylúčenie infekčných zdrojov
stanovenie genotypu a serotypu HBV
Problematické stavy
skríning stavu pred a po očkovaní
diagnostika a monitorovanie akútnej hepatitis B
priebeh chronickej hepatitis B
posúdenie infekciozity nosičov
vyšetrenie pri terapii interferónom
sérologická diagnostika po transplantácii pečene
neovyklé konštelácie HBV markerov
Hepatitis A
Parametre a ich indikácie
Protilátky ( Anti HAV )
•
testovanie imunity voči hepatitis A po infekcii alebo očkovaní
•
vylúčenie akútnej hepatitis A
IgM protilátky ( Anti HAV IgM )
•
diagnostika hepatitis A
Hepatitis B
Parametre a ich indikácie
Hepatitis B povrchový antigén ( HBsAg )
•
diagnostika akútnej alebo chronickej hepatitis B
•
vyšetrenie transfúznych produktov pri podozrení na hepatitis B
•
prognostický indikátor hepatitis B
•
klasifikácia chronickej hepatitis
Protilátky proti HBsAg Anti HBsAg )
•
testovanie imunitiy voči hepatitis B
•
vyšetrenie premorenia ohrozenej populácie
Hepatitis B core antigén ( HBcAg )
•
klasifikácia chronickej hepatitídy
Protilátky proti HBcAg ( Anti HBcAg )
•
diagnostika akútnej alebo chronickej hepatitis B
•
vyšetrenie premorenia ohrozenej populácie
•
potvrdenie HBsAg sa Anti HBs pozitívnych nálezov
Anti HBcAg IgM
•
diagnostika hepatitis B
•
monitorovanie priebehu chronickej hepatitis B
Hepatitis Be Antigén ( HBeAg )
•
testovanie infekciozity séra
•
monitorovanie priebehu aktútnej alebo chronickej hepatitis B
•
monitorovanie úspechu anntivirotickej terapie
Protilátky proti HBeAg ( Anti Hbe )
•
testovanie infekciozity séra
•
monitorovanie priebehu chronickej hepatitis B
HBV DNK dôkaz hybridizácia
•
monitorovanie priebehu chronickej hepatitis B
•
monitorovanie priebehu aktútnej alebo chronickej hepatitis B
HBV DNK dôkaz amplifikácia
•
vysokocitlivý dôkaz HBV-DNK napríklad pri diagnostike serologicky
atypickej akútnej alebo chronickej hepatitis B
•
dôkaz HBV kontaminácie transfúzneho produktu
Leishmanióza,
amébiáza,
malária
• Toxoplazmóza
• Kryptosporidióza
• Pneumocystóza
• Mikrosporidióza
• Schistozomiáza ( Bilharzióza )
• Echinokokóza
• Toxokariáza
• Trichinóza
Endomykózy
• Kandidóza
• Aspergilóza
• Kryptokokóza
• Kokcidióza
Leishmanióza ( Kala Azar )
Epidemiológia a klinika
•
juh a východ Európy
•
Čína a centrálna Afrika
•
komáre / Leishmania Donovani
•
teplota, hepatospelnomegália, leukopénia, ikterus
Laboratórna diagnostika
•
EIA
•
PHA
•
Mikroskopický dôkaz
Amébiáza
Epidemiológia a klinika
•
Amébová dyzentéria
•
akútne, subakútne, chronické hlenovo krvavé hnačky
Laboratórna diagnostika
•
IFT 1:80
•
PHA 1:32
•
Mikroskopický dôkaz – vyš stolice
Malária
Epidemiológia a klinika
•
v Európe sa nevyskytuje
•
anofeles / plasmodium
•
endemické oblasti v ázii, Amerike, Afrike
•
inkubácia 8-30 dní
•
záchvat: slabosť, nechutenstvo, zvracanie triaška
•
frekvencia podľa typu: tropica, tertiana, quartana
Laboratórna diagnostika
•
farbenie plazmódií Giemsom v kvapke krvi
•
IFT 1:80
•
Mikroskopický dôkaz
•
Rapid test
Racionálna indikácia laboratórnych parametrov u
infekčných chorôb
P. Kumar, M. Clark: Clinical Medicine, Saunders
1998, 1-125
M.J.G.Farthing, D. J. Jeffries, J. Anderson:
Infectious diseaases, tropical medicine and sexually
transmitted diseases
Všeobecná časť
Epidemiológia
Princípy
• Epidemiológia
• Princípy a základné mechanizmy
• Laboratórna diagnostika
Špeciálna časť
Bakteriálne infekcie
• Gram pozitívne koky
• Gram negatívne koky
• Gram pozitívne paličky
• Gram negatívne paličky
• Aktinomycety
Všeobecná časť
Epidemiológia
Zdroje
•
Zdroje infekcie predstavujú
•
ľudia
•
zvieratá
•
prostredie.
Prenos
•
Prenos infekčných mikroorganizmov je možný
•
vzduchom
•
priamym kontaktom
•
potravou a vodou
•
predmetmi ( nepriamym kontaktom )
•
tkanivami a telesnými tekutinami.
Princípy a základné mechanizmy
Patogenéza infekcie
•
Vývoj, prebieh a dôsledky infekcie:
•
vstup mikroorganizmu
•
prienik cez epitelové vrstvy
•
pomnoženie ( multiplikácia )
•
kolonizácia
•
tkanivová invázia: extracelulárna - intracelulárna - hemato alebo lymfogénna - alebo luminálna / atriálna
•
poškodenie bunky / tkaniva
•
dysfunkcia / deštrukcia štruktúr.
Metabolické účinky u niektorých infekcií
Horúčka
•
vzostup teploty o 10C zvýši bazálny metabolizmus o 15%
Proteíny
•
Posun metabolizmu k
•
syntéze proteínov akútnej fázy a imunoglobulínov
•
odbúravaniu somatických proteínov
Metabolizmus minerálov a acidobázy
•
retencia sodíka a vody
•
respiračná alkalóza.
Interakcia: výživa/infekcia
•
Podvýživa mení imunitnú odpoveď:
•
funkciu makrofágov
•
funkciu T lymfocytov
•
počet leukocytov
•
bunkovú imunitu
•
tvorbu protilátok
•
hladinu komplementu.
Obrana hostiteľa a vnímavosť
•
je determinovaná imunitou.
• Mykobaktérie
Mykobaktérie
Mykoplazmy
• Mykoplazmy
• Spirochéty
• Rickettsie a podobné organizmy
• Chlamýdie
Vírusové infekcie
• Úvod
• DNK vírusy
• RNK vírusy
Mykózy
• Systémové infekcie
• Subkutánne infekcie
• Superficiálne infekcie
Parazitózy
• Protozoárne ( prvokové ) infekcie v
krvi a tkanivách
• Protozoárne ( prvokové ) infekcie v
črevách a genitáliách
• Nematodózy
Mykobaktérie
Tuberkulóza
Mycobacterium tuberculosis
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
farbenie: Ziehl Nielsen ( acid and alcohol fast bacilli )
•
T-SPOT.TB test
•
kultivácia: Doverovo alebo Loewenstein Jensenovo médium (
4-8 mesiacov )
•
kultúry na stanovenie senzitivity voči antibiotikám ( 3-4
týždne )
•
biopsia: pleura, lymfatické uzliny, solídne ložiská v pľúcach
Lepra
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
vyžaduje špeciálne diagnostické postupy
Mykobakteriálny vred
Mycobacterium ulcerans
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
stery z nekrotického tkaniva
•
mikroskopia odhalí početné „acid fast bacilli“
Mykoplazmy
Mykoplazmy
•
sú malé mikroorganizmy, ktorým chýba pevná bunková stena
a nie je možné ich zafarbiť
Mycoplasma: pneumoniae, hominis, urealyticum
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
Sérologické vyšetrenie
•
IgM protilátky
•
IgG protilátky
•
PCR
•
KO
•
nenastáva vzostup leukocytov
•
Potvrdenie diagnózy
•
vzostup titra protilátok
• Trematodózy
• Cestodózy
Niektoré sexuálne prenášané choroby
• HIV a AIDS
Vírusové
hepatitídy
Vírusové hepatitídy
• HAV – virus hepatitidy A
• HBV – vírus hepatitídy B
• HCV – vírus hepatitídy C
• HEV – vírus hepatitídy E
Vírusové hepatitídy
HAV – virus hepatitidy A
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
anti HAV IgM, prítomné v akútnom štádiu
•
anti HAV IgG – vyskytuje sa po prekonaní infekcie,
pretrvávajú doživotne, niekedy sa vyšetrujú aj po
vakacainácii protii hepatitíde A
HBV – vírus hepatitídy B
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
HBsAg
•
Anti HbcAG – stanovuje sa na potvrdenie akútnej
infekcie
•
anti HbsAg – po prekonaní infkeice albo po vakcinácii
•
doplňujúce vyšetrenia: HbeAg, anti Hbe, PCR DNA,
vírusová nálož
HCV – vírus hepatitídy C
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
anti HCV – potvrdzuje infekciu HCV bez možnosti určenia
či ide o ochorenie akútne alebo chronické
•
PCR
•
vírusová nálož
•
stanovenie genotypu je potrebné pre ďalší postup
HEV – vírus hepatitídy E
RACIONÁLNA INDIKÁCIA
•
anti HEV IgM
•
anti HEV IgG – pretrvávajú po infekcii aj via
Úvod do mikrobiológie
M. L. Turgeon, Clinical Laboratory Medicine,
Elsevier, 2012Introduction to Microbiology: 458 – 520
Mikroorganizmy: úvod
• Normálna flóra ( biota )
• Patogénne mikroorganizmy
Biota,
• Prokaryonty a eukaryonty: rozdiely
taxonómia
Klasifikácia mikroorganizmov: taxonómia
• Taxonómia
• Klasifikácia a nomeklatúra
• Klasifikácia podľa morfologických a
biochemických vlastností
Ochrana laboratórneho personálu,
dekontaminácia, dezinfekcia a sterilizácia
• Klasifikácia biologických látok založená na
riziku
• Všeobecné postupy na dodržiavanie
bezpečnosti v mikrobiologickom
laboratóriu
Normálna flóra ( biota )
Bežne osídlené oblasti ĺudského tela
•
črevo
•
nos
•
ústna dutina
Sterilné oblasti ľudského tela
•
krv
•
likvor
•
močový mechúr
Klasifikácia a nomeklatúra
Taxonomická hierarchia
Kategórie biologickej klasifikácie
•
Kingdom Animalia
Ríša
•
Phylum
Chordata
Čeľaď
•
Class
Mammalia Trieda
•
Order
Primates
Rad
•
Family
Hominidae Rodina
•
Genus
Homo
Rod
•
Species
Sapiens
Druh
Živočíchy
Stavovce
Cicavce
Primáti
človek
rozumný
Vzorky na mikrobiologické vyšetrenie
• Požiadavky na odber vzorky na
kultiváciu
• Typy mikrobiologických vzoriek
Základné vybavenie a techniky
využívané v mikrobiológii
• Inokulačná ihla a slučka
Pevné a
• Incinerátory
tekuté
médiá
• Pevné a tekuté médiá
• Kultivačné techniky
• Inkubátory
• Identifikácia baktérií
• Príprava sterov a farbenie v
mikrobiológii
• Kultivácia baktérií
• Biochemické alebo enzymatické testy
Pevné a tekuté médiá
Pevné média
Petriho miska
•
agar sa roztaví na 100oC, naleje na Petriho misku a
nechá sa stuhnúť v prevrátenej polohe ( prevencia
kondenzácie )
Agarová platňa
•
sa podobá Petriho miske, len má väčší priemer
•
„Naklonené“ ( slant ) kultúry
•
sa získavajú uložením agaru do skúmavky, jej
autoklávovaním a v nadväznosti stuhnutím v určitom
uhle naklonenia: používajú sa na skladovanie, transport
alebo biochemickú klasifikáciu
Tekuté médiá
•
pripravujú sa naliatím bujónu ( vývaru ) do skúmavky.
•
pozitivita tekutých médií sa prejavuje ich zakalením
•
Používajú sa
•
na rany a anaeróbne kultúry
•
na získanie a izoláciu mikroorganizmov zo vzoriek s
nedostatočný počtom mikroorganizmov ( po pomnožení
sa prenesú na pevné médium a pokračuje sa v klasickej
kultivácii )
Krvná kultúra
•
je ďalším príkladom tekutého média ( krv sa naleje do
média, inkubuje sa a ak je pozitívna, farbí sa Gramom a
kultivuje klasicky na pevnom médiu )
Močové kultúry
• Odber vzorky
• Metódy detekcie infekcií močového
traktu
Faryngeálne kultúry
• Odber vzorky
• Metódy detekcie skupiny A beta
hemolytického streptokoka
Genitourinárne kultúry
• Odber vzorky
• Metódy detekcie bežných infekcií
genitorurinárneho traktu
Krvné
kultúry
Krvné kultúry
• Organizmy bežne izolované z krvi
Antimikrobiliálne testy citlivosti
• Citlivosť a rezistencia
• Minimálne inhibičné a minimálne
baktericídne koncentrácie
• Metódy stanovenie citlivosti
Krvné kultúry
•
Krv je za normálnych okolností sterilná
•
Bakteriémia ( výskyt baktérií v krvi ) môže mať vážne následky
pre pacienta
•
Fungémia je výskyt húb v krvi
•
Septikémia je stav, kedy baktérie v krvi poškodzujú pacienta
priamo alebo toxínami
•
Exotoxíny sú uvoľňované z baktérií do okolia, endotoxíny
tvoria časť bakteriálnej steny: hlavne endotoxíny sa podieĺajú
ná vývoji septického šoku (horúčka, hypotenzia,respiračný
distress syndróm a diseminovaná intravaskulárna koagulácia )
Organizmy bežne izolované z krvi
•
Identifikované príčiny bakteriémie:
•
genitourinárne infekcie 25%, respirqčné 20%, abscesy 10%,
infikované rany 5%, žlčové cesty 5%, nezistené 25%
•
Najčastejšie izolované mikroorganizmy
Staphylococcus aureus, streptococcus penumoniae, Escherichia coli,,
Klebsiella
•
Výskyt bakteriémií alebo septikémií narastá z týchto príčin:
•
znížená imunita ( starší pacienti, HIV )
•
invazívne diagnostcké postupy ( katetrizácie )
•
širokospektré antibiotiká ( rezistencie )
•
prežívajúci pacienti vďaka intenzívnej liečbe
Odber vzoriek
Očistenie miesta odberu
•
70% alkohol, povidón iódový roztok, 1 minúta na uschnutie,
rukavice, cetripetálny spôsob stierania kože
Kultivačné médiá pre krv
•
antikoagulans ( polyanethol sulfát 0,05% )
•
tryptikónový sójový bujón, agar, pptón, thioglykolát
•
pomer krv: médium = 1:5
Kontrola kvality
• Vybavenie
• Médiá
• Reagencia a antiséra
• Antimikrobiálne testy
• Vzorky, odber, odmietnutie
Fungi / mykológia
• Charakteristika
• Zdroje infekcie
• Odber vzorky
• Metódy detekcie
Parazitológia
Prazitológia,
• Parazity
najčastejšie
parazity
• Vzorka
• Metódy detekcie
• Najčastejšie sa vyskytjúce parazity
Parazitológia
•
Parazitózy sú ochorenia typické pre krajiny s tropickým
podnebím, ale s rozvojom turizmu a problematikou
utečencov sa vyskytujú častejšie aj u nás
•
Parazit potrebuje na svoju existenciu hostiteľa, ktorého
využíva, prípadne mu škodí
•
Komensál je parazit, ktorý koexistuje s hostiteľom na základe
vzájomného prospechu
Parazity
Parazity delíme na
•
protozoá
•
nematódy
•
platyhelminty ( tieto ďalej na na trematódy a cestóry ).
Vývojové štádiá parazitov:
•
vajíčko
•
larva ( nezrelá forma )
•
cysty alebo trofozoity ( aktívna reprodukčná forma )
•
vlastný parazit
V rámci laboratórnej diagnostiky parazitóz je dôležitý
•
správny odber
•
Fixácia
Najčastejšie sa vyskytjúce parazity
Trichomonas vaginalis
•
spôsobuje uretritídu, vaginitídu
•
ide o pohlavne prenosné ochorenie
Mikroskopicky
•
hľadáme pohyblivý trofozoit alebo parazita
Kultivácia
•
existujú špeciálne systémy / súpravy (InPouch TV Syst )
Serológia
•
existuje prúžková metóda Rapid ( Genyzyme )
•
kde dokaazujeme prítomosť antigénov