Transcript 人体显微形态学技术2

玻璃器皿清洗
与试剂配制
一、玻璃器皿清洗
（一）目的及意义
新购置的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质和
灰尘，而使用过的玻璃仪器其内壁上往往粘附许多污染
物（包括有机物及金属离子等）。而实验中所使用的玻
璃仪器清洁与否，直接影响实验结果，往往由于器皿的
不清洁或被污染而导致较大的实验误差，甚至会出现相
反的实验结果。因此，实验用器皿洗涤清洁工作是十分
重要的基本操作，是做好实验的前提及实验成败的关键
之一。
（二）玻璃器皿清洗程序
1、先在肥皂水（或去垢剂）中浸泡后用毛刷仔细洗刷，再
用自来水冲洗干净。
2、置于重铬酸钾-浓硫酸洗液中浸泡，浸泡时间视实验对玻
璃仪器要求的清洁程度而定。
3、从洗液中取出后反复用自来水冲洗干净。
4、再用蒸馏水清洗2-3次，作细胞培养用的玻璃仪器还要用
双蒸水清洗2-3次。
5、用烘箱烘干或自然晾干备用。
二、试剂配制
（一）目的及意义
化学试剂的配制是科学实验的基本操作，实验
结果的好坏，往往与化学试剂的配制有关，而不同
的化学试剂又有不同的配制方法和程序，因此，试
剂配制方法和程序，是实验成败的重要因素。
各种化学试剂一般都需要在实验前配制好待用，
不能在实验过程中现配，所以化学试剂的配制
也是实验前的一项准备工作。
（二）化学试剂配制的注意事项
1、称量准确
2、蒸馏水配制（特殊要求除外）
3、药品规格应与试剂要求的质量一致
4、用量不宜过多
5、容器要清洁干净
6、试剂瓶应贴标签（名称、浓度、时间）
7、试剂用后要塞好瓶塞放回原处
（三）固定液的配制
1、中性甲醛的固定液配制
磷酸二氢钠4g ，磷酸氢二钠13g ，溶于
880ml蒸馏水中，加 40%甲醛120ml。
2、Zenker固定液
重铬酸钾5g ，升汞（氯化汞）7.5g，溶于
200ml蒸馏水中，加 冰乙酸7.5ml（用时加）
3、ADF固定液
无水乙醇80ml 蒸馏水16ml 浓硝酸4ml
先将无水乙醇装入玻璃瓶中，然后依次
加入蒸馏水和浓硝酸
4、2%硝酸银水溶液
硝酸银4g ， 溶于196ml蒸馏水中
5、高尔基体固定液
硝酸钴(或氯化镉）2g，溶于 100ml蒸馏水
中 ，加 40%甲醛60ml。
6、硝酸银还原液
对苯二酚4 g，无水硫酸钠0.30g，溶于200ml
蒸馏水 中，加40%甲醛20ml
7、Regaud固定液
重铬酸钾12g，溶于388ml蒸馏水中，加
40%甲醛100ml
（四）染色剂的配制
1、Wright染液
Wright粉剂1g
甲醇500ml
将粉剂置于研钵内，充分研磨，越细越
好，然后将甲醇逐步加入研钵内，边加边
研直至粉剂全部溶解，置于棕色玻璃瓶中
避光保存，一周后方可使用。
2、Harris苏木精
Ⅰ液：苏木精2 g 无水乙醇20ml
Ⅱ液：硫酸铝钾（铵）40 g 蒸馏水400ml
先将Ⅰ液中的苏木精充分溶解，再将Ⅱ液
煮沸熔化，去火，速加Ⅰ液，再煮沸，去
火，速加1 g 氯化汞再煮沸，迅速冷却后加
16ml冰乙酸，过滤备用。
3、1%伊红染液
取伊红5g溶于50ml蒸馏水中，加冰乙酸
5ml混匀，加蒸馏水5ml混匀，再加加冰乙酸
5ml混匀，产生红色沉淀后再加蒸馏水50ml
混匀后过滤，将沉淀物连同滤纸一起放在60。
C恒温箱中烤干，待干燥后溶入500ml 95%
乙醇中。即1%伊红染液。
4、0.5%盐酸酒精（分色剂）
300ml 70%乙醇中加入1.5ml浓盐酸，即
0.5%盐酸酒精。
5、饱和碳酸锂水溶液（返蓝剂）
300ml蒸馏水中逐步加入碳酸锂并不停
搅拌，直至出现沉淀物为止。
6、 5%铁明矾水溶液
铁明矾10g，溶于190ml蒸馏水中
7、3%重铬酸钾水溶液
重铬酸钾12g，溶于388ml蒸馏水中
（五）常用试剂的配制
1、脱水剂：50%、70%、80%、90%、95%的
乙醇各500ml。以上浓度用95%的医用酒精
配制，100%酒精用瓶装无水乙醇。
2、透明剂：二甲苯
3、生理盐水：NaCl 9克，溶入1升蒸馏水中
4、磷酸缓冲液：配制PH7的磷酸缓冲液
2000ml（见后面方法与附表）
（二）重铬酸钾-浓硫酸洗液的配制
重铬酸钾-浓硫酸洗液是玻璃器皿的最常用的
清洁液。分强液、次强液和弱液三种，三者的区
别在于浓硫酸含量不同，一般采用的是次强液。
强液的配方：
重铬酸钾63g，浓硫酸1000ml，蒸馏水200ml
次强酸配方：
重铬酸钾120g，浓硫酸200ml，蒸馏水1000ml。
弱液配方：
重铬酸钾100g，浓硫酸100ml，蒸馏水1000ml



磷酸缓冲液（phosphate buffer）
按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸
二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）
贮液，即获得所需pH的磷酸缓冲液。
1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4•H2O）贮
液的配制：溶解138g于足量蒸馏水中，使终
体积为1L。
1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液的配制:
溶解142g于足量蒸馏水中使终体积为1L。
1mol/L 磷酸二氢钠（ml）




877
850
815
775
735
685
625
565
510
450
390
330
280
1mol/L 磷酸氢二钠（ml） 最终pH值
133
150
185
225
265
315
375
435
490
550
610
670
720
6.0
6.1
6.2
6.3
6.4
6.5
6.6
6.7
6.8
6.9
7.0
7.1
7.2