Transcript 人体显微形态学技术6

细胞器切片的制作
一、线粒体切片标本的制作
1、取材： 小白鼠小肠或肝
2、固定：入Regaud固定液固定天（每天需更
换一次固定液）
3、媒染：入3%重铬酸钾水溶液中媒染7天
（每两天更换一次新液）
4、冲洗：先用自来水冲洗24小时，然后用蒸
馏水浸洗数次。
5、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依
次脱水，100%以下的浓度每次1小时，在
100%酒精中2次，每次30分钟，转入二甲苯
2次透明，每次30分钟。
6、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡1
次，硬蜡1次，每次30分钟，用纸盒或金属
包埋盒包埋。（包埋时注意切面方向）
7、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘油，
切片厚度2-4微米，在贴片容器中贴片，入
37 。C恒温箱中烘烤24小时。
8、脱蜡入水：二甲苯2次，每次10min, 100%
酒精中2次,每次5min, 100%以下的浓度每次
2min，下行至蒸馏水。
9、媒染：入5%铁明矾水溶液中媒染24小时
（ 37 。C恒温箱中）。
10、染色：蒸馏水速洗后入苏木精染液中染
色24小时。
11、分色：蒸馏水速洗后入2.5%铁明矾水溶液
中分色，数秒后，显微镜下镜检，见细胞核
和线粒体呈黑色，细胞质呈无色或灰色即可。
此步骤非常关键，一定要不间断镜检。
12、返蓝：自来水浸泡数小时
13、脱水透明：与第8步骤（脱蜡入水）相反
方向操作即可。
14、镜检封固：镜下检查，染色合格的切片滴
1滴中性树胶，盖上盖玻片。放入凉片盒中。
二、高尔基体切片标本的制作
1、取材： 猫或兔的神经节
2、固定：入高尔基体固定液固定8-18小时
3、冲洗：用蒸馏水速洗2次。
4、镀银：入2%硝酸银水溶液中镀银48小时
（室温下、避光）
5、冲洗：用蒸馏水速洗2次
6、还原：入硝酸银还原液中24小时
7、冲洗：用蒸馏水速洗2次
8、脱水透明：在酒精中从低浓度到高浓度依
次脱水，100%以下的浓度每次40分钟，在
100%酒精中2次，每次20分钟，转入二甲苯
2次透明，每次20分钟。
9、浸蜡包埋：等量二甲苯与软蜡1次，软蜡1
次，硬蜡1次，每次20分钟，用纸盒或金属
包埋盒包埋。
10、切片贴片烤片：载玻片上涂少许蛋白甘
油，切片厚度3-6微米，在贴片容器中贴片，
入37 。C恒温箱中烘烤24小时
11、脱蜡入水：二甲苯2次，每次10min, 100%
酒精中2次,每次5min, 100%以下的浓度每次
2min，下行至蒸馏水。
12、调色：入1%氯化金水溶液中2小时
13、冲洗：用蒸馏水速洗2次
14、固定：入5%无水硫代硫酸钠水溶液中
3min
15、冲洗：用自来水冲洗5min
16、脱水透明：与第9步骤（脱蜡入水）相反
方向操作即可。
17、镜检封固：镜下检查，染色合格的切片
滴1滴中性树胶，盖上盖玻片。放入凉片盒
中。