Les techniques de cytogénétique moléculaire réalisées à partir de villosités choriales devraient être effectuées au niveau de l’axe mésenchymateux (et l’examen ‘direct’ ne devrait plus être utilisé)

Toutain J, Dupont-Moufakkir S, Hargous C, Roumy M, Vanicatte C, Vernet M, Vironneau HP, Soler G, Taine L, Horovitz J, Saura R.

Centre de Médecine Fœtale, CHU de Bordeaux, Bordeaux

Introduction

• DPN à la recherche d’anomalies chromosomiques – Invasif • Amniocentèse (15-16 SA) • Choriocentèse (12-13 SA) • (Sang fœtal) – (Non invasif) • Caryotype conventionnel après culture (7 jours à 3 semaines…) • Nécessité de techniques rapides

Biopsie de trophoblaste

• A partir de 12-13 SA • Voie trans-abdominale, extra amniotique • IMG par aspiration avant 14 SA • DPN de choix pour gérer: – Anomalies échographiques du 1er trimestre – FSM pathologiques au 1er trimestre

Cytotrophoblaste Axe mésenchymateux

Biopsie de trophoblaste

• Caryotype après culture – Obtenu rapidement (7-8 jours en moyenne) – TRES FIABLE • Examen ‘direct’ – Obtenu en moins de 24 heures – NON FIABLE • Mais techniques rapides nécessaires pour résultat en 24-48 heures

Examen ‘direct’ Culture

Diagnostic cytogénétique rapide

• Essentiellement les principales aneuploïdies • Impose résultat cytogénétique fiable • Techniques conventionnelles – Examen ‘direct’ des villosités choriales • Techniques moléculaires – iFISH – QF-PCR – MLPA – aCGH…

Appliquées à quelle fraction des villosités ?

Biopsie de trophoblaste

• Tissus extra-embryonnaires • Existence de discordances fœto-placentaires • Faux négatifs: – de l’examen ‘direct’ (fréquent) – de la culture (rarissime) • « Faux positifs »: anomalies chromosomiques limitées au placenta (présentes au niveau de la culture et/ou de l’examen ‘direct’) POURQUOI PRIVILÉGIER L’AXE MÉSENCHYMATEUX ?

Plus représentatif du patrimoine chromosomique fœtal

Pourquoi privilégier l’axe mésenchymateux ?

Pourquoi privilégier l’axe mésenchymateux ?

• La fiabilité d’un examen donné ne dépend pas seulement de la technique utilisée mais aussi du tissu étudié… • Pour un diagnostic fiable à partir de villosités choriales, différentes études montrent qu’il est souhaitable de privilégier l’axe mésenchymateux au cytotrophoblaste ou aux villosités entières

Comment s’assurer de travailler au niveau de l’axe mésenchymateux ?

Etude CHU de Bordeaux

• Patientes − 386 ♀ − Indications : clarté nucale ↑ • PVC − Entre 12-14 SA − Contrôle extemporané (quantité)

Méthodes

• Cytogénétique moléculaire −iFISH après Trypsine-EDTA et

collagénase

−Kit commercial principales aneuploïdies (13, 18, 21 et gonosomes) • Cytogénétique conventionnelle − Culture − ‘Direct’: RETROSPECTIF (anomalie culture et/ou iFISH)

Indications DPN Clarté nucale augmentée Omphalocèle Anasarque

Résultats

N 376 7 3 % 96,9 1,80 0,77 Age gestationnel (SA) Poids moyen des villosités (mg) Temps de culture (jours) 13 Q 1 :13; Q 3 :14 25,9 ± 4,62 7 Q 1 :6; Q 3 :8

Anomalies chromosomiques iFISH et « culture » Anomalies chromosomiques N % iFISH Culture Trisomie 21 Trisomie 18 45,X Trisomie 13 mos46,XY,del(5)(p13)[7]/46,XY,add(5)(p14)[4]/46, XY[9] 47,XX,i(9)(p10) 46,XX,add(4)(p15) Total 51 16 15 3 1 1 1

88

58,0 18,2 17,0 3,41 1,14 1,14 1,14 100 FISH, fluorescence in situ hybridization ; D, détecté ; ND, non détectable • 88 (22,8%) anomalies cytogénétiques • Absence de discordance entre iFISH et culture • 3 (3,41%) anomalies non détectables par iFISH

D D D D

ND ND ND

D D D D

D D D

Faux négatifs de l’examen ‘direct’ Cas 1 2 Culture iFISH 46,XY,+21 mos46,XY,del(5)(p13)[7]/46,XY,add(5)(p14)[4]/46,XY[9] D ND ‘Direct’ 46,XY 46,XY 3 45,X FISH, fluorescence in situ hybridization ; D, détecté ; ND, non détectable D • 0,77% des DPN • 3,41% de faux négatifs

observés avec examen ‘direct’

46,Xi(Xq)

Jusqu’en 1995 au CHU de Bordeaux: examen ‘direct’ systématique: – Peu de matériel nécessaire (5-10 mg); obtention rapide caryotype MAIS: – Faux positifs (ACLP type I) – Faux négatifs

Risque a priori +++

≈ 3% faux négatifs indication signes d’appel écho.

• iFISH: −Après digestion enzymatique −Axe mésenchymateux −Absence de discordances entre iFISH et culture −IMG précoce par aspiration −Principales aneuploidies −3,41% anomalies non détectables −IMG tardives

• Autres techniques moléculaires : discordances publiées – Proposition de certains auteurs: digestion enzymatique • DPN 1 er trimestre signes appel écho:

Technique moléculaire « rapide » appliquée à axe mésenchymateux