Transcript MATERI ISOLASI DNA - Laboratorium Biologi FK Unissula

Petunjuk Materi Isolasi DNA
Laboratorium Biologi
Fakultas Kedokteran
Universitas Islam Sultan Agung
2014
Bahan baku pisang
1. Potong pisang 1-2 buah menjadi kecilkecil
2. Taruh pada blender serta campur
dengan air sekitar 100 ml
3. Tambahkan NaCl 1 ml dan Blender
sampai halus
4. Taruh hasil tersebut pada tabung
conicel sampai 5 cc
-
5. Beri Larutan Lisis Buffer sekitar 750 mikro
liter
6. Kocok dengan perlahan sekitar 1-3
menit
7. Diamkan sekitar 5-10 menit
8. Tambahkan 1 ml Proteinase K
9. Gojok perlahan-lahan sekitar 1-3 menit
10. Tambahkan etanol dingin 1/3
11. Amati hasil
12. Lakukan pembacaan pada
spektofotometri
Bahan Baku buccal
1. Lakukan seperti Massage pada buccal
2. Kumurr dengan menggunakan air selama
minimal 3 menit
3. Lalu tampung hasil air kumuran pada
tabung conicel besar
4. Tambah NaCl 1 mL. Tambah Buffer lisis (3cc)
Perbandingan 20 :3
5. Kocok secara perlahan selama 1-3 menit
6. Tunggu selama 5-10 menit
7. Tambah Proteinase 1 ml
8. Kocok secara perlahan selama 1-3
menit
9. Tambahkan etanol dingin 1/3 nya
10. Amati hasil
11. Lakukan pembacaan pada
spektofotometri
Panjang gelombang untuk membaca
DNA adalah 260 nanometer
Panjang gelombang untuk membaca
protein adalah 280 nanometer
260/280 rasio ketentuan 1,8 (N)
>1,8 kontaminan RNA
< 1,8 kontaminan protein
Bahan untuk isolasi DNA berasal dari :
- Tumbuhan
- Hewan contoh pada buccal
- Bakteri
Pada tumbuhan yang banyak mengandung
DNA:
- Bayam
- Kacang polong
- Pisang
- Brokoli
- Strawberry
Dinding sel (di pecah) membran (lisis) 
inti sel  DNA dan protein histon 
protein histon akan di pecah oleh enzim
proteinase K
DNA akan di presipitasi oleh etanol dingin
agar presible seperti benang
Untuk memecah dinding sel bisa di
lakukan
- Di blender
- Di tumbuk
- Di simpan dengan suhu minus 70
Perbedaan isolasi DNA pada hewan dan
tumbuhan adalah
- Pada tumbuhan terdapat dinding sel
jadi hari di pecah terlebih dahulu
- Sedangkan pada hewan tidak ada
dinding sel maka langsung di beri buffer
lisis