Transcript روشهای تشخیص مولکولی

‫موضوع‪:‬‬
‫استفاده از آنتی بادیهای مونوکلونال‬
‫به عنوان عوامل درمانی‬
‫هر استراتژی مؤثر برای آشکارسازی باید دارای ویژگیهای زیر باشد‪:‬‬
‫‪ ‬اختصاصی بودن‬
‫‪ ‬حساسیت‬
‫‪ ‬سادگی‬
‫آشکارسازی بر مبنای رشد ارگانیسم‬
‫تنها تعداد کمی ازارگانیسمها شناخته میشوند‪.‬‬
‫روش شناسایی‬
‫ایمنولوژیکی‬
‫روشهای‬
‫تشخیص‬
‫مولکولی‬
‫بر پایه ی‬
‫آشکارسازی‬
‫‪DNA‬‬
‫در روشهای تشخیص ایمنولوژیکی اثرات متقابل آنتی ژن_آنتی بادی برای ارزیابی‬
‫هورمونها ‪ -‬آنتی بیوتیکها ‪ -‬اینترفرونها ‪ -‬میکروب شناسی تشخیصی ‪ -‬تعیین گروه‬
‫خونی ‪ -‬سنجش داروها ‪ -‬نظارت بر انواع سرطان و‪ ...‬به کار می رود‪.‬‬
‫آنتی بادیهای مونوکلونال‬
‫مجموعه ی آنتی بادیهایی را که توسط چندین سلول ایمنی ساخته شده و‬
‫هر کدام علیه یکی از اپی توپهای یک آنتی ژن خاص عمل می کند‪،‬آنتی‬
‫بادیهای پلی کلونال گویند‪.‬‬
‫‪‬هر فرآورده از آنتی بادی پلی کلونال در زمانهای متفاوت از لحاظ محتویات‬
‫پادتن همانند نبوده و معموالٌ رفتار واکنشی یکسانی از خود نشان نمی دهند‪.‬‬
‫‪‬درجه ی واکنش بین آنتی ژن_آنتی بادی به غلظت آن دو بستگی دارد‪.‬‬
‫‪‬اپی توپهای مختلف‪،‬توانایی مختلف برای تحریک ساخت آنتی بادی دارند‪.‬‬
‫هدف اساسی‬
‫تولید یک رده ی سلولی که قابل رشد در محیط کشت باشد و یک نوع‬
‫منحصر به فرد از ‪ Ab‬را تولید کند که میل ترکیبی باالیی فقط به یک‬
‫آنتی ژن خاص داشته باشد‪.‬به این نوع آنتی بادی‪،‬آنتی بادی مونوکلونال‬
‫گویند‪.‬‬
‫سلول هیبرید‬
‫ساختار و عملکرد آنتی بادیها‬
‫در واقع تمام فعالیت اتصال به آنتی ژن در یک آنتی بادی‪،‬مربوط به قطعه‬
‫ی ‪ Fv‬آن می شود‪.‬‬
‫کاربرد آنتی بادی های مونوکلونال‬
‫پیشگیری از پس زدن اندامهای پیوندی‬
‫اساس‪:‬اتصال آنتی بادی به لنفوسیت‬
‫آنتی بادی مونوکلونال ‪OKT3‬موش به گیرنده ی سطح سلول به نام ‪CD3‬‬
‫که روی تمام سلولهای ‪T‬وجود دارد باند می شود و سیستم ایمنی را‬
‫سرکوب می کند‪.‬‬
‫آنتی بادیهای مونوکلونال دآرآی آتصال شیمیای ی‬
‫‪ ‬غلظت ناکافی دارو درون بدن باعث کاهش ظاهری در قدرت درون تنی دارو می‬
‫شود‪.‬‬
‫افزایش انتقال یک دارو به جایگاه هدف‪:‬‬
‫‪ )1‬دارو به آنتی بادی مونوکلونال متصل شده و آنتی بادی به پروتئین اختصاصی‬
‫روی سلول هدف متصل میشود‪.‬‬
‫‪ )2‬آنزیمی که قادر به تبدیل پیش داروی غیرفعال به داروی فعال است به یک آنتی‬
‫بادی متصل شده‪،‬در نتیجه داروی فعال فقط در مجاورت سلولهای هدف تشکیل‬
‫می شود‪.‬‬
‫مثال‬
‫‪ ‬فیبرین یک عامل لخته کننده ی خون است‪.‬‬
‫‪ ‬پالسمین که یک سرین پروتئاز است‪،‬فیبرین موجود در لخته خونی را‬
‫تجزیه کرده و موجب انحالل لخته می شود‪.‬‬
‫‪ ‬با اتصال یک آنتی بادی از طریق پیوندهای گوواالن به فعال کننده ی‬
‫پالسمینوژن‪،‬قادر خواهیم بود که فیبرین را هدف یابی کرده و با تبدیل‬
‫پالسمینوژن به پالسمین‪ ،‬موجب افزایش مقدار پالسمین تجمع یافته شویم‪.‬‬
‫کم بودن راندمان‬
‫اتصال شیمیایی‬
‫مشکالتی در‬
‫زمینه ی‬
‫اتصال شیمیایی‬
‫و کاربرد آنتی‬
‫بادی غیر‬
‫انسانی وجود‬
‫دارد‪:‬‬
‫حساسیت زایی‬
‫آنتی بادیهای‬
‫غیر انسانی‬
‫مشکالت تولید آنتی بادیهای آنسانی‬
‫سلول همجوش ((لنفوسیت انسانی – میلومای موش )) ناپایدار است‪.‬‬
‫میلومای انسانی جایگزین میلومای موش کشف نشده‬
‫دالیل اخالقی‬
‫‪ ‬به این آنتی بادی هیبرید‪،‬آنتی بادی کایمریک یا آنتی بادی نیمه انسانی‬
‫گویند‪.‬‬
‫‪ ‬برای کاهش حساسیت و نیز وارد کردن بخش تأثیرگذار ‪ Fc‬انسانی در‬
‫ساختار آنتی بادی ‪،‬محققان توالیهایی از ‪ DNA‬را که مناطق ‪، Fv‬آنتی‬
‫بادی انسانی را کد می کرد با توالی ‪، FvDNA‬آنتی بادی مونوکلونال‬
‫خاصی در موش جایگزین نمودند‪.‬‬
‫‪ ‬آزمایش آنتی بادی کایمر در بیماران سرطانی نشان می دهد که آنتی بادی‬
‫کایمر ‪ 6‬برابر طوالنی تر از آنتی بادی مونوکلونال طبیعی موش در خون‬
‫باقی می ماند و مدت تأثیرش بیشتر است‪.‬‬
‫‪ ‬امروزه نیمه انسانی کردن آنتی بادی موش و رت یک قدم به جلو‬
‫برداشته‪،‬به طوری که محققان فقط بخشهای ‪ CDR‬آنتی بادی مونوکلونال‬
‫جوندگان را در آنتی بادی های انسانی جایگزین می کنند‪.‬‬
‫سلولهای هیبریدوما در محیط کشت‪،‬نسبتا ٌ آهسته رشد می کنند و محیط‬
‫کشت پیچیده و پر هزینه ای احتیج دارند‪.‬‬
‫برای انتقال و عملکرد مؤثر برخی از عوامل ایمن درمانی‪،‬فقط به ‪Fv‬‬
‫نیاز داریم و بخش ‪ Fc‬قابل صرف نظر است‪.‬‬
‫تولید آنتی بادی در ‪E.Coli‬‬
‫‪(1‬‬
‫توالی های مربوط به زنجیرهای ‪L‬و ‪H‬را با روش ‪ PCR‬تکثیرمی کنیم‪.‬‬
‫‪(2‬‬
‫‪ FvDNA‬های مربوطه را در یک حامل ترکیبی(باکتریوفاژ) کلون می کنیم‪.‬‬
‫‪(3‬‬
‫به این ترتیب می توان میلیونها پالک باکتریوفاژ را در مدت زمان نسبتا ٌ کوتاهی‬
‫غربال کرد‪ 7-14(.‬روز)‬
‫‪ (4‬برای تولید مقادیر باالی ‪ Fv‬در داخل سلول‪ FvDNA،‬را به پالسمید منتقل کرده‬
‫و آن را به ‪ E.Coli‬ترانسفورم می کنیم‪.‬در نهایت مقادیر باالی ‪ Fv‬رامی توان‬
‫تولید و برداشت کرد‪.‬‬
‫منابع‪:‬‬
‫‪1)African Journal of Biotechnology Vol.7(8) ,pp.923‬‬‫‪925,117 April,2008.Monoclonal antibodies in clinical‬‬
‫‪diagnosis:A brief review application.Muhammad‬‬
‫‪saleem and mustafa Kamal‬‬
‫‪)2‬بیوتکنولوژی مولکولی آصول و کاربرد ‪ DNA‬نوترکیب‪ /‬نوشته برنارد گلیک و جک‬
‫پاسترنک‪،‬ترجمه جوآد بهروآن‬
‫‪)3‬بیوتکنولوژی و ‪DNA‬نوترکیب‪/‬نوشته هلن کروز و آدرین ماسی‪،‬ترجمه محمدرضا شکیبای ی‬
‫‪)4‬بیوتکنولوژی مولکولی‪/‬نوشته دک تر سیدنی پرآیمرز ‪،‬ترجمه دک تر مجتبی طباطبای ی و دک تر محمد‬
‫رضا نوری دلوی ی‬
‫گردآورنده‪:‬عفت مرآدی‬
‫شماره دآنشجوی ی‪860101984:‬‬
‫مربوط به درس بیوتکنولوژی‬
‫با تشکر آز جناب آقای مهندس کیوآن بهشتی مال‬
‫مهر ‪1389‬‬