Transcript Métodos en endocrinología I

METODOS EN
ENDOCRINOLOGIA
Métodos para la detección hormonal
• Muestra Biológica
• Ensayo químicos
• Estructura
• Bioensayos
• Función
• Mecanismo
• Estructura
• Inmunoensayos
• Estructura
• Histología
• Síntesis
• Órgano blanco
• Análisis de receptores
• Órgano blanco
• Mecanismos
Métodos para la detección hormonal
• Determinación químicos
• Estructura química, secuencia
• Medición de composición
• Cromatografía.Separa ácidos nucleicos, proteínas, azúcares. Se puede
correlacionar la presencia de un compuesto en un fluido con la
actividad del tejido u órgano.
• Existen varias matrices que separan los componentes según carga,
tamaño, insolubilidad en agua o afinidad de unión con la matriz
(beads unidos a anticuerpos o receptores). Este tipo de
cromatografía es muy útil para purificar proteínas u otras
moléculas que estan presentes en muy baja concentración.
• HPLC High Performance Liquid Chromatografy. Pueden visualizarse
proteínas, lípidos, ADN, RNA u otros compuestos como residuos de
antibióticos en los tejidos
• Electroforesis. Ampliamente usada en separ proteínas o ácidos
nucleicos
• Medición de concentración
• Preparación de curvas estandares que permiten comparar
concentraciones conocidas con las de una muestra desconocida
HPLC
•Determinación Biológica
•Bioensayos
•Actividad biológica
•Clara asociación de la hormona y del efecto biológico que produce
•La reacción biológica debe ser dosis dependiente (curva dosis
respuesta)
•El material de prueba debe ser homogeneo
Relaciones dosis-respuesta
•Determinación Biológica
•Ensayo de receptores
•Estudio de la unión de una molécula con su receptor
•No mide receptores sino que sitios de unión. Para asegurarse que ese
sitio de unión corresponde a un receptor debe caracterizarse.
•Sirve como complemento a los bioensayos
Medición de receptores
Determinaciones inmunológicas
• Uso de anticuerpos
• Anticuerpos acoplados a reactivos que dan algún tipo de señal (color,
fluorescencia)
• Anticuerpos Monoclonales
• Anticuerpos Policlonales
•
•
•
•
•
•
Radioinmunoensayo (RIA)
IRMA
ELISA
Fluorescencia
Quimioluminiscencia
Sistema Biotina-Avidina
Principios del RIA
Determinaciones inmunológicas
• RIA desarrollados en el laboratorio
•
•
•
•
•
•
Testosterona
Progesterona
Estradiol (Coat-A-Count, y con antisuero)
Cortisol
Insulina (anticuerpo de cobaya contra insulina humana) (Antisuero)
LH (iodación)
Enzyme linked immunoabsorbent assay
• Medición de PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotropin)
mediante ELISA en el Laboratorio
IRMA
Determinaciones Histológicas
Torres et al., 2003