Transcript Pruebas pretransfusionales Alfaro

PRUEBAS
PRETRANSFUSIONALES
-Antony Barrantes J.
-Daniela Sequeira C.
Siglo XVII: Jean-Baptiste Denis realiza la primera
transfusión sanguínea
Crisis hemolítica intravascular con muerte del paciente
CONDICIONES DEL DONANTE
• Gozar de buen estado de salud.
• Tener entre 18 y 65 años de edad.
• Pesar más de 50 kilos.
• Si el donante es hipertenso, es posible que done sangre.
• No presentar fiebre o haber padecido alguna enfermedad en los
últimos 7 días.
• Descansar por lo menos 6 horas la noche anterior a la
donación.
• Tomar el desayuno habitual, el almuerzo o la cena completos
dependiendo de la hora en que se done sangre.
• Es preferible no tomar ningún tipo de medicamento dos
semanas antes de la donación (excepto los anticonceptivos).
• Si tiene tatuajes o piercing, tener al menos un año de haberlos
hecho.
• Cualquier persona que solo utilice hipoglicemiantes orales o
metformina para su tratamiento puede donar
SITUACIONES DE RIESGO
• El uso de drogas intravenosas
• Relaciones sexuales con parejas ocasionales (no estables).
• Los tatuajes, perforaciones en cualquier parte del cuerpo
(piercing) y acupuntura.
• El uso de objetos cortantes no esterilizados.
PRUEBAS:
De compatibilidad:
-clasificación sanguínea ABO
-clasificación sanguínea
-rastreo e identificación de anticuerpos irregulares o inesperados
-pruebas cruzadas
Para la determinación de agentes infecciosos en la sangre donada:
-Virales: VIH, Citomegalovirus y los virus de la Hepatitis B y C
-Parasitarios: Malaria y la Enfermedad de chagas
-Bacterianos: Treponema Pallidum causante de sífilis, salmonella y
otros agentes capaces de provocar sepsis en el receptor .
BANCO DE SANGRE DEL HOSPITAL DR.R.A
CALDERÓN GUARDIA
BANCO DE SANGRE DEL HOSPITAL DR.R.A
CALDERÓN GUARDIA
Mencione tres condiciones que
debe tener el donante
SISTEMA ABO
PRUEBA DE IDENTIFICACIÓN DEL GRUPO ABO
• Se basa en una técnica de hemaglutinación.
• Se utilizan reactivos, que tiene anticuerpos específicos para
cada antígeno. Después de mezclar una gota de antígeno con
una de sangre, debe observarse la presencia de
hemaglutinación.
• PARTE #1: Buscar en los eritrocitos la presencia de
antígenos A y/o B en la membrana, llamado esto
prueba globular o directa.
• PARTE #2: Realizar la prueba sérica o inversa, que
consiste en buscar en el suero o plasma la presencia
de anticuerpos anti-A y/o anti-B según corresponda.
**Ambas pruebas deben hacerse tanto en donantes como
receptores
EQUIPO UTILIZADO EN EL HOSPITAL DR.R.A
CALDERÓN GUARDIA
*Las siguientes son situaciones de riesgo para un donador de
sangre:
a) Relaciones sexuales con parejas estables, tatuajes,
perforaciones, y uso de objetos cortantes no esterilizados
b) Tratamientos con acupuntura, uso de drogas intravenosas,
hipertensión arterial y tatuajes
c) Uso de drogas intravenosas, relaciones sexuales con parejas no
estables, tatuajes y perforaciones.
d) Uso de objetos cortantes no esterilizados,
anticonceptivos orales, tatuajes y perforaciones
uso
de
CLASIFICACIÓN SANGUÍNEA RH
•
El Antígeno D
-
El antígeno D es después de los antígenos A y B el más importante en la medicina de
transfusión.
-
La presencia del antígeno D está determinada por el gen d que es amorfo por lo que no
se ha podido demostrar la existencia de un antígeno d ni un anticuerpo anti-d”.
RH POSITIVO
RH NEGATIVO
Presenta el antígeno
No presenta el antígeno
• El principio del método se basa en la aglutinación directa de los
hematíes por el anticuerpo específico.
•
La aglutinación de los hematíes ocurre en dos fases: la primera
fase llamada fase de sensibilización consiste en la unión del
anticuerpo al antígeno correspondiente en la membrana de la
célula. Seguidamente en la segunda fase se produce la
aglutinación de los hematíes sensibilizados.
DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO D CON
PORTAOBJETOS
DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO D CON TUBOS
DE ENSAYO
DETERMINACIÓN DE PRESENCIA DEL ANTÍGENO
D DÉBILMENTE EXPRESADO
Mencione el principio de la
prueba para la determinación del
grupo ABO
ANTICUERPOS INESPERADOS
• Son anticuerpos distintos a anti-A o anti-B que reaccionan con
antígenos que están ausentes de la membrana de los hematíes del
individuo que los produce.
• La producción de estos anticuerpos por parte del individuo ocurre por
la isoinmunización con hematíes a través de embarazos o
transfusiones.
• Objetivo de la prueba: Prevenir la transferencia pasiva de
anticuerpos al receptor, disminuyendo el riesgo de reacciones posttransfusionales.
• El principio de esta prueba se basa en la capacidad del suero del
individuo de aglutinar y/o hemolizar células cuya composición
antigénica es conocida en cuanto a los antígenos más importantes en
inmunohematología.
DETERMINACIÓN EN SUERO
1. Tubo C1, Tubo C2
2. 2 gotas de suero + células pantalla (I y II)
3. Centrifugar e incubar
4. AGLUTINACIÓN?
5. 2 gotas de albúmina bovina
6. Centrifugar e incubar
7. AGLUTINACIÓN?
1. 3-4 lavados de las células
2. Suero anti globulina poliespecífico
3. Centrifugar
4. AGLUTINACIÓN?
5. En débiles: células de control de Coombs
6. Centrifugar
7. AGLUTINACIÓN?
Describa las formas existentes para
la determinación del grupo Rh
PRUEBAS CRUZADAS
Autotestigo
Se realiza para verificar que el
receptor no posea anticuerpos
sensibilizando sus propios
hematíes.
Prueba
menor
Prueba mayor
Verifica que en el suero o plasma
del donante no existan
anticuerpos contra los hematíes
del receptor.
Tiene como propósito determinar
que en el suero del receptor no
existan anticuerpos de
importancia clínica contra los
antígenos eritrocitarios del
donante.
PRUEBA CRUZADA MAYOR
FASE I
TUBO PM
Agregar 2 gotas
del suero del
receptor SR
AGREGAR
Una gota de
suspensión de
eritrocitos al
5%del donante
ED
CENTRIFUGAR
1000 rpm por
1 min
Aglutinación y/o Hemolisis
INTERPRETACIÓN
• Positivo (detener la prueba)
• Negativo : Continuar fase II
OBSERVAR
AGLUTINACIÓN
Y/O HEMOLISIS
Desprender el botón
de células del fondo
• FASE II
TUBO
Agregar 2 gotas
de albumina
Mezclar
INCUBAR
A 37ºC durante
15 min
CENTRIFUGAR
1000 rpm por
1 min
Aglutinación y/o Hemolisis
INTERPRETACIÓN
• Positivo (detener la prueba)
• Negativo : Continuar fase III
OBSERVAR
Hemólisis y
desprender el botón
de células del fondo
• FASE III
TUBO PM
Lavar 4 veces
con solución
salina a 3000 rpm
durante 2 min
En cuarto lavado
Desechar
elsobrenadante
AGREGAR
2 gotas del
reactivo de
antiglobulina
poliespecifico
Aglutinación y/o Hemolisis
INTERPRETACIÓN
• Positivo (detener la prueba)
• Negativo : COMPATIBLE
Centrifugar de
inmediato
Observar con la
ayuda de lupa o
microscopio
PRUEBA CRUZADA MENOR
Se utilizan 2 gotas de suero del donador, más una gota de suspensión de
eritrocitos al 5% del receptor
Se realiza el procedimiento mencionado antes mencionado
No se realiza siempre y cuando el banco de sangre realice la detección o rastreo de anticuerpos
inesperados a sus donantes
Interpretación
Si no se visualiza hemolisis o aglutinación en alguna de las fases: COMPATIBILIDAD
AUTOTESTIGO
TUBO
Agregar 2 gotas
de suero del
receptor SR
AGREGAR
Una gota de
suspensión de
eritrocitos al 5%
del receptor
Proceso
simultáneo con
prueba mayor
Aglutinación y/o Hemolisis
INTERPRETACIÓN
• Positivo (detener la prueba, en casos que
no sean de )
• Negativo : COMPATIBLE
OBSERVAR
AGLUTINACIÓN
Y/O HEMOLISIS
NECESIDAD DE TRASFUSIÓN EN SITUACIONES
URGENTES
• El médico debe considerar el riesgo de trasfundir sangre sin los estudios de
pruebas cruzadas VS riesgo de complicación del paciente mientras se
realizan las pruebas cruzadas.
2. PRUEBAS PARA LA DETERMINACIÓN DE
AGENTES INFECCIOSOS
•
Las pruebas para la detección de agentes infecciosos se encuentran establecidas en la legislación
de cada país.
•
Según la resolución Nº 2008-017301, inciso d.
Se indica que las pruebas por las que se tamiza la sangre en Costa Rica son:
• Anticuerpos contra el HIV I y II
• Anticuerpos contra la Hepatitis C
• Anticuerpos y antígeno de la Hepatitis B
• Anticuerpos contra la sífilis o VDRL
• Anticuerpos contra el HTLV
• Anticuerpos contra el Trypanosonoma cruzi
•
Además menciona que el Banco de Sangre debe buscar el equilibrio más seguro entre oferta y
demanda de hemoderivados que minimice el riesgo de infección para el receptor, de modo que se
evite el consumo de recursos en el tratamiento o secuelas o enfermedades provocadas por la
transfusión de sangre, así como el deterioro de la calidad de vida de los costarricense
•
Se utilizan métodos de Inmunodiagnóstico, los cuales en su mayoría se basan en la detección de
anticuerpos contra el agente infeccioso
• Mencione la utilidad de las pruebas
cruzadas
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS PARA EL VIRUS DE
INMUNODEFICIENCIA HUMANA(HIV1/HIV2)
•
Según la OMS:
“El SIDA se trata de una enfermedad infectocontagiosa de carácter grave, con una
gran heterogeneidad de síntomas y signos clínicos, debido a la presencia de un virus
que una vez ingresado al organismo ataca fundamentalmente su sistema inmune,
disminuyendo sus defensas orgánicas y dejando al individuo suceptible a múltiples
agentes infecciosos que pueden provocar su muerte”
•
El virus reduce el número de linfocitos T colaboradores, provocando que los
individuos sean susceptibles a tumores e infecciones oportunistas.
•
La presencia del virus causa la producción de anticuerpos específicos frente a
VIH-1 o VIH-2.
•
El EIA de tipo indirecto es utilizado en los bancos de sangre como prueba
presuntiva para determinar los anticuerpos para el HIV-1/HIV-2.
•
Otras pruebas presuntivas utlizadas consisten en pruebas de aglutinación, saliva y
orina, mientras que el Western Blot, Inmunoflorescencia y radioinmunocrepitación.
ANÁLISIS INMUNOENZIMÁTICO INDIRECTO
Figura: Esquema resumido del principio biológico del EIA indirecto
El EIA indirecto es también utilizado en…
•
Determinación de anticuerpos para :
•
Virus Linfotrópico T humano (HTLV-1)
•
Virus de la Hepatitis C (HCV)
•
Tripanosoma cruzi, causante de la enfermedad de Chagas.
TRYPANOZOMA CRUZI
•
A partir de setiembre del 2003 en los Bancos de Sangre de la CCSS se implementó la
tamización del 100 % de los donantes de todo el territorio nacional.
Figura. Distribución de la seropositividad por T. cruzi en los donantes de sangre , según
Banco de Sangre CCSS, Costa Rica. De setiembre de 2003 a setiembre de 2004.
Torres et al, Prevalencia de anticuerpos contra el Trypanosoma cruzi en donantes de sangre de la Seguridad
Social- Costa Rica, Setiembre 2003 - Setiembre 2004. Revista Costarricense de Ciencias Médicas, 2004.
DETERMINACIÓN DEL ANTÍGENO DE
SUPERFICIE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B
(HBSAG)
•
HBsAg significa antígeno de superficie de la hepatitis B, también conocido
como antígeno Australia.
•
Para la determinación del HBsAg en suero o plasma del donantes
de alto o bajo riesgo es utilizado el EIA tipo sándwich.
• ¿Cuál es el tipo de EIA utilizado para la
detección de Anticuerpos ante el virus de HIV1/HIV-2 , T. cruzi, VHC y HTLV-1.?
ANÁLISIS INMUNOENZIMÁTICO TIPO SANDWICH
Figura : Esquema resumido del principio biológico del EIA tipo sandwich
ANTÍGENO CORE DEL VIRUS DE LA HEPATITIS
B(ANTI-HBC)
•
Individuos infectados con HBV pueden arrojar resultados negativos para el HBsAg,
por lo que se ha implementado la determinación de anticuerpos para el antígeno
core de la hepatitis B.
•
El antígeno Core de la Hepatitis B consiste en una proteína intracelular que se
expresa ante la infección por el virus.
•
Usualmente el EIA utilizado para la detección del antígeno Anti-HBc es de tipo
competitivo.
ANÁLISIS INMUNOENZIMÁTICO DE TIPO
COMPETITIVO
Figura: Esquema resumido del principio biológico del EIA competitivo.
DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS NO
TREPONÉMICOS, ASOCIADOS A LA INFECCIÓN
POR TREPONEMA PALLIDUM
•
La infección por T. pallidum, agente etiológico de la sífilis da lugar a la formación de
anticuerpos denominados reaginas o no treponémicos
•
Dichas sustancias están dirigidos contra componentes del tejido como cardiolipina,
lecitina y colesterol, cuando dichos anticuerpos se detectan en el suero del individuo se
puede sospechar de la presencia de T. pallidum.
•
Las pruebas diseñadas para determinar anticuerpos no treponémicos son poco
específicas y frecuentemente arrojan resultados falsos positivos en presencia de
anticuerpos antifosfolipídicos que se generan en enfermedades como la lepra,
mononucleosis infecciosa, malaria y lupus eritrematoso sistémico.
•
Los métodos para la determinación de anticuerpos no treponémicos son el VDRL
(Venereal Disease Research Laboratory) y RPR( Prueba rápida para la reagina). Toda
prueba positiva para anticuerpos no treponémicos deberá confirmarse con exámenes
como el FTA-abs (Fluorescent Treponemal Antibody-absorption), con el cual se confirma
el diagnótico de sífilis.
VDRL Y RPR
•
Se tratan de preparados no treponémico especialmente diseñados para la detección y
semi-cuantificación de reaginas plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra
componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum.
•
Las "reaginas" presentes en el suero de individuos infectados con Treponema pallidum,
se detectan por acción de las mismas con antígeno de cardiolipina, lecitina y colesterol
adsorbido sobre partículas de carbón.
•
La reacción produce una aglutinación visible macroscópicamente, favorecida por las
partículas de carbón.
PaGIA
•
El inmunoensayo de partículas en gel (PaGIA por sus siglas en inglés) es un método que
consiste en microtubos que contienen una matriz de gel y un polímero particulado rojo
sensibilizado con los antígenos recombinados TpN15, TpN16 y TpN47 en una suspensión
lista para usar.
•
El inmunoensayo en partículas de gel mostró una sensibilidad de 98.8% y una
especificidad de 100%, además tiene un tiempo de reacción de 20 minutos lo cual lo
destaca frente a los otros métodos.
Quesada C. Seguridad transfusional: La determinación de anticuerpos contra Treponema pallidum en
donantes de sangre. Asociación Mexicana de medicina transfusional, 2012.
•Gracias