Institut des cellules Souches pour le Traitement et l'Etude des maladies Monogéniques Comment réparer le cerveaux et ses annexes avec les cellules souches pluripotentes humaines

L’équipe

Christelle MONVILLE De l’équipe s’occupant des Rétinopathies Jérôme POLENTES Brigitte ONTENIENTE Marion BRENOT De l’équipe s’occupant des Lésion Neurovasculaire Sébastien DUPRAT

Sommaire

1_ Culture

 Pourquoi utiliser des cellules souches ?

 Cellules hES et IPS  Mefs

2_ Différenciation

 Cellules RPE ( Retinal pigmented epithelium)  Cellules souches neurales ( NSC ) → Immunohistochimie

3_ Les applications

 Les greffes  La thérapie cellulaire hESC, hiPS 1 2 3

I. Culture des cellules pluripotentes 

Auto renouvellement illimité



Pluripotence i.e potentiel de différenciation maximum

I. Culture des cellules pluripotentes Biopsie, fibroblastes Reprogrammation Embryon surnuméraire Fécondation

in vitro

Diagnostic Génétique (D.P.I*) Blastocyste

Cellules souches pluripotentes induites (iPS) Cellules souches embryonnaires humaines (hES)

I. Culture des cellules pluripotentes

Les mef (mouse embryonic fibroblast)

Cellules nourricières provenant de la souris Culture de mefs

II. Différenciation Cellules embryonnaires humaines Production in vitro de RPE humains

In vitro

Injection

X40

II. Différenciation RPE confluentes Trypsine 5min, 37°C RPE décollées comptage Remise en culture des RPE (500000c/cm2) Immunocytochimie 10j de culture Bleu= noyaux Vert= membrane cellulaire

II. Différenciation Ki67 Nest ine DAPI TUj1 GFAP DAPI Tuj1: Neurones et GFAP: astrocytes Cellule souche neurale

Principe de l'immunofluorescence

L'immunofluorescence sert a vérifier le type de cellule présente dans une culture ou une greffe.Il faut préparer des anticorps primaires qui vont venir se fixer sur les cellules spécifiques aux anticorps dans la culture ou sur la coupe de cerveau ayant subi une greffe.L'anticorps secondaire,contrairement au primaire, est fluorescent.Il va se fixer au anticorps primaires. Il faut ensuite rincer la coupe de cerveau ou la culture dans du PBS ( phosphate Buffer Salt ) pour enlever le surplus d'anticorps.Il ne reste plus qu'à observer au microscope.

Anticorps Primaires Cellule Anticorps secondaires

III. Applications

Les Greffes

Coupes de cerveau de rat ayant subi une greffe Colorées au Cresyl Violet Début de la greffe Greffe Avant du cerveau Fin de la greffe Arrière du cerveau

Mme Cassini Mme Bonafin Mme Rivière Mr Deroin Mme Henez Remerciements