Transcript Využití laboratorních zvířat ve vývoji nových léčiv

Využití laboratorních zvířat
ve vývoji nových léčiv
(experimenty in vivo)
• Pokusy na laboratorních zvířatech jsou
nedílnou a nenahraditelnou součástí
biomedicínských experimentů
• Musí se zachovávat pravidla hry
(zákony)
• Dodržování zásad práce s pokusnými
zvířaty uvedených v rámci zákonů, je
především v zájmu vědců samotných
Etické zásady – koncepce tří „R“
• REPLACEMENT – náhrada
laboratorních zvířat v pokusech
(hlavně výuka)
• REDUCTION – redukce počtu zvířat
výběrem vhodných metod,
uspořádáním experimentu, atd.
• REFINEMENT – snížení až úplné
vyloučení bolestivých a stresujících
postupů
Legislativa I.
• Projekt pokusů – cíle, očekávané přínosy
• popis pokusu ve vztahu ke zvířeti
• doložení nezbytnosti pokusu, zdůvodnění
volby zvířat
• zdůvodnění počtu zvířat, způsob tišení
bolesti, anestézie
• způsob naložení se zvířaty po ukončení
pokusu, zdůvodnění opakování zákroku, …
Legislativa II.
Orgány ochrany zvířat
• Ministerstvo zemědělství (www.mze.cz)
• Veterinární správa (KVS Olomouc)
• Ústřední komise na ochranu zvířat
(ÚKOZ)
• Odborné komise při uživatelském
zařízení
• Oprávnění dle §17 zákona 246/1992
Sb.
Legislativa - III.
• Zákon č. 246/1992 Sb. na ochranu
zvířat proti týrání
•
•
•
•
•
•
Změna 1993 (č. 162/1993 Sb.)
Změna 1994 (č. 193/1994 Sb.)
Změna 1997 (č. 243/1997 Sb.)
Změna 1998 (č. 30/1998 Sb.)
Změna 2004 (č. 77/2004 Sb.)
Změna 2008 (č. 312/2008 Sb.)
• NYNÍ zákon č. 359/2012 Sb.
Vyhláška č. 39/2009 Sb. o ochraně,
chovu a využití pokusných zvířat
Aspekty genetiky labor. zvířat
• Outbrední populace = geneticky jedineční jedinci
• Inbrední kmeny = 20 a více páření bratr x sestra
(výsledkem jsou homozygoti, sledování vlivu
genetického pozadí zvířete)
• Mutantní kmeny = knock-out, knock-down, knockin (náhrada určitého genu)
• Transgenní kmeny = přenesený gen do genomu
(humanizovaná myš)
Podle osídlení patogeny rozdělujeme:
• Konvenční zvířata
• SPF – specifických patogenů prostá
• Bezmikrobní
(výzkumy trávení a vstřebávání,
studia o funkci antibiotik, nemoci
z ozáření,…)
Klasifikace Mikrobiologická
SPF
DEFINOVANĚ ASOCIOVANÁ
GNOTOBIOTICKÁ
bezmikrobní
(axenická)
monoxenická
dixenická
bezmikrobní
A
A+B
polyxenická
A+B+C
bez specifikovaných
patogenů
-P1-P2-P3
konvenční
Systém chovu
• Otevřený – vstup i výstup zvířat, osob i
materiálu je bez bariéry
• Bariérový –zvířata jsou oddělena od
vnějšího prostředí a vstup a výstup je možný
pouze přes bariéru (hygienickou smyčku) k
zamezení průniku nežádoucích vlivů z
vnějšího prostředí
• Izolátorový – zvířata jsou trvale oddělena
bariérou od vnějšího prostředí a osob
Schéma bariérového chovu
Schéma bariérového chovu
(Cendelín a Voller 2009)
11
Schéma izolátoru
(Cendelín a Voller 2009)
• Nejčastěji používaná zvířata k
vědeckým experimentům
Laboratorní
potkan
Laboratorní
myš
Laboratorní
zvířata
Morče
Bílý
králík - příklady
pes
Beagle
Zlatý
křeček
• Laboratorní myš (Mus musculus)
54 %
• Laboratorní potkan (Rattus norvegicus)
39 %
• Křeček zlatý (Mesocricetus auratus)
2%
• Morče domácí (Cavia apperea)
2%
• Králík domácí (Oryctolagus cuniculus)
2%
• Pes domácí (Canis familiaris)
• jako laboratorní zvíře užíván od poloviny 19 st.
• •• • Prase
domácí
(Sus
scrofa)
jako
laboratorní
zvíře
užíván
roku1930
1780barvy
- Lavoisier
jako
laboratorní
zvíře
užíván
odod
roku
roku
1906
standardizován
první
kmen
bílé
- Wistar
• nejčastěji používán Novozélandský bílý
• •• • Ryby
používán
zejména
testech
senzibilace
při výzkumu
patogenních
používán
zejména
připři
testech
karcinogenity
nejpoužívanější
outbrední
kmeny
- SpragueaDawley
(SD), Wistar
(WI), Long
nejčastěji
používáno
plemeno
Beagle
•• jako
laboratorní
zvíře
počátku.
20 st. na kůži,oči a sliznice
používán
zejména
přiužívána
testechod
akutní
dráždivosti
mikroorganismů
Evans
(LE)
průměrná
85 testech
- 100 g subchronické a chronické toxicity a při
• ••• Obojživelníci
používánhmotnost
zejména
při
vyšlechtěno
200
inbredních
kmenů, běžně
používáno
25
•
z
hlediska
experimentální
toxikologie
považován
za
nehlodavce
•
průměrná
hmotnost
700
1200
g
nejpoužívanější
inbrední
kmeny - Fisher 344 (F 344), Brown Norway (BN),
toxikokinetických
průměrná
délka
• ••• Plazi
průměrná
váha života
20 -studiích
401.5
g - 3 roky
(LW) a
Wistar
Furth
• Lewis
průměrná
hmotnost
3,54 --(WF)
55 kg
průměrná
délka
života
let
••• průměrná
průměrná
hmotnost
10
15
kg
délka
života
1.5
3
roky
• • Primáti
průměrná hmotnost 200 - 250 g
•
průměrná délka života 2.5 - 3.5 roku
(www.mpouzar.net/prednasky/tdata.ppt)
Léky stažené z trhu pro nežádoucí
účinky
• Mibefradil (Posicor) – 1998
(inhibice CYP3A4)
• Troglitazon (Rezulin) – 2000
(hepatotoxicita)
• Cerivastatin (Cholstat) – 2001
(rhabdomyolýza)
• Rofecoxib (Vioxx) – 2004 (↑ I.M.)
Léčiva užívaná ke tlumení bolestivých
podnětů
• analgetika
• lokální anestetika
• celková anestetika
Analgetika
Opioidní analgetika:
• morfin
• fentanyl
Nesteroidní protizánětlivé látky:
• Ketoprofen
• Meloxikam
Sedace
• Ke zklidnění zvířete před neinvazivními
příp. málo bolestivými výkony
• Součást premedikace před celkovou
anestezií
Diazepam, midazolam, medetomidin
Lokální anestezie
• Znecitlivění v určité oblasti (oko, močová
trubice – při katetrizace,…)
• Trimecain (Mesocain)
• Procain
• Lidocain
• Bupivacain
Celková anestezie
•
•
•
•
•
•
•
•
Premedikace – Atropin
Injekční celková anestetika
Časté kombinace léčiv:
Fentanyl + medetomidin (i.p.)
Ketamin + diazepam (i.p., i.m., i.v.)
Ketamin + xylazin (i.p., i.v., i.m.)
Medetomidin + propofol (i.m., i.v.)
Fentanyl + dexmedetomodin + diazepam
(i.m.)
Celková anestezie
•
•
•
•
Inhalační celková anestetika
Éther
Halotan
Isofluran, sevofluran
Eutanázie
- usmrcení zvířete s minimem jeho fyzického
a duševního utrpení.
Fyzikální metody
• dislokace krční páteře
• dekapitace (gilotina)
Chemické metody
• oxidu uhličitý
• barbituráty nebo éter (předávkování)
• Embutramid + mebezoniumjodid +
tetrakain (T61) i.v. aplikace
GMO
organizmy, jejichž genetický základ byl
úmyslně pozměněn vnesením či vyjmutím
nějakého genu (genů).
.
Význam GMO
Farmacie a medicína
- výroba léčiv (inzulín, lidský růstový
hormon,...)
- studium chorob, vývoj léků
Zemědělství
-Zlepšení vlastností rostlin (odolnost proti
houbovým a virový chorobám, škůdcům,
zvýšení nutriční hodnoty …)
K zamyšlení:
geneticky modifikované organizmy
GM plodiny, GM živočichové
klonování, genová terapie …
ANO?
NE?