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Laboratoire
« Bases moléculaires de la réponse aux
xénobiotiques»
Bahïa EL ABED, 3ème1
du 12 au 16 décembre 2011
Sommaire
-Présentation de l’entreprise
-Fonctionnement de l’entreprise
-Culture de cellules
-Compte-rendu hebdomadaire
-Description des tâches accomplies
-Conclusion
Présentation de l’entreprise
Suivant
U – 775 INSERM est un laboratoire public où l’on
réalise des recherches scientifiques pour étudier
différents sujets de recherche: le cancer du
colon, du poumon, la transplantation rénale ( =
du rein) , le métabolisme au niveau du foie et
les xénobiotiques…
Ce laboratoire se situe dans l’université Paris 5
au Centre universitaire des Saints-pères, dans la
rue portant le même nom au 6ème
arrondissement, à Paris.
Fonctionnement de l’entreprise
( ICI ) Traduction des abréviations
Suivant
Culture de cellules rénales adhérentes
Suite
Les machines utilisées:
Flasques
-Hotte chimique, incubateur, bain
marie, centrifugeuse, microscope
Le matériel utilisé:
- gant/blouse, milieu de culture
spécifique pour les cellules ,des
flasques / plaque 6 ou 12 puits, pipette,
cellule de Malassez
Plaque 6 puits
Plaque 12 puits
La culture de cellule est un
procédé qui a pour but de changer
Plusieurs conditions possibles: BTS en
le milieu de culture des cellules
analyse biologique ou FAC
(= là où elles
biologie/biochimie
grandissent et se nourrissent à la fois).
La formation requise:
Réalisation d’une culture de cellules (suite)
Suivant
1- décongeler les cellules
2- centrifuger
3- enlever le milieu de
culture et en mettre un
propre
7- on laisse les cellules
dans l’incubateur,
pendant 72 heures cette
fois
8- (les cellules se sont
multipliées) on décolle
4- on met les cellules ainsi
les cellules qui, comme
que le milieu dans la flasque elles sont adhérentes, se
sont accrochées à la
5- on laisse les cellules dans
paroi de la flasque
l’incubateur pendant 24
heures
Pour finir, on peut
compter le nombre de
6- ensuite, on change de
cellule que l’on a avec la
nouveau de milieu de
technique de la cellule
culture
de Malassez.
Cellules cultivées
en laboratoire U775
INSERM, vues au
microscope
Compte rendu hebdomadaire
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Lundi
Mardi
Mercredi
Jeudi
-Poursuite de la
manipulation
-Utilisation de la
salle utilisant une
technique
d’immunofluoresce
nce (plus
d’’informations
dans la description
des tâches
accomplies)
- Utilisation de la
chambre noire pour
achever la
manipulation
- Autre
manipulation
pour vérifier
si le Western
Blot a
marché
- Nouvelle
manipulation:
reverse
transcription
Observation
de cellules
cultivées
- Observation
d’une
manipulation
effectuée sur
des tissus de
cerveau
Matin
-Visite du
laboratoire
- début de la
manipulation
Western Blot
- Poursuite
de la
manipulation
Aprèsmidi
- Poursuite de
la manipulation
- Poursuite
de la
manipulation
Vendredi
Description des tâches accomplies
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Mesure de la viabilité cellulaire  Nous
comptons, dans l’ensemble de cellules
cultivées, le nombre de cellules mortes et
vivantes, à l ’aide d’une lame contenant la
cellule de Malassez, d’un microscope, d’un
compteur manuel, et d’un colorant « bleu
trypan » qui met en bleu les cellules mortes.
Western Blot  nous avons cherché à
voir les variations d’une protéine en
fonction des produits qu’on lui a
administré. Le résultat a eut lieu dans une
chambre noire, dans le même type que
lorsqu’on développe des photos: c’est la
chimiofluorescence.
Immunofluorescence  Nous avons
cherché à détecter dans des cellules
cultivées dans une plaque 12 puits des
colocalisations de protéines différentes (
LC3B et CMHII). Le résultat a eut lieu dans
une salle avec un microscope à
épifluorescence et le logiciel « NIS
element ». Nous avons aperçu des points
oranges suite au mélange de deux protéines
colorées. (voir si dessous)
Conclusion
J’ai beaucoup apprécié cette semaine d’immersion dans le monde du travail, il m’a permis
de cerner un peu mieux ce qui m’attend plus tard à l’aboutissement de mes études. J’ai
beaucoup aimé la façon dont les chercheurs travaillent, car ils n’ont pas d’horaires strictes et
font des manipulations sur ce qu’ils souhaitent.
Cela a eut une forte influence sur mon projet personnel car je concevais le monde
scientifique comme quelque chose d’ennuyant à la longue. Mais c’était le contraire,
j’apprenais beaucoup de choses et m’intriguais sur tout ce qui n’était pas «
mathématiquement » correct. Je commençais à réfléchir comme un chercheur !
J’ai aussi beaucoup appris du côté de la manipulation, j’étais souvent chargée de doser
les pipettes (ces dernières étant beaucoup plus élaborées que celles qu’on utilise
généralement qui sont en plastique mou).
Je conseillerais à un futur stagiaire de ne pas s’inquiéter s’il ne sait pas du tout ce qu’il
voudra faire plus tard, comme moi je me suis inquiétée, car le stage ouvre vraiment les yeux
sur les directions d’étude que l’on peut prendre !
Sigle des risques biologiques 