Transcript 2,3 Mb
Interakce toxické látky s organismem I Absorpce Distribuce Toxikologie (C005) Interakce toxické látky s organismem A. Absorpce – přestup tox. látky z místa primárního kontaktu do krevní plazmy B. Distribuce a transport na zásahové místo – rozdělení tox. látky mezi krevní plazmu a plazmatické proteiny, přestup volného podílu tox. látky z krevní plazmy do tkání, rozdělení tox. látky mezi jednotlivými částmi těla C. Interakce s receptorem D. Exkrece – přestup tox. látky z krevní plazmy do moči, žluči, potu, vydechovaného vzduch, mateřského mléka,.... E. Biotransformace − v průběhu všech výše uvedených dějů může docházet k metabolizaci (biotransformaci) toxické látky Toxikokinetika (ADME) Tkáňová depa volný podíl vázaný podíl Místo účinku vázaný podíl volný podíl Absorpce Volný podíl TL Vázaný podíl TL na PP Exkrece Metabolity Biotransformace Průchod přes buněčnou membránu Buněčná membrána - model tekuté mozaiky • základním skeletem je dvojvrstva fosfolipidů, cholesterol, glykolipidy – celkově výrazně hydrofobní • integrální a periferní proteiny, strukturní a funkční proteiny – iontové kanály, membránově vázané enzymy (cyt P 450) – hydrofilní • poměr lipidů a proteinů v biomembráně přibližně 1 : 1 • póry naplněné vodou - např. u cév tvoří 0,2 % povrchu model tekuté mozaiky • • semipermeabilní bariéra - selektivní prostup živin a metabolitů kontrola pH, osmotického tlaku, koncentrace iontů, na povrchu ukotveny důležité enzymy Fosfátová hlava Lipidový konec Fosfátová hlava hydrofilní část, směřuje do vodního prostředí (ven z buňky a dovnitř cytoplazmy) Lipidový konec hydrofobní část, tvoří vnitřek membrány Uhlovodíkové řetězce Integrální proteiny Periferní proteiny Lipidy Obr. 1: Model tekuté mozaiky membránových struktur 5 Mechanismy prostupu toxických látek biomembránou A) Pasivní transportní mechanismy • nevyžadují přísun energie z metabolismu buňky • pohyb ve směru koncentračního, či elektrochemického gradientu, nebo na základě rozdílu jiných fyzikálně chemických vlastností prostředí na obou stranách biomembrány B) Aktivní transportní mechanismy • transport proti směru koncentračního či elektrochemického gradientu • překonávání koncentračního gradientu vyžaduje přísun energie - hydrolytické štěpení makroergických vazeb ATP Vyšší koncentrace TL Transportovaná látka (TL) Transportní protein Lipidová dvojvrstva Proteinový kanál Energie Facilitovaná difúze Prostá difúze Pasivní transport Nižší koncentrace TL Aktivní transport 7 Transport látek přes buněčnou membránu 1. látky rozpustné v tucích prostou difuzí přes fosfolip. dvojvrstvu 2. látky rozpustné ve vodě difundují proteinovými kanály (ligandově nebo elektricky řízené či stále otevřené) 3. velké hydrofilní molekuly pomocí facilitované difúze 4. osmóza vody skrz proteinové kanály 5. částice a kapénky exo - či endocytózou 6. aktivní transport - anorganické ionty i velké hydrofilní molekuly proti směru koncentračního gradientu Pasivní transportní mechanismy Prostá difúze • nejvýznamnější mechanismus prostupu toxických látek při jejich vstřebávání (absorpci) do organismu - rychlost absorpce popsána Fickovým zákonem dQ DAKow C1 C2 dt h • D - difuzní koeficient • A - absorpční plocha • Kow - rozdělovací koeficient • h - tloušťka membrány • C1 - C2 - koncentrační gradient • prostup lipofilních látek o nižší molekulové hmotnosti ( M 500 ) (diethylether, benzen, tetrachlormethan, barbituráty, DDT, cyklohexan) • prostup malých nepolárních molekul plynů (N2, CO2, O2, N2O) 9 Pasivní transportní mechanismy Prostá difúze - vliv pH na množství vstřebané látky • přes lipofilní buněčnou membránu může projít prostou difúzí pouze elektricky neutrální, nepolární molekula • v případě slabých kyselin a zásad projde pouze neionizovaný podíl Henderson-Hasselbachova rovnice Slabá kyselina Slabá zásada Ionizovaný R-H R-OH Neionizovaný R-.......H+ R+......OH- pH při kterém je přávě polovina látky ionyzována je pKa • slabá báze se bude přednostně ionizovat v kyselém prostředí a naopak 10 Henderson-Hasselbalchova rovnice [neprotonovaný podíl] log = pH - pKa [protonovaný podíl] Slabá kyselina A log pH pKa AH vlastnost prostředí (např. krevní plazmy) vlastnost slabého elektrolytu (např. nikotin) Při vysokém pH je rovnováha slabé kyseliny posunuta k A- podíl nesoucí náboj nedifunduje přes biomembrány Slabá báze B log pH pKa BH Při vysokém pH je rovnováha slabé zásady posunuta k B podíl bez náboje dobře difunduje přes biomembrány • toxická látka se bude koncentrovat na té straně biomembr., kde je více ionizována • v žaludku se ve větší míře vstřebávají slabé kyseliny, v tenkém střevu slabé báze Vliv pH v místě absorpce na míru vstřebání slabých elektrolytů (potkan, tenké střevo) % absorbované látky Kyseliny pKa pH 4 pH 5 pH 7 pH 8 5-nitrosalicylová salicylicylová acetylsalicylová benzoová 2.3 3.0 3.5 4.2 40 64 41 62 27 35 27 36 0 30 --35 0 10 --5 4.6 5.0 8.4 40 21 9 48 35 11 58 48 41 61 52 54 Báze anilin aminopyrin chynin Data from: Schanker LS, J Pharmacol Exp Ther 123:81, 1958. Pasivní transportní mechanismy Prostá difúze - vliv rozdělovacího koeficientu KOW na množství vstřebané látky Kow = Cn-oktanol / Cvoda Oktanol Voda • Lipofilní podíl Hydrofilní podíl přes lipofilní buněčnou membránu budou ve větší míře přecházet látky s vyšší hodnotou KOW 13 Absorpce v žaludku během 1h (% dávky) 50 580 40 52 30 20 10 absorpce těchto látek je proporcionální k jejich lipofilitě 1 0 barbital (pKa 7.8) secobarbital (pKa 7.9) thiopental (pKa 7.6) 14 Pasivní transportní mechanismy Filtrace • transport využívající rozdílného hydrostatického tlaku na obou stranách biomembrány • volný prostup vody a malých molekul ve vodě rozp. látek, prostup iontů • kanály pro vodu vznikající mezi oscilujícími molekulami lipidů – normální buněčná membrána - póry 4 Å (prochází látky M = 100 - 200) – membrána glomerulu (ledviny) - póry 40 Å (prochází látky M = 50 000) • rychlost filtrace je úměrná rozdílu tlaků, ploše membrány a propustnosti membrány pro danou látku Pasivní transportní mechanismy Iontové kanály • iontové kanály tvořené integrálními membránovými proteiny – stále otevřené, ligandově a elektricky řízené • rychlost transportu ovlivněna i počtem kanálů - saturabilita 16 Pasivní transportní mechanismy Usnadněná difúze (přenašečový transport) • nevyžaduje přísun energie, hnací silou rozdíl koncentrací na obou stranách biomembrány • k transportu látek se využívá integrálních membránových proteinů, které mají funkci přenašeče • přenos pomocí translačního pohybu nebo následkem konformační změny vazebné bílkoviny • přenos velkých v tucích nerozpustných molekul a některých anorg. i org. iontů ve směru koncentračního gradientu • rychlost transportu závisí na koncentraci přenašečů (saturabilita) a na velikosti koncentračního spádu,. kompetice endogenních a/nebo exogenních molekul • symporty a antiporty 17 Aktivní transportní mechanismy Aktivní transport • přenašečový transport, vyžaduje přísun energie (ATP) • přenos velkých hydrofilních molekul proti směru koncentračního gradientu • rychlost ovlivněna koncentrací přenašečů a dostupností energie • probíhá zde kompetice endogenních a/nebo exogenních molekul Přenos iontovými kanály • přenos iontů proti směru koncentračního gradientu • Na+/ K+ ATP ázová pumpa Endo/Exocytosa Absorpce • je-li místem absorpce kůže, zažívací trakt, nebo plíce musí tox. látka při přestupu do krevní plazmy překonávat buněčné membrány • množství absorbované tox. látky závisí na její schopnosti překonávat biomembránu Biologická dostupnost (F) – množství látky, které se v nezměněném stavu dostane z místa prvního kontaktu s organismem na místo účinku (případně do tělního oběhu) – vliv místa a způsobu aplikace iv > inhal > ip > im > po > td – parenterální vs. enterální aplikace - „first pass effect“ • je snižována nevstřebaným podílem, podílem zachyceným na plazmatických proteinech, zmetabolizovaným podílem (first- pass efekt), podílem účastnícím se enterohepatální cirkulace, vyloučeným podílem apod. 22 23 Absorpce - GI trakt Faktory ovlivňující úroveň absorpce • doba setrvání látky v místě absorpce • plocha pro absorpci • úroveň prokrvení • pH v místě absorpce Dutina ústní a jícen • krátká doba setrvání toxické látky • pH v ústech okolo 5, pH slin okolo 7 • sliznice pod jazykem silně prokrvena, parentální aplikace • vysoká úroveň absorpce některých látek - např. nikotin, nitroglycerin 25 Absorpce - GI trakt Žaludek • doba setrvání pevné látky 3,5 - 4 h, kapalina řádově minuty • pH v rozmezí 1 - 3 silné kyseliny a báze a slabé báze ionizovány, slabé kyseliny neionizovány - vstřebávají se • vlivem žaludeční kyseliny dochází k chemickým změnám celé řady látek • výrazný vliv aktuální náplně žaludku Tenké střevo • absorpční plocha 10 m2, pH 5 - 8, doba setrvání 3 - 5 h, silné prokrvení • prostá difůze neioniz.podílu slabých bází a kyselin, lipofilních látek • facilitovaná difůze a aktivní transport velkých a/nebo hydrofilních molekul, kovových iontů a disociovaných elektrolytů 27 Absorpce - GI trakt Tenké střevo • vliv střevní mikroflóry - vznik nitrosaminů z dusitanů • enterální aplikace - „first pass“ efekt Tlusté střevo a konečník • absorpční plocha max. 1 m2, doba setrvání 8 - 14 h, pH = 7,8 - 8, silně prokrvená sliznice • význam zejména při rektální aplikaci léků 28 Absorpce - dýchací cesty Nosní sliznice • malá plocha, krátká doba setrvání, silná vrstva buněk nosní sliznice • převážně lipofilní látky - prostá difuse, méně hydrofilní látky - filtrace • maligní neoplasie Průdušnice a průdušky • absorpce plynů, vyloučení částic zachycených v hlenu Plicní sklípky (alveoly) • plocha 70 - 90 m2 , jednovrstvá tenká lipofilní membrána s velkým množstvím pórů • přes membránu se vstřebávají lipofilní látky • přes póry se velmi dobře vstřebávají i ve vodě rozpustné plyny a aerosoly 30 Absorpce - dýchací cesty Absorpce částic • látky rozpustné ve vodě a tucích procházejí do krevního řečiště • látky nerozpustné ve vodě ani v tucích se ukládají - pneumokoniózy, rakovina Vliv velikosti částic na úroveň absorpce • nad 10 m - sedimentace, záchyt v dýchacích cestách • okolo 5 m - záchyt v alveolách kolem 25 % • okolo 1 m - záchyt v alveolách kolem 50 % • okolo 0,25 m - snížená retence následkem pomalejší sedimentace • pod 0,1 m - vliv Brownova pohybu 31 32 Absorpce - kůže • velká plocha, velká vrstva membrán • prostá difúze lipofilních látek transepidermální cestou • polární látky pronikají přes suchou popraskanou pokožku • mazovými žlázkami pronikají zejména lipofilní látky • potními žlázkami pronikají i malé hydrofilní molekuly • parentální aplikace 33 34 Distribuce • proces rozdělování vstřebané látky (metabolitů) z krevní plazmy do jednotlivých orgánů, přestup látky na místo účinku • v krevní plazmě TL rozdělena mezi plazmovou vodu a plazmatické bílkoviny, do dalších orgánů může prostupovat pouze volný podíl • přestup přes membránu kapilár velmi rychlý - přes mezibuněčné prostory endotelu • do buněk orgánů přestup nejčastěji prostou difúzí Rychlost distribuce • vazba toxické látky na plazmatické bílkoviny v krvi • rychlost krevního proudu - stupeň prokrvení orgánu • dynamika průniku látek přes biomembrány • rozpustnost ve vodě a v tucích, stupeň ionizace 35 36 Bariéry omezující distribuci Hematoencefalická bariéra • štěrbinová spojení (tight-junctions) buněk endotelu v krevních kapilárách neumožňují přestup velkých molekul z krve do tkání mozku • • gliové buňky (astrocyty) obalují povrch mozkových kapilár a svou enzymatickou činností též zabraňují přestupu celé řady látek z krve do mozku • prostou difůzí procházejí přes bariéru malé molekuly plynů (O2, CO2) a látky vysoce rozpustné v tucích - nikotin, heroin, methylrtuť..... • aktivním transportem (facilitovanou difůzí) procházejí přes bariéru látky potřebné pro buněčný metabolismus (glukóza, aminokyseliny, vitamíny) a hormony Placentární bariéra 38 39 Depozice ve tkáních Depozice v kostech Kosti jsou ze 30 % tvořeny organickými látkami – kolagenová vlákna a ze 70 % anorganickými solem – hydroxyapatit (Ca3(PO4 )2 (OH)n ) • sloučeniny Pb2+ - výplň mezer v kolagenové struktuře • anion F- - náhrada OH skupin v apatitu - fluorapatit • kation Sr2+ - náhrada Ca • chelatační činidla, antibiotika tetracyklinového typu 41 Depozice ve tkáních Depozice v tukových tkáních • • silně lipofilní sloučeniny postupný návrat do krevního řečiště - THC (27 dní) • DDT - problém ekotoxikologie Depozice v měkkých tkáních • • velké množství látek se ukládá v játrech halogenované uhlovodíky - hepatotoxické • Pb - játra, Cd - ledviny Depozice ve vlasech • některé kovy Hg, As