Transcript 第三次实验补体结合实验

第三次实验
补体结合试验
complement fixation test
• 是一种根据抗原和相应抗体结合后形成
的免疫复合物能吸附补体并激活补体的
原理而设计的一种抗原抗体反应。
• 两个系统：
–待检系统：已知Ag(或Ab);未知Ab(或Ag)；
–指示系统：SRBC； 溶血素
• 五种参与成分：以上四种成分加上补体
补体结合试验
CFT complement fixation test
原理：用已知的指示系统检测试验系统是否结合补体。
指示系统：
SRBC和溶血素
试验系统：待测样品和
已知抗原（或抗体）
补体
溶血—阴性；不溶血—阳性
补体参与的抗原抗体反应
a
b
a
b
a
b
Complement Fixation
No Ag
Ag
Ag
Patient’s
serum
Ag
原理
待检系统
待检系统
补体系统 指示系统
指示系统
不溶血
溶血
实验材料：2人一组
•
•
•
•
•
•
•
•
•
抗原：1支/2 人
血清（阳性血清、阴性血清）各1支/2人;
待检血清
补体： 1支/2 人
溶血素:1支/2 人
1.5%SRBC :1支/2 人
N.S :1瓶/2 人
试管:9支/2 人
吸管与胶头: 6支/2 人
待检血清的处理
• 18份待检血清（编号）
• 用生理盐水按1：5稀释到试管内，备用
1ml血清+4ml盐水
实验方法
• 1.加样,摇匀（按表3-1加）
• 2.指示系统的准备(敏感化红细胞),摇匀;
• 3.以上同时放于37℃水浴箱20分钟;
• 4.取出后1-8管加敏感化红细胞1ml,摇匀;
• 5.放于37℃水浴箱20分钟;
• 6.观察结果
补体结合试验结果分析
1
2
3
4
5
不溶血
溶血
6
7
8
9
• 思考：
1
补体的性质和作用有哪些？本实
验 体现了补体的哪些性质？
2 补体结合试验中设置的对照管各有
什么意义？
3 补体结合试验中的待检血清为什么
要经过56℃30min灭活？
• 抗补体作用:
凡具有影响并降低补体的活性的作用称为抗
补体作用
抗
原
（抗补体）灭
活
待
检
血
清
已知抗原
补体
未知抗体
补
体
过
多
阳
性
血
清
阴
性
血
清
补
体
太
少
假阳性
溶血素
不溶血
红细胞
溶 血
自
溶
假阴性
玫瑰花环试验
人类T细胞表面有绵羊红细胞受体，
两者结合可呈现花环形成反应。
花环形成细胞（%）的计算：
正常值为50-70%
E受体
+
T细胞
绵羊红细胞
E花环试验
E花环试验结果示意图
二、T细胞功能的检测
淋巴细胞转化实验（T细胞增殖试验）
刺激物
非特异性：
特异性
基本原理：T细胞敏感刺激物在体外刺激
T细胞→T细胞增殖、转化→根据其增殖转化
能力评定相应的细胞功能。
• 淋巴细胞转化试验
体外培养的淋巴细胞非特异性刺
激物（植物血凝素）刺激后，由成
熟的小淋巴细胞转化为原始的淋巴
母细胞。
植物血凝素
受体
植物血凝素 +
小淋巴细胞
淋巴母细胞
形态法
37℃培养
72小时
外周血或单个核细胞+刺激物————→
涂片染色镜检
淋巴细胞转化率
转化的淋巴细胞数
100%
转化的淋巴细胞数 未转化的淋巴细胞数
参考值：50%～80%，小于50%视为降低。
评价：方法简便易行，受主观因素影响大。
6-8um
12-16um
12-20um