Transcript 酶联免疫吸附试验

实验项目
酶联免疫吸附试验
医学检验实验教学中心
实验目的
 通过临床标本HBsAg的检测，使学生掌
握酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗原的
原理、方法。
 通过引导学生分析、讨论HBsAg的临床
意义，培养学生分析和解决问题的能力。
 通过介绍临床自动化仪器，开拓学生视
野。
酶联免疫吸附试验原理
双抗体夹心法检测原理
酶联免疫吸附试验原理
竞争法检测原理
酶联免疫吸附试验类型和原理
改良竞争法检测原理
酶联免疫吸附试验原理
捕获法检测原理
提出问题、学生思考
 1.临床怀疑乙型肝炎病毒感染的病人，
应该检测哪种免疫学指标？
 如果采用ELISA，应该选择哪种类型
的ELISA检测？
试剂与器材
 试剂
 1.酶标抗体:HRP-抗HBs
 2.抗HBs,待检血清,阳性和阴性对照血清
 3洗涤液：Tris—HCL---Tween20
 4辣根过氧化物酶底物液：TMB-过氧化氢尿
素溶液
 5终止液：H2SO4
试剂与器材
器材
 酶标板微量反应板
试剂与器材
器材
酶免分析仪-样品架
操作方法
1 包被
 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24
小时。
操作方法
1 包被
 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24
小时。
→
操作方法
1 包被
 取抗HBs 0.1mL,加到酶标板的各孔。4℃24
小时。
操作方法
2
洗涤
 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。
吸水纸拍干。
操作方法
3
加待检样品
 各孔加待检血清0.1mL，同时做阳性对照，
阴性对照，空白对照。37 ℃ 60分钟。
→
操作方法
3
加待检样品
 各孔加待检血清0.1mL，同时做阳性对照，
阴性对照，空白对照。37 ℃ 60分钟。
→
操作方法
4 洗涤
 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。
吸水纸拍干。
操作方法
5

加酶标抗体
各孔加HRP-抗HBs-IgG 0.1mL.37 ℃ 60分钟。
→
操作方法
6 洗涤
 弃去空中液体，洗涤液洗3次，每次1分钟。吸水纸
拍干。

操作方法

7 加底物液

各孔加底物液0.1mL.置黑暗10-20分钟。
→
操作方法

8 终止反应

各孔加终止液0.05mL，终止反应。
结果判定
 目测法

阳性孔呈桔黄色，阴性孔无色或极浅黄色
结果判定
 比色法
用酶标分光光度计测A492nm，计算P/N值。
 P/N值：待检血清A492nm—空白对照A492nm/阴性
对照A492nm—空白对照A492nm
 P/N≥2.1,结果为阳性。否则为阴性。

讨论

方法评价

简便，敏感，特异。

临床意义


HBsAg阳性可见于急性肝炎的潜伏期和急性期。
慢性活动性肝炎，重症肝炎，无症状携带者，肝硬化，原发性肝癌。

注意事项

注意RF的干扰。
标本应无溶血。

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