Transcript 1.1 乙肝病毒的流行现状

发光乙肝五项定量检测意义
主要内容
一、乙肝病毒病原学、流行病学及常见检测指
标
二、乙肝五项定量检测意义
三、乙肝五项常见检测模式解释
一、乙肝病毒的病原学
及流行病学及常见检测指标
1.1 乙肝病毒的流行现状；
1.2 乙肝病毒的形态和结构；
1.3 乙肝的传播途径和高危人群；
1.1 乙肝病毒的流行现状
1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行概况
1.1.2我国HBV感染流行现状
1.1.3乙肝亚型的地理分布
1.1.1全世界乙肝病毒感染的流行现状
1.1.2我国HBV感染流行现状

我国是HBV感染的高流行区。

我国HBV感染率概况为：
– 抗HBc及／或抗HBs阳性：60％
– 非感染人群：26％
– 慢性乙型肝炎：2％
– 表面抗原阳性的慢性无症状HBV携带者：10％
– 表面抗原阴性的慢性无症状HBV携带者：2％
资料来源：骆抗先，《乙型肝炎基础和临床》第二版
1.1.3乙肝亚型的地理分布
 ayw多见于非洲、东地中海、中东及巴基
斯坦；
 adw多见于北欧及美洲；adr多见于东南
亚及远东，adw及adr多见于印尼、马来
西亚、新几内亚及泰国
 我国则具有一定的民族性，汉族人以adr
为主，adw次之
 蒙古族、维吾尔族、回族等兄弟民族几
乎都是ayw亚型，ayr亚型极其少见，而
adr亚型几乎没有。
1.2 乙肝病毒的形态和结构
1.2.1 HBV的基本（电镜）结构
1.2.2 HBV的基因结构
1.2.1HBV形态结构
大球形颗粒
（Dane颗粒）
小球形颗粒
管形颗粒
Dane颗粒的基本结构示意图
HBsAg
（外膜蛋白）
HBcAg
（核衣壳蛋白）
HBV DNA
DNAP
Dane颗粒的基本结构示意图
1.2.2 HBV基因结构
pre-s2
S
pre-s1
P
HBV DNA 3.2 kb
C
pre-S1
pre-S1蛋白
pre-S2
pre-S2蛋白
S
HBsAg
pre-C
HBeAg
C
HBcAg
P
DNAP
X
HBxAg
HBsAg
pre-c
X
pre-S2
pre-S1
1.3传播途径及高危人群
1.3.1乙肝病毒的传播途径
血液传播、
（输血、血制品、
医疗器械等）
母婴
传播
日常生活
（伤口、共用刀具、
消化道粘膜破损或
溃疡等）
性传播
1.3.2高危人群
 母亲是HBV感染者的婴儿
 乙肝患者的家庭成员
 吸毒者
 监狱犯人
 性传播疾病病人
 血液透析病人
 医护人员
1.4疾病诊断的临床意义及常见模式分析
1.4.1 HBV血清标志物及其临床意义
1.4.2 介绍几个临床乙肝检测的概念
1.4.3 临床常见乙肝血清标志物反映模式
1.4.1 HBV血清标志物及其临床意义
肝功能(主要为丙氨酸氨基转移酶(ALT)
 乙肝病毒感染标志物
※ HBV-DNA
※两对半:

抗原
外膜 ——————HBsAg
核壳分泌蛋白—— HBeAg
核壳结构蛋白——HBcAg
 肝组织病理学检查
抗体
HBsAb
HBeAb
HBcAb
ALT的意义

谷丙转氨酶（ALT）主要存在于肝细胞中。当
肝脏发生炎症、坏死时，ALT就会从肝细胞内
大量释放入血，导致血清中ALT升高，因此
ALT升高是判断肝细胞损害的一个敏感指标。

但是除了病毒性肝炎外，其它类型的肝炎或肝
脏疾病，ALT也会升高。
HBV-DNA的意义
DNA是基因，因此HBV-DNA是HBV的
遗传物质，当HBV侵入肝细胞后，就会
以HBV-DNA为模板，合成新的HBV颗
粒并释放入血，故HBV-DNA是病毒复制
的一个重要指标。
肝组织病理学检查
肝组织病理学检查是“金标准”：
 明确诊断
 衡量肝脏炎症活动度
 衡量纤维化程度
 决定治疗方案，预测药物疗效
对肝病而言
肝组织学检查是比血清ALT
更灵敏而精确的指标
乙肝病毒感染血清标志物
抗原
抗体（机体产生）
外膜
HBsAg
HBsAb
核壳分泌蛋白
HBeAg
HBeAb
核壳结构蛋白
HBcAg
HBcAb
DNA
HBV-DNA
（1）HBsAg
曾用名：HA、澳抗
●出现时间：HBV感染后2～6个月（潜伏期）
●持续时间：
急性自限性肝炎：6个月内可消失
慢性肝炎或慢性HBsAg携带者：可持续阳性
●HBsAg 有抗原性而无传染性
HBsAg
HBV
整合
肝细胞
DNA
S 基因
●HBsAg 的亚型
持续表达
长江以北
长江以南
“空心汤团”
adr
adw
ayr
新疆、西藏、内蒙等
ayw
（2）抗-HBs
●出现时间：急性感染后期、HBsAg 消失后
和注射疫苗后正常的免疫应答者
●抗-HBs为保护性抗体（中和抗体）
其出现标志着HBV感染进入恢复期和注
射乙肝疫苗后产生正常的免疫应答
●抗-HBs 对相同 HBsAg亚型的HBV再感染有免
疫力，但对不同亚型的HBV保护力不完全。
（3）HBeAg
HBeAg是HBcAg的降解产物
HBV C基因
C区
前C区
表 达
前C / C 蛋白
切割、加工
HBeAg
分泌到细胞外
HBeAg只存在于血清中
HBcAg
●HBeAg是病毒复制和传染性的标志
血清HBeAg与HBV DNA的含量成正相关，
符合率达到95%以上。
（4）抗-HBe
●出现时间：随着HBeAg的消失而出现
●抗-HBe的出现标志着病毒复制减少、传染性降低
抗-HBe阳性者中，16.3%～30%左右HBV DNA
仍阳性
可能与前C基因变异有关
易加重病情、易演变为肝硬化
α-干扰素疗效亦较差
（5）抗-HBc
●HBcAg主要存在于HBV感染的肝细胞内或DANE颗粒
核心中，到血液中即被降解为HBeAg。
一般血清学方法检测不到HBcAg，而只能检测到抗-HBc
持续时间：6～18个月
抗HBc-IgM：是HBV近期感染或慢性感染者病毒活动的标志
抗HBc-IgG：凡“有过” HBV感染者均可阳
性
HBcAg的免疫原性最强
可终身阳性
常规检测的HBV血清标志物的基本解释
HBsAg
HBV感染，但未必是急性肝炎或者
慢性病变活动的病原。
抗HBs
感染后免疫；对疫苗的免疫应答；或HBIG的被动免疫
HBeAg
反映HBV复制，有病毒血症，血液高传染性
抗HBe
ALT持续正常者表示HBV低复制或不复制， HBsAg
(+)血液低传染性。
ALT波动者表示病毒变异。
抗HBc
IgM抗HBc
低滴度表示过去感染；高滴度表示现行感染。
高滴度表示急性或近期感染；
活动性病变可出现低滴度。
来源：骆抗先，乙型肝炎基础和临床，第二版
1.4.2介绍几个概念：
① “两对半” HBsAg、HBsAb、HBeAg、
HBeAb和HBcAb
② 血清抗原—抗体转换率：HBeAg
抗-HBe
③ “转 阴”
常用指标：血清HBeAg抗原—抗体转换率
HBV DNA 阴转率
二、乙肝五项定量检测的应用
 急性乙肝治疗中的具体监测
 慢性无症状携带者（AsC）的动态观察
 酶免或胶体金检测HBsAg（-）的HBV感
染的结果分析
 注射乙肝疫苗后免疫效果（抗-HBs浓度
的定量分析）
 结合FQ-PCR-DNA诊断病情
4-12周
潜
伏
期
1-2周2周-3月
潜 急 急
伏 性 性
后 早 期
期 期
浓度
期限
12
急
性
转
变
年
3-6月
康
复
过
程
痊
愈
早
期
痊
愈
HBsAg
急性乙型肝炎转化图
10
HBeAg
8
HBcAb
（总）
6
相对浓度
HBcAb
（IgM)
4
2
HBeAb
0
0
传染性状态
肝功能
1
2
3
4
5
6
7
8
9
时间
有传染性
可能有 传染性
传染性 不明
转氨酶异常升高
10
11
有免疫力
12
时间（月）
HBsAb
急性乙型肝炎移行为慢性乙型肝炎的过程图
浓度
HBsAg（ng/ml）
HBeAg（NCU/ml）
ALT（IU/L）
0
5
时间（月份）
10
急性乙型肝炎移行为AsC的过程图
浓度
HBsAg（ng/ml）
HBeAg（NCU/ml）
ALT IU/L
0
5
月份
10
慢性无症状感染者HBV血清标志物的动态变化
HBcAb
HBsAg
HBeAg
HBV DNA
浓度
HBeAb
HBsAb
HBsAg（+） 病变激活
HBeAb （+） 病毒清除
化学发光定量（CLIA）检测HBsAg灵敏度可达0.050.1ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是0.51.0ng/ml，胶体金（POCT）检测HBsAg灵敏度是1-5ng/ml也
就是说只有血清中的HBsAg达到0.5-5ng/ml酶标或胶体金才
会呈阳性反应。
■急性乙肝早期：CLIA定量能及早检出HBsAg，确证
HBV感染，几乎能与preS1同时检测，在病程观察中大大缩
短“窗口期”时间，而酶标或胶体金在乙肝早期检测往往
HBsAg呈阴性。
■慢性乙肝：一些患者由于机体对HBV包膜蛋白(HBsAg)
表达较低，酶标或胶体金检测可出现HBsAg和抗-HBs均阴性
的情况，而CLIA技术则可避免这些情况的出现，为正确判
断病情提供依据 。
■病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA或胶体金测
不出抗原，而CLIA定量具有极高的灵敏度，可发现并极有
可能同时检测出HBsAg和抗-HBs。
注射乙肝疫苗后免疫效果（抗HBs浓度的定量分析）：
全程（3针）免疫结束后1个月检测保护性抗-HBs的浓
度，据此值将乙肝疫苗接种者分为四种情况：
 （1）无应答者：抗体浓度小于1mIU/ml，无抗体产生
或非特异性结合反应，约占接种者的5%，继续加大剂
量或更换疫苗厂家全程（3针）免疫注射；
 （2）低应答者：抗体浓度为1-10mIU/ml，保护作用比
较弱，约占接种者的10%，须加强两针疫苗注射；
 （3）中应答者：抗体浓度为10-100mIU/ml，已有一定
的保护力，约占接种者65%，须加强一针疫苗注射；
 （4）高应答者：抗体浓度大于100mIU/mI，免疫效果
最好，约占接种者20%，不需要加强注射。
 因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防
免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。

FQ-PCR-DNA与HBeAg定量检测相关性分析

PCR基本知识：
1、反应五要素： 参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、
模板和Mg2+
2、PCR反应条件为温度、时间和循环次数（变性温度与时间为93℃～
94℃lmin ；退火与延伸(复性)温度与时间 ； 55℃ 2min； 循环次数：
40次
3、PCR反应步骤：变性，退火和延伸
4、假阳性和假阴性
5、血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态
6、不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态

结合PCR诊断病情
HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半”各
项指标定量变化更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治
疗。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓度均
还较高，提示并未完全痊愈，有可能病毒再次出现复制状况，尚须密
切关注。如果HBV-DNA阴性而HBsAg、HBeAg或抗-HBe及抗-HBc浓
度均很低或阴性并持续一段时间，提示可能完全痊愈，预后疗效良好。
（1）定量分析HBsAg和抗-HBs的浓度变化，
可以预见急性乙肝是否处于恢复期。如
HBsAg浓度降低，抗-HBs的浓度逐渐升高，
可说明病情正往恢复期发展。反之，HBsAg
浓度处于较高水平或上升趋势，而抗-HBs一
直处于较低水平，则容易发展为慢性乙肝或
乙肝病毒携带者。在急性HBV恢复期中约有
3%的个例可同时检出低水平HBsAg和抗HBs，然后HBsAg消失而抗-HBs水平渐增高。
（2）定量分析HBeAg和抗-HBe的浓度变化，
可以反映病情变化和治疗效果。定量测定
能明确检测HBeAg向抗-HBe转换的时期，
即表现为HBeAg浓度下降和抗-HBe浓度升
高的过程。高浓度的HBeAg还可间接提示
病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。
高浓度的抗-HBe一方面提示病情的好转，
而在某些时候（如肝功能指标很差）可能
与肝坏死、肝硬化、肝癌有关，应进一步
结合肝功生化指标如ALT、AST、BIL等进
行综合判定。
（3）抗-HBc浓度的高低可以反映病毒感染
的状态。高浓度的抗-HBc提示乙肝急性或
现行感染，常与HBsAg并存，恢复期浓度
降低。慢性乙肝呈抗-HBc持续高浓度。而
低浓度的抗-HBc一般为恢复期或既往感染，
常于抗-HBs并存，无肝损害或肝损害早已
静息。
（4）急性乙肝一般会在六个内病情缓解，甚
至自愈。病情超过六个月仍未缓解者，多转
为慢性化，但通过五项联合定量分析，再结
合肝功指标和HBV DNA的水平，即若表现
为HBeAg下降、抗-HBe出现或渐升，HBsAg
和HBV DNA血清水平降低，这是病变恢复
的时相，可望在1-2年病毒被清除而疾病痊愈；
若HBeAg和HBV DNA 血清水平持续很高的
病人，预期可能保留慢性无症状携带（AsC）
或慢性乙型肝炎。
三.乙肝检测模式的解释
3.1常见九种模式
3.2少见十六种模式
3.3罕见七种模式
乙肝五项定量检测模式解释.doc
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