دانلود با فرمت پاور پوینت
Download
Report
Transcript دانلود با فرمت پاور پوینت
به نام خدا
نگهداری ژرم پالسم و انتقال و کشت بدون
ویروس وامن موز
تهیه کننده :محمدجواد بهروزی
استاد راهنما:
1
مقدمه
رقم کاواندیش موز به تنهایی 13درصد تجارت جهانی موز را دربر دارد.
موز،به دلیل تکثیرکلنی و تک کشتی،مستعدبه انواع بیماریها میباشد
نگهداری ژرمپالسم،میتواند منبع درجه یک مواد ژنتیکی گیاه باشد.
نگهداری بذر،راحت ترین راه نگهداری ژرم پالسم،در میوه ها،در موز بیدانه جوابگو نیست
نگهداری و انتخاب ژرمپالسم ازبافت درخت در این ویترو هم به خاطر هزینه بر بودن کاربرد ندارد
نگهداری در شرایط انجماد روشی است که درآن تمام فعل وانفعاالت شیمیایی متوقف میگردد
دراین روش مواد گیاهی به مدت محدود میتوان نگهداری کرد
دراین مقاله 3روش نگهداری ژرمپالسم برای موز را تشریح میکنیم
2
موادو روش ها
نگهداری ژرمپالسم توده مریستمی با شیشه ای شدن:
برای این منظور،نوک شاخه،به محیط کشت نیمه منجمد MSمنتقل شد
محیط MSحاوی 100،میکرومول 1 ،BAمیکرومول IAA
محلول PVS2حاوی 30،درصدگلیسرول 15،درصد اتیلن گلیکول 15،درصد دی متیل سولفوکسیدو 0/4ساکارز ،به
محیط کشت اضافه و PHروی 5/8تنظیم شد.
مریستم هاتحت دمای 0درجه 60،120،150،180،دقیقه
قرار گرفتند.
بعدازین تیمارمریستم به میکرو وسپس به ازت مایع
منتقل شد.
بعداز 2روز مریستم ها به محیط باززایی در محیطی
تاریک منتقل شدند
3
مریستم ها و بستر کشت
4
نمودار
زیوایی و
نسبت
کالوس به
شاخه بعد از
تیمار و
انجماد
5
نگهداری ژرمپالسم سوسپانسیون سلولهای جنین زا:
سوسپانسیون سلول های جنین زا ازپرآوری کشت مریستم ازارقام مختلف موز بدست آمد
این سوسپانسیون در محیط ZZحاوی نصف مقادیر استاندارد میکرو و ماکرو المنت ها و
ویتامین های محیط MSمیباشد
سوسپانسیون بامحلول انجماد حاوی7/5 ،درصد DMSOو 180گرم برلیترساکارز تیمار شد
سپس محلول مذکور به ازت مایع منتقل و تا 40-درجه سردشد
سپس سوسپانسیون بالفاصله،با آب مقطر 40درجه به
مدت 2دقیقه گرم شد.
سوسپانسیون های جنین زا درنهایت به محیط باززایی
منتقل وبعد از 3ماه گیاهچه ها شمارش شد
مشاهده شد که برخی سوسپانسیون ها،گاهی
اوقات میتوان نتیجه متفاوتی در جوانه زنی و باززایی
نمونه ها نشان دهد
6
سوسپانسیون سلول های
جنین زا
7
نابودسازی ویروس ها
جهت آزمایشات،ویروس CMVو BSVاز گیاه
توباکو استخراج،و به ارقام موز منتقل شد.
10دقیقه بعداز آلودگی،،برگ موز با آب
شستشو داده شد.
ازتوده های مریستمی گیاهان ویروسی مذکور
جهت انجماد استفاده شد
با روش ایمونواسی ()ELISAجهت شناسایی
ویروس CMVو با روش TAS-ELISAجهت
شناسایی ویروس BSVاستفاده شد.
8
نتایج
آزمایشات اخیرنشان دادکه در رشو اول تیماربا PVS2بعد از ازت مایع توده مریستم،به نوع گونه
بستگی داردو در همه ارقام یکسان نیست
برای مریستم های بیشترارقام موز،یک تیمار 20تا 40دقیقه ای با PSV2بهینه میباشد
درکل یک تیمار 2/5ساعته در مقایسه با تیمار 1ساعته با PSV2عملکرد خوبی با افزایش 15
درصدی باززایی مریستم ها پس از انجماد داشته است
مهمترین عاملی که باززایی سلول های جنین زا تحریک میکند کیفیت آنها است
سوسپانسیون های حاوی نسبت بیشترسلول جنین زا،در انجماد زنده ماندند
نتایج نشان دادکه درصد گیاهچه های باززایی شده بعداز انجماد عاری از ویروس CMVو BSVبه
ترتیب 34و 90درصد بود
نتایج همینطورثابت کرد هر چه اندازه مریستم کوچک تر باشد،احتمال آلودگی هم کمتر خواهد بود
9
بیشترین میزان جوانه زنی مربوط به سوسپانسیون THPبا 57درصد جوانه زنی
میباشد
10
درصد گیاهان
ویروسی جوانه زده
سالم پس ازکشت
مریستم وسپس
انجماد
طبق نمودار ستون
سمت راستی آبی
رنگ،گیاهچه های
جوانه زده بعد از
کشت مریستم و
انجماد را نشان
میدهد که بیشترین
جوانه زنی را
دارد.کمترین مقدار
هم مربوط به ستون
سمت چپی و ستون
شاهد ماست که به
طور مستقیم از جنین
زایی به وجود آمد
11
نتیجه گیری
نگهداری ژرم پالسم در حالت انجماد،تکنیک بسیار امیدوار کننده،برای پاکسازی
بیماریهای ویروسی از موز میباشد
عمل وقت گیر برش مریستم در این ویترو به کنار رفته و به عالوه سیاه شدن
ناشی از مواد فنولیک هم به پایان میرسد.
بعد از 1ماه از نگهداری ،سلول ها جوانه زده و زایایی و قوه نامیه آنها در طول
انجماد دست نخورده مانده بود
12
چکیده
نگهداری ژرم پالسم برای نگهداری طوالنی مدت درختان بیدانه و کلنی ها مثل موز کاربرد
دارد.
سه روش برای انجماد ژرم پالسم انجام شد.
روش اول انجمادسریع مریستم ها ی پیش تیمارشده با ساکارزبه مدت 2هفته
روش دوم شیشه ای کردن نوک مریستم ریشه ها در شرایط این ویترو
روش سوم و بهترین روش ترکیب دو روش قبلی
عالوه بر نگهداری ژرمپالسم،روش انجمادباعث نابودسازی ویروس ها در گیاهان آلوده
میشود
13
پیشنهادات
استفاده از کشت مریستم جهت تولید گیاهان عاری از ویروس
استفاده از انجماد ژرمپالسم جهت نگهداری ژنوتیپ های مرقوب گیاهان
استفاده از روش سوم این مقاله جهت انجماد
پیش تیماری با PSV2باعث بهبود جوانه زنی بعد از خروج از ازت مایع است
استفاده از ژرمپالسم جهت تولید گیاهان عاری از ویروس
14
منابع
15