روش استاندارد انجام آزمايشهای اندازه گيری هموگلوبين PCV ، و شمارش سلولی
Download
Report
Transcript روش استاندارد انجام آزمايشهای اندازه گيری هموگلوبين PCV ، و شمارش سلولی
روش استاندارد انجام آزمايشهای اندازه گيری
هموگلوبين PCV ،و شمارش سلولی
Measurement of Blood
Hemoglobin using
Hemiglobincyanide(HiCN) Method
ابتداآهن هموگلوبين توسط فري سيانيد پتاسيم اكسيده شده (همي
گلوبين)
سپس همي گلوبين توسط سيانيد پتاسيم تبديل به همي گلوبين
سيانيد ميشود.
واكنش در حرارت اتاق
زمان الزم براي ايجاد واكنش 5دقيقه يا كمتر
معرف
KCN
0.05g
K3Fe(CN) 6
0.2g
KH2PO4(Anhydrous)
0.140g
Detergent
0.5-1ml
Reagent water(Type 1) 1000ml
مشخصات معرف
شفاف وزرد رنگ
زمان الزم براي ايجاد واكنش 5دقيقه يا كمتر
دترژانها ليز گلبول هاي قرمزورسوب پروتئين ها را افزايش
مي دهند.
در طول موج بيشتر از 480نانومتر جذب نوری ندارد.
pH=7-7.4
در صورت كدورت دور ريخته شود.
هرماه بصورت تازه تهيه شود.
Sampling
Venipuncture
K2EDTA or Na2EDTA(1.5-2.2mg/ml blood)
Fresh sample
Solution of sample &Reagent is stable
K3EDTA
مواد؛ وسايل وتجهيزات
كليه وسايل شيشه اي مثل پي پتها ولوله ها استاندارد وكاليبره
از لحاظ شيميايي تميز باشند.
اسپكتروفتومتر كاليبره
استانداردهموگلوبين
Reference Method
Macrodilution
100ميكروليتر خون با 25ميلي ليتر معرف
4/0يا 5/0ميلي ليتر خون با 100ميلي ليتر معرف
04/0ميلي ليتر خون با 10ميلي ليتر معرف
Routin procedure
20ميكروليتر خون 5 +ميلي ليتر معرف
روش آزمايش
غلظت هموگلوبين نمونه با استفاده از جذب نوري نمونه در طول
موج 540نانومتر در مقابل بالنك با كمك جذب نوري و غلظت
استانداردو يا با كمك منحني استاندارد محاسبه ميشود.
واحد اندازه گيري گرم در ليتر
تداخالت
Lipoproteinemia
Lipemia
WBC>20×109/L
Plt>700×109/L
Hb S
خطا ها
خطا هاي نمونه گيري
خطا هاي روش انجام آزمايش
خطا هاي مربوط به مواد و تجهيزات
خطا هاي آزمايشگر
Procedure For Determining
Packed Cell Volume By
Microhematocrit Method
PCV
نسبت حجم گلبولهاي قرمز به حجم خون كامل ميباشد.
.
اصول آزمايش
خونگيري مويرگي؛ وريدي وشرياني
K2EDTAضد انعقاد مناسب جهت كاليبراسيون
K3EDTAبه علت ايجاد چروكيدگي در گلبول هاي
قرمز MCVرا %2كاهش و MCHCرا به همين
ميزان افزايش ميدهد.
اصول آزمايش
نگهداري نمونه در دماي18-26 °
آزمايش حد اكثر 6ساعت پس از نمونه گيري انجام
شود.
خطاي قابل قبول دراين روش± %1ميباشد.
انجام آزمايش بصورت دو تايی
مشخصات لوله
جنس از شيشه مخصوص
طول لوله 75 ±5/0ميليمتر
ضخامت جداره 2/0ميليمتر
قطر داخلي + 0.085ـ 55/1
داراي باند آبي در يك انتها
مشخصات دستگاه ميكروسانتريفوژ
شعاع چرخش بيشتر از 8سانتيمتر
در عرض 30ثانيه به حداكثر سرعت برسد
RCFحدود 15-10هزار gدر محيط بمدت حداقل 5
دقيقه بدون افزايش دما از 45درجه
داراي زمان سنج اتوماتيك (.با قابليت تنظيم حداقل
30ثانيه)
RCF=Relative Centrifugal Field
2
RPM=Relative Per Minute
RCF=0.00001118 × r × N
روش آزمايش
•50ميكروليتر خون
•4/3-3/2طول لوله از خون پرشود.
•طول خمير مسدود كننده كمتراز 4ميليمتر نباشد.
•نمونه ها بصورت مضاعف آزمايش شوند.
•نتايج حداكثر پس از 10دقيقه خوانده شوند.
•تفاوت نمونه هاي مضاعف از 05/0بيشتر نباشد.
ميانگين ودامنه مرجع
مردان (0.47)0.4-0.54
زنان(0.42)0.37-0.47
منابع خطا
خطاهاي نمونه گيري
خطاهاي لوله
خطاي خواندن
خطاي بدام افتادن پالسما
افزايش كاذب:
هيپو ناترمي
بدام افتادن پالسما
كاهش كاذب:
ضد انعقاد اضافي
هموليز
هيپرناترمي
كاليبراسيون و کنترل کيفی دستگاه
ميکروهماتوکريت
-1بررسي سرعت
-2بررسي زمان سنج
-3بررسي صحت ابزار خوانش
روش غير مستقيم بررسی كاليبراسيون
چند نمونه خون با PCVکمتر از 5/0و حاوی
ضدانعقاد ( K2EDTAرا پس از بيست بار سروته
نمودن به صورت دوتايی به مدت 9 ،7 ، 5 ، 3و 11
دقيقه سانتريفوژ کرده و نتايج ثبت مي گردد که در
صورت مناسب بودن توان دستگاه ( )gنتايج حاصله از
دقيقه 5به بعد می بايست بدون تغيير باقی بماند .
Blood Cell Counting
Leukocyte Counting By
Manual method
عدم دقت اين روش %5/6كه در موارد لكوپني به %15
ميرسد.
از خون حاوي EDTAاستفاده ميشود.
مايع رقيق كننده اسيد استيک ( %2رقت ) 20/1گلبولهاي
قرمز را ليز ميكند.
در موارد لكوسيتوز رقت 100/1يا 200/1
در موارد لكوپني رقت 10/1
منابع خطا
مخلوط نکردن به ميزان کافی
خطاي آزمايش كننده
خطاي ناشي از وسايل
خطاي ميدان ديد
هر چه تعداد سلولهاي شمارش شده بيشتر باشد ميزان خطا
كمتر ميشود.
Platelet counting By
Manual Method
منابع خطا
جمع آوري نمونه
تهيه رقيق كننده(فاقد ذرات خارجي مزاحم)
تكنيك رقيق سازي
پاكيزه نبودن الم
عدم دقت اين روش وقتي كه حداقل 100سلول شمارش
شود %11واگر 40پالكت شمارش شود%15
به دليل تمايل پالكتها به چسبيدن به يكديگر؛جسم خارجي
وشيشه شمارش مشكل ميبا شد.
نمونه :خون وريدي حاوي ضد انعقاد EDTA
محلول رقيق كننده اگزاالت آمونيوم %1با آب مقطر
روش انتخابي شمارش پالكتها استفاده از
ميكروسكوپ فاز كنتراست مي باشد
با تشکر از توجه شما