Transcript روش استاندارد انجام آزمايشهای اندازه گيری هموگلوبين PCV ، و شمارش سلولی

‫روش استاندارد انجام آزمايشهای اندازه گيری‬
‫هموگلوبين ‪ PCV ،‬و شمارش سلولی‬
Measurement of Blood
Hemoglobin using
Hemiglobincyanide(HiCN) Method
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫ابتداآهن هموگلوبين توسط فري سيانيد پتاسيم اكسيده شده (همي‬
‫گلوبين)‬
‫سپس همي گلوبين توسط سيانيد پتاسيم تبديل به همي گلوبين‬
‫سيانيد ميشود‪.‬‬
‫واكنش در حرارت اتاق‬
‫زمان الزم براي ايجاد واكنش ‪ 5‬دقيقه يا كمتر‬
‫معرف‬
KCN
0.05g
K3Fe(CN) 6
0.2g
KH2PO4(Anhydrous)
0.140g
Detergent
0.5-1ml
Reagent water(Type 1) 1000ml
‫مشخصات معرف‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫شفاف وزرد رنگ‬
‫زمان الزم براي ايجاد واكنش ‪ 5‬دقيقه يا كمتر‬
‫دترژانها ليز گلبول هاي قرمزورسوب پروتئين ها را افزايش‬
‫مي دهند‪.‬‬
‫در طول موج بيشتر از ‪ 480‬نانومتر جذب نوری ندارد‪.‬‬
‫‪pH=7-7.4‬‬
‫در صورت كدورت دور ريخته شود‪.‬‬
‫هرماه بصورت تازه تهيه شود‪.‬‬
Sampling
Venipuncture
K2EDTA or Na2EDTA(1.5-2.2mg/ml blood)
Fresh sample
Solution of sample &Reagent is stable
K3EDTA





‫مواد؛ وسايل وتجهيزات‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫كليه وسايل شيشه اي مثل پي پتها ولوله ها استاندارد وكاليبره‬
‫از لحاظ شيميايي تميز باشند‪.‬‬
‫اسپكتروفتومتر كاليبره‬
‫استانداردهموگلوبين‬
‫‪Reference Method‬‬
‫‪Macrodilution‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪100‬ميكروليتر خون با ‪ 25‬ميلي ليتر معرف‬
‫‪ 4/0‬يا‪ 5/0‬ميلي ليتر خون با ‪ 100‬ميلي ليتر معرف‬
‫‪ 04/0‬ميلي ليتر خون با ‪10‬ميلي ليتر معرف‬
‫‪Routin procedure‬‬
‫‪‬‬
‫‪20‬ميكروليتر خون ‪5 +‬ميلي ليتر معرف‬
‫روش آزمايش‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫غلظت هموگلوبين نمونه با استفاده از جذب نوري نمونه در طول‬
‫موج ‪ 540‬نانومتر در مقابل بالنك با كمك جذب نوري و غلظت‬
‫استانداردو يا با كمك منحني استاندارد محاسبه ميشود‪.‬‬
‫واحد اندازه گيري گرم در ليتر‬
‫تداخالت‬
Lipoproteinemia
Lipemia
WBC>20×109/L
Plt>700×109/L
Hb S





‫خطا ها‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫خطا هاي نمونه گيري‬
‫خطا هاي روش انجام آزمايش‬
‫خطا هاي مربوط به مواد و تجهيزات‬
‫خطا هاي آزمايشگر‬
Procedure For Determining
Packed Cell Volume By
Microhematocrit Method
‫‪PCV‬‬
‫نسبت حجم گلبولهاي قرمز به حجم خون كامل ميباشد‪.‬‬
‫‪.‬‬
‫اصول آزمايش‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫خونگيري مويرگي؛ وريدي وشرياني‬
‫‪ K2EDTA‬ضد انعقاد مناسب جهت كاليبراسيون‬
‫‪K3EDTA‬به علت ايجاد چروكيدگي در گلبول هاي‬
‫قرمز ‪ MCV‬را ‪ %2‬كاهش و‪ MCHC‬را به همين‬
‫ميزان افزايش ميدهد‪.‬‬
‫اصول آزمايش‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫نگهداري نمونه در دماي‪18-26 °‬‬
‫آزمايش حد اكثر ‪ 6‬ساعت پس از نمونه گيري انجام‬
‫شود‪.‬‬
‫خطاي قابل قبول دراين روش‪± %1‬ميباشد‪.‬‬
‫انجام آزمايش بصورت دو تايی‬
‫مشخصات لوله‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫جنس از شيشه مخصوص‬
‫طول لوله ‪75 ±5/0‬ميليمتر‬
‫ضخامت جداره ‪ 2/0‬ميليمتر‬
‫قطر داخلي ‪+ 0.085‬ـ ‪55/1‬‬
‫داراي باند آبي در يك انتها‬
‫مشخصات دستگاه ميكروسانتريفوژ‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫شعاع چرخش بيشتر از ‪8‬سانتيمتر‬
‫در عرض ‪ 30‬ثانيه به حداكثر سرعت برسد‬
‫‪ RCF‬حدود ‪ 15-10‬هزار ‪ g‬در محيط بمدت حداقل ‪5‬‬
‫دقيقه بدون افزايش دما از ‪ 45‬درجه‬
‫داراي زمان سنج اتوماتيك ‪(.‬با قابليت تنظيم حداقل‬
‫‪30‬ثانيه)‬
RCF=Relative Centrifugal Field
2
RPM=Relative Per Minute
RCF=0.00001118 × r × N



‫روش آزمايش‬
‫•‪50‬ميكروليتر خون‬
‫•‪4/3-3/2‬طول لوله از خون پرشود‪.‬‬
‫•طول خمير مسدود كننده كمتراز ‪ 4‬ميليمتر نباشد‪.‬‬
‫•نمونه ها بصورت مضاعف آزمايش شوند‪.‬‬
‫•نتايج حداكثر پس از ‪10‬دقيقه خوانده شوند‪.‬‬
‫•تفاوت نمونه هاي مضاعف از ‪05/0‬بيشتر نباشد‪.‬‬
‫ميانگين ودامنه مرجع‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫مردان (‪0.47)0.4-0.54‬‬
‫زنان(‪0.42)0.37-0.47‬‬
‫منابع خطا‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫خطاهاي نمونه گيري‬
‫خطاهاي لوله‬
‫خطاي خواندن‬
‫خطاي بدام افتادن پالسما‬
‫‪ ‬افزايش كاذب‪:‬‬
‫هيپو ناترمي‬
‫بدام افتادن پالسما‬
‫‪ ‬كاهش كاذب‪:‬‬
‫ضد انعقاد اضافي‬
‫هموليز‬
‫هيپرناترمي‬
‫كاليبراسيون و کنترل کيفی دستگاه‬
‫ميکروهماتوکريت‬
‫‪-1‬بررسي سرعت‬
‫‪-2‬بررسي زمان سنج‬
‫‪-3‬بررسي صحت ابزار خوانش‬
‫روش غير مستقيم بررسی كاليبراسيون‬
‫‪‬‬
‫چند نمونه خون با ‪PCV‬کمتر از ‪ 5/0‬و حاوی‬
‫ضدانعقاد (‪ K2EDTA‬را پس از بيست بار سروته‬
‫نمودن به صورت دوتايی به مدت ‪ 9 ،7 ، 5 ، 3‬و ‪11‬‬
‫دقيقه سانتريفوژ کرده و نتايج ثبت مي گردد که در‬
‫صورت مناسب بودن توان دستگاه (‪ )g‬نتايج حاصله از‬
‫دقيقه ‪ 5‬به بعد می بايست بدون تغيير باقی بماند ‪.‬‬
Blood Cell Counting
Leukocyte Counting By
Manual method
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫عدم دقت اين روش ‪ %5/6‬كه در موارد لكوپني به ‪%15‬‬
‫ميرسد‪.‬‬
‫از خون حاوي ‪EDTA‬استفاده ميشود‪.‬‬
‫مايع رقيق كننده اسيد استيک ‪( %2‬رقت ‪ ) 20/1‬گلبولهاي‬
‫قرمز را ليز ميكند‪.‬‬
‫در موارد لكوسيتوز رقت ‪ 100/1‬يا ‪200/1‬‬
‫در موارد لكوپني رقت ‪10/1‬‬
‫منابع خطا‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫مخلوط نکردن به ميزان کافی‬
‫خطاي آزمايش كننده‬
‫خطاي ناشي از وسايل‬
‫خطاي ميدان ديد‬
‫هر چه تعداد سلولهاي شمارش شده بيشتر باشد ميزان خطا‬
‫كمتر ميشود‪.‬‬
Platelet counting By
Manual Method
‫منابع خطا‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫جمع آوري نمونه‬
‫تهيه رقيق كننده(فاقد ذرات خارجي مزاحم)‬
‫تكنيك رقيق سازي‬
‫پاكيزه نبودن الم‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫‪‬‬
‫عدم دقت اين روش وقتي كه حداقل ‪100‬سلول شمارش‬
‫شود‪ %11‬واگر ‪ 40‬پالكت شمارش شود‪%15‬‬
‫به دليل تمايل پالكتها به چسبيدن به يكديگر؛جسم خارجي‬
‫وشيشه شمارش مشكل ميبا شد‪.‬‬
‫نمونه‪ :‬خون وريدي حاوي ضد انعقاد ‪EDTA‬‬
‫محلول رقيق كننده اگزاالت آمونيوم ‪ %1‬با آب مقطر‬
‫‪ ‬روش انتخابي شمارش پالكتها استفاده از‬
‫ميكروسكوپ فاز كنتراست مي باشد‬
‫‪ ‬با تشکر از توجه شما‬