A fertőző állatbetegségek laboratóriumi diagnosztikája, a megelőzés lehetőségei.

(kiemelt kutatási terület

) „Az oktatás és kutatás színvonalának emelése a Szent István Egyetemen” (TÁMOP-4.2.1.B-11/2/KMR-2011-0003) 1

Élelmezésbiztonság = Az élelmiszerek alapjául szolgáló termékek igényeknek megfelelő mennyiségben történő előállítása 2

3

Csirke- és pulykaállományokban enterális fertőzést okozó vírusok elterjedtségének és kóroktani szerepének további vizsgálata

Mándoki Míra, Liptai Orsolya, Rusvai Miklós

4

• •

Baromfitartás

csirke (Gallus gallus domesticus) pulyka (Meleagris gallopavo) broilerállományok: nagyüzemi, iparszerű tartás • új, összetett kóroktanú betegségek, melyekben több kórokozó és környezeti tényezők játszanak szerepet emésztőszervi betegség komplex (

enteric disease, ED)

5 http://en.wikipedia.org/wiki/Poultry_farming

•

Enterális kórképek csirkeállományokban

Runting-stunting syndrome (RSS)

– 1-4 hetes életkor • hasmenés, gubbasztás, alomevés, csipogás és összebújás – változó morbiditás és mortalitás, másodlagos fertőzések: baktériumok, gombák, vírusok • gazdasági kár: csökkent téteményképesség, fejlődésben való visszamaradás, megnövekedett gyógykezelési költség, csökkent takarmányhasznosítás – Oktan: Astroviridae, Coronaviridae, Reoviridae, Adenoviridae, Parvoviridae etc.

6

Enterális kórképek pulykaállományokban

•

Poult enteritis complex (PEC)

– hasmenés, gubbasztás , immunszuppresszió, alomevés és megnövekedett mortalitás – nagy gazdasági jelentőség •

Oktan

– enteropathogén E. coli törzsek –

Coronaviridae, Astroviridae,

Reoviridae, Parvoviridae etc.

•

Poult enteritis and mortality syndrome (PEMS)

– akár 100% morbiditás és mortalitás 7

Az enterális kórképek oktanában vélhetőleg szerepet játszó vírusok

• Astrovirusok – avian nephritis virus ( ANV ) – turkey astrovirus ( TAstV ) • Coronavirusok – turkey coronavirus ( TCV ) – infectious bronchitis virus ( IBV ) • Adenovirusok – avian adenovirus group I ( AAdVI ) – hemorrhagic enteritis virus ( HEV ) • Reovirusok ( ARV ) • Rotavirusok ( AvRV ) • Parvovirusok – chicken parvovirus ( ChPV ) – turkey parvovirus ( TuPV ) 8

Anyag és módszer

• • • • • • 3 év során (2010-2012) beküldött esetek 1-4 hetes csirke- (87) és pulykaállományok (6) boncolás és kórszövettan bakteriológiai vizsgálat indirekt immunhisztokémia (IHC) polimeráz láncreakció (PCR) 9

Targeted virus ChPV / TuPV ANV CAstV TAstVs TAstV-2 TCV HEV ARV AvRV AAdV1

PCR and RT-PCR: chicken samples

Targeted gene

NS1 GP1 ORF 1b ORF-1b capsid ORF 2 nucleocapsid CP1 S4 NSP4 Hexon

Primer name and sequence (5 ’ -3 ’ )

PVF1: TTCTAATAACGATATCACTCAAGTTTC PVR1: TTTGCGCTTGCGGTGAAGTCTGGCTCG ANV-ORF1-f: AGATACGCTTGCTCGTCTTG ANV-ORF1-r: CCTCTAACCGGCGATATTCT ANVpol1F:GYT GGG CGC YTC YTT YGA YAC ANVpol1R:CRT TTG CCC KRT ART CTT TRT TAPG-L1:TGG TGG TGY TTY CTC AAR A TAPG-R1:GYC KGT CAT CMC CRT ARC A MKCAP8F:TCA TCA TCC TCT CAC ACT GG MKCAP19R:AGC AGC AGT AGG TGG CAG TG TCV-NF:GGT AGC GGT GTT CCT GA TCV-NR:CCC TCC TTA CCT TTA GT HEV-CP1-F: GGTTCGTGAACATTGGAGAC HEV-CP1-R: CAGGCACAACAGGTGTAACT S4-F13:GTG CGT GTT GGA GTT TCC CG S4-R1133:TAC GCC ATC CTA GCT GGA NSP4-F30:GTG CGG AAA GAT GGA GAA C NSP4-R660:GTT GGG GTA CCA GGG ATT AA H1:TGG ACA TGG GGG CGA CCT A H2:AAG GGA TTG ACG TTG TCC A 10

Size (bp)

561 608 473 601 802 598 155 1120 630 1219

Annealing

55 53 53 55 53 53 48 53 55 53

Eredmények Megfigyelés: szétnövés, gubbasztás

11

Eredmények Megfigyelés: szétnövés, gubbasztás

Eredmények Boncolás: szétnövés, hasmenés

13

Eredmények Boncolás: szétnövés, hasmenés

14

Eredmények Boncolás: enterits

15

Eredmények Boncolás: enterits

16

Eredmények Boncolás: enterits

17

Eredmények Boncolás: enterits

18

Eredmények Kórszövettan: enteritis, a bélbolyhok megrövidülése, fúziója ( jejunum, H&E )

19

Kórszövettan: enteritis, granulocyták, histiocyták, lymphocyták ( jejunum, H&E )

20

Immunhisztokémia: vírusantigén kimutatása ( jejunum, ChPV

21

)

Immunhisztokémia: vírusantigén kimutatása ( jejunum, ChPV )

22

Eredmények

PCR vizsgálatok pulykaállományokban ChPV/TuPV

Esetsz á É v m 2011 4 2 2012 2 1

TuAstV-2

1 2

AvAst

1 0

Reo

1

AvRota, ANV, HEV, TCoV nem volt kimutatható

0 23

Eredmények

PCR vizsgálatok csirkeállományokban

É v Esetsz á m 2010 13 2011 36 2012 38 3 é v átlaga

ChPV/TuPV

9 (69%) 29 (81%) 33 (87%)

79%



Reo ANV ChAstro AvAst AvRota

3 (23%) 8 (62%) 5 (38%) 6 (46%) 1 (8%) 32 (89%) 21 (58%) 18 (50%) 8 (22%) 2 (6%) 27 (71%) 18 (47%) 11 (29%) 4 (11%) 0

61%



56%



39%



26%



5%

 24

Eredmények PCR vizsgálatok csirkeállományokban

2010 2011 2012 0 v í russal 1 v í russal 2 v í russal 3 v í russal 4 v í russal 5 v í russal 6 v í russal 4 2 6 1 2 10 10 11 3 1 9 10 8 9 1 2,46 3,08 2,47 3 é v 1 15 22 24 20 4 1 2,72 25

Megbeszélés

• • • A felmérés tanúsága szerint a csirkeállományok enteritissel járó kórképe esetén leggyakrabban parvovírusok és reovírusok mutathatók ki A parvovírusok előfordulási aránya folyamatosan növekszik Igen gyakori a többszörös fertőzés 26

Köszönöm a figyelmet!

Az oktatás és kutatás színvonalának emelése a Szent István Egyetemen" (TÁMOP-4.2.1.B-11/2/KMR-2011-0003) 27