Transcript Staphylococcus aureus - Institut Scientifique de Santé Publique

Laboratoire de Référence
Staphylococcus aureus (MRSA)
Le laboratoire de Référence pour les Staphylocoques - MRSA de l'Université Libre de Bruxelles assure les services suivants:
- Identification et antibiogramme de souches atypiques de staphylocoques par méthodes :
v Phénotypiques : tests biochimiques, concentrations minimales inhibitrices, phénotype de sensibilité aux glycopeptides (études de population)
v Génotypiques : identification des différentes espèces de staphylocoques par PCR inter-tRNA, détection des gènes
nuc (pour l’identification des S. aureus), mecA (codant pour la résistance à l’oxacilline), mupA (codant pour la résistance à la mupirocine) et des gènes de résistance aux macrolides-lincosamides-streptogramines (MLS), aux tétracyclines et aux aminoglycosides.
-
Typage moléculaire : macrorestriction génomique par électrophorèse en champ pulsé (PFGE), multi-locus sequence typing (MLST) et typage de la cassette chromosomique mec du staphylocoque (SCCmec).
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Détection des gènes codant pour les toxines : les exfoliatines A et B, la leucocidine de Panton Valentine (PVL) et la Toxic
Shock Syndrome Toxin (TSST-1).
Ces analyses sont réalisées à la demande des laboratoires hospitaliers pour des souches cliniques posant des problèmes
diagnostiques ou sur des collections de staphylocoques provenant d'enquêtes épidémiologiques locales. Les formulaires de
demande d’analyses sont téléchargeable sur le site Internet du laboratoire de référence des MRSA à l’adresse suivante :
http://www.mrsa.be
Le laboratoire participe également au programme de surveillance des MRSA dans le cadre de 2 composantes :
1)
Le programme européen EARSS (European Antimicrobial Resistance Surveillance System) concernant la résistance de
S. aureus cause de bactériémie chez les patients hospitalisés en collaboration avec le service d’Epidémiologie de
l’Institut Scientifique de la Santé Publique (ISP).
2)
Le programme national de surveillance microbiologique des MRSA en Belgique pour déterminer l’évolution de la résistance aux antibiotiques et la distribution des génotypes épidémiques dans les hôpitaux aigus.
Caractérisation de souches atypiques de staphylocoques
En 2004, le laboratoire a caractérisé 200 souches atypiques de staphylocoques provenant de 40 hôpitaux dans le cadre de
demandes ponctuelles : identification phénotypique et/ou génotypique (n = 43) et analyse de résistance (oxacilline et/ou vancomycine) (n = 192). Sept souches de MRSA de sensibilité diminuée aux glycopeptides (GISA) détectées dans un même hôpital ont été confirmées comme 6 souches hétéro- GISA (CMI à la vancomycine= 2 à 3 µg/ml et CMI à la téicoplanine= 4 à 8
µg/ml) et une souche homo- GISA (CMI à la vancomycine= 4 µg/ml et CMI à la téicoplanine= 32 µg/ml). Ces souches appartenaient toutes au clone épidémique PFGE groupe A résistant à la gentamicine.
Le niveau de résistance à la mupirocine a été analysé par détermination de la CMI (E-test) et PCR pour la détection du gène
mupA pour 48 souches provenant de 8 hôpitaux, parmi lesquelles 30 (62%) montraient un haut niveau de résistance à la mupirocine (> 524 mg/l) et la présence du gène mupA.
Recherche de toxines
En 2004, 52 souches de S. aureus, 42 MRSA et 10 MSSA, provenant de 17 hôpitaux ont été envoyées au laboratoire de référence pour la recherche de toxine. Les gènes lukS-lukF PV codant pour la leucocidine de Panton-Valentine ont été retrouvés
chez 14 (27%) souches de MRSA. La plupart de ces souches présentait un profil de résistance typique (sensibilité à la ciprofloxacine, résistance à l’acide fusidique, la kanamycine et la tétracycline) et appartenait au clone épidémique européen ST80SCCmec IV responsable d’infection en France, Suisse, Pays-Bas, Allemagne, Danemark et Grèce. D’autres souches appartenaient à 3 autres clones de MRSA. Ces souches ont été isolées chez des patients jeunes sans antécédents médicaux particuliers. Elles sont essentiellement associées à des infections cutanées de type furoncles, abcès, cellulites. Les autres toxines,
TSST-1, exfoliatine A, exfoliatine B ont été retrouvées dans 6, 2 et 2 souches, respectivement.
Typage pour enquête d’épidémies locales
Le typage moléculaire (PFGE) de souches de S. aureus dans le cadre d’enquêtes épidémiologiques locales ou de la surveillance locale des MRSA a été réalisé pour 286 souches provenant de 14 hôpitaux. L’analyse des 258 souches de MRSA a
montré que le génotype épidémique majeur B2 est retrouvé dans 26% des souches isolées c’est-à-dire dans 71% des hôpitaux. Ce génotype connu depuis 1992 était retrouvé dans 85% des hôpitaux lors de la surveillance nationale menée en 2003.
Le génotype A20, retrouvé dans 49% des hôpitaux participant à cette même étude de surveillance est présent dans seulement
18% des souches récoltées dans 4 (29%) hôpitaux en 2004. Le génotype épidémique G10 est retrouvé dans 9% des souches
de MRSA provenant de 5 hôpitaux (36%). Le génotype épidémique D8 est quant à lui retrouvé dans 20% des souches analysées en 2004 dont 94% isolées dans un même hôpital. Malheureusement, les données épidémiologiques relatives à ces épidémies ou enquêtes locales sont rarement transmises au Laboratoire de Référence, ce qui rend difficile l’interprétation des
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résultats de typage. Le typage moléculaire a également permis d’infirmer une possible transmission de MSSA dans un service
de chirurgie (n=10 souches).
Programme EARSS de surveillance de la résistance des S. aureus isolés d’hémoculture
Depuis 2001, le protocole de surveillance a été modifié pour les participants belges. Les souches de MRSA sont envoyées
pour confirmation au laboratoire de référence alors que les souches de MSSA (methicillin susceptible S. aureus) font simplement l’objet d’une déclaration sur formulaire des données cliniques et bactériologiques.
En 2004, 1245 patients avec un premier épisode de bactériémie à S. aureus ont été enregistrés dans 49 hôpitaux. Parmi ces
patients, 408 cas de bactériémie à MRSA ont été confirmés, soit une proportion de 33.3% de MRSA. Cette proportion de
MRSA parmi les S. aureus isolés d’hémoculture de patients hospitalisés en Belgique est en progression depuis le lancement
du programme (23% en 1999, 21% en 2000, 24% en 2001, 28% en 2002, 29.5% en 2003). Les données pour tous les pays
participant au programme EARSS sont disponibles sur le site http://www.earss.rivm.nl/.
La détermination de la sensibilité des MRSA à la vancomycine a été réalisée sur milieu vancomycin screen agar (BBL). Aucune souche de MRSA de sensibilité diminuée à la vancomycine n’a été détectée en 2004 parmi les souches d’hémocultures.
Conclusions
Depuis 1999, les résultats du programme EARSS montrent une augmentation continue de la proportion (33.3%, en 2004) de
MRSA parmi les bactériémies à S. aureus chez les patients hospitalisés en Belgique. Elle se situe à un niveau intermédiaire
par rapport aux autres pays européens participant au programme EARSS.
Le génotypage montre que les MRSA responsables d’épidémies locales d’infections nosocomiales appartiennent principalement aux trois clones épidémiques majeurs B2, A20 et G10. Ces génotypes sont largement disséminés dans nos hôpitaux
depuis 2001.
Des cas groupés d’infection par MRSA de sensibilité diminuée aux glycopeptides ont été documentés dans un hôpital général.
Ces souches GISA appartenaient au clone MRSA PFGE groupe A résistant à la gentamicine.
Depuis 2002, nous assistons à l’émergence en Belgique de cas sporadiques d’infection cutanée par des souches communautaires de MRSA hyper-virulentes portant les gènes de lukS-lukF codant pour la leucocidine Panton-Valentine. Ces souches
appartiennent principalement au clone MRSA ST80-SCCmec IV récemment décrit en Europe et occasionnellement aux clones
ST30-SCCmec IV et ST8-SCCmec IV décrits aux USA.
Références
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Denis O, Magdalena J, Deplano A, Nonhoff C, Hendrickx E, Struelens MJ. Molecular epidemiology of resistance to macrolides
lincosamides-streptogramins in methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) causing bloodstream infections in patients admitted to Belgian hospitals. J Antimicrob Chemother 2002; 50(5):755-757.
Denis O, Deplano A, De Ryck R, Nonhoff C, Struelens MJ. Emergence and spread of gentamicin-susceptible strains of methicillin-resistant Staphylococcus aureus in Belgian hospitals. Microb Drug Resist 2003; 9(1):61-71.
.
Denis O, Deplano A,Nonhoff C, De Ryck R, de Mendonça R, Rottiers S, Vanhoof R, Struelens M.J. National surveillance of
methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in Belgian hospitals indicates rapid diversification of epidemic clones.
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