Transcript 成高雅等PPT - 上海中医药大学精品课程网

国内原发性肝癌的中医药动物实验采用
的组方和方法
小组成员：成高雅
司嘉琪
葛程
顾婷婷
奚善君
金文玉
许贇姣
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教师提出的问题
国内原发性肝癌的中医药动物实验采用了哪些组方或方
法，与临床报道异同，为什么？
我们发现的问题
我们的分工
•
成高雅 葛程 金文玉—
国内原发性肝癌的中医药动物实验采用了的组方或方法
• 顾婷婷 司嘉琪 奚善君 许贇姣—
这些实验中采用的方法与临床报道异同
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文献检索所采用的具体方法
•我们采用以下关键词在CNKI以及VIP等数据库进行了大
量文献检索
原发性肝癌、辨证论治、证候
大鼠、小鼠、证候动物模型、动物实验
•同时，我们还参阅了《中医内科学》等课本进行参照进
一步分析讨论
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 国内原发性肝癌的中医药动物实验采用
的组方和方法
祛邪：
中草药
扶正：
中成药
活血化瘀
健脾理气
清热解毒
消癥散结
清热解毒
活血化瘀
软坚散结
收敛固涩
健脾理气
补益气血
滋养肝阴
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中草药
1. 祛邪：
清热解毒：
半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草等
活血化瘀：
桃仁、丹参、赤芍、八月札、茵陈、郁金、
柴胡、莪术等
软坚散结：
鳖甲、牡蛎、山慈菇等
收敛固涩:
椿皮、乌梅、山茱萸等
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2. 扶正：
健脾理气：
黄芪、白芍、白术、薏苡仁、神曲、法夏、
云苓等；
补益气血：
黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、
熟地、白芍、川芎、当归
滋养肝阴：
生地、鳖甲、牡蛎、女贞子
6
2.扶正：
常用方剂：健脾理气方
（党参、白术、茯苓、八月札、甘草等）；
补脾益气方（四君子汤加黄芪）；
十全大补汤
（黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、
熟地、白芍、川芎、当归）；
扶正抑瘤方
（黄芪、灵芝、女贞子、山药）；
养阴柔肝方
（由北沙参、麦冬、鳖甲、当归等18味中药组成）；
百合地黄汤
（百合、地黄） 。
7
3. 扶正祛邪合用：
温阳散结：
人参、附子、黄芪、白术、川椒、
莪术、青皮、白芍、甘草等
解毒消癥饮:
白花蛇舌草、山慈姑、夏枯草、苦参
复肝春六号:
黄芪、女贞子、牡蛎、鳖甲、莪术、
白花蛇舌草、薏苡仁、半枝莲、桔梗等
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3. 扶正祛邪合用：
扶正化瘀319方:
由虫草菌丝、桃仁、丹参等6味中药组成
扶正抗癌方:
西洋参、白术、鳌甲、穿山甲、急性子、
石见穿、龙葵、漏芦、核桃树枝等
养阴解毒方:
北沙参、虫草菌丝、七叶一枝花和莪术等
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中成药
活血化瘀：
大黄螫虫丸、鳖甲煎丸
健脾理气：
益气免疫冲剂（四君子汤加减）
清热解毒，消癥散结：
清肝消癥丹（成分：蟾蜍、蟑螂等）
解毒散结、活血化瘀：
鳖甲煎丸和大黄蛰虫丸联合蟾蜍制剂
疏肝理气，化瘀通络，健脾和胃： 肝康宁
（成分：螺旋藻粉、菊花、陈皮、山楂）
解毒，消肿，止痛： 华蟾素（成分：干蟾皮提取物 ）
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 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例
• 不同治则对DEN诱发大鼠肝癌作用的比较研究
动物造模及分组：Wistar大鼠，雄性，体重100—120g，自由饮用
60 — 80ppm DEN水溶液，直到24周末实验结束。将70只大鼠
随机分为7组，每组10只，分别为正常组、模型组、西药组、
全方组、清热组、活血组、健脾组。西药组加用西药FT- 207；
全方组加用清热解毒、活血健脾理气中药，全方由清热、活血、
健脾方合并而成；清热组用清热解毒中药，清热方由半枝莲、
白花蛇舌草等组成；活血组用活血化癖中药，活血方由桃仁、
丹参等组成；健脾组用健脾理气中药，健脾方由黄芪、白术等
组成。
中药的制备与给药方法：中药水煎剂按2：3比例兑入乙醇，4°C
静置48h，过滤，浓缩至1ml含2g生药，4°C存放。FT- 207用
双蒸水溶解，4°C存放。各组药物均于下午19时加入饮水中
给药。剂量均为成人单位体重的10倍量。
• 不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的研究
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 肝癌动物模型
• 二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌：
取体重250g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。按性别
分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用
0.25轓水溶液灌胃，剂量为10mg/kg，每周一次，
其余5天用0.025轓水溶液放入水瓶中，任其自由饮
用。
共约4个月可诱发成肝癌。或单用0.005%掺入饮水中
口吸服8个月诱发肝癌。
• 4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌：
• 2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发大鼠肝癌：
• 亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌：
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 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例
• 大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究
药物制备：取大黄螫虫丸(上海雷允上药业有限公司提供，生产批
号:040501)置煎煮容器内，加适量的冷水浸泡1～2h，煮沸30
min，过滤。药渣加3～5倍量水继续煎煮，煮沸20 min，过滤。
合并两次滤液，于水浴上浓缩成相当于原生药材1g/mL的药液，
冷却装人灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。
实验方法
造模方法：无菌条件下取生长7～9 d传代接种的H22细胞株，将细
胞5x106接种于每只小鼠右侧腋窝皮下。
动物分组及给药方法：小鼠30只，10只作为正常组，其余均按上
法造模。小鼠接种肿瘤5d后，随机分成对照组和实验组，每组
10只，对照组予以生理盐水处理，实验组给予大黄蛰虫丸水煎
液1g/mL该剂量通过LD50确定，均灌胃0. 2 mL/只，连续给药15
d。
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 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例
• 清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H22 细胞的作用
及免疫学机制
选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药，并与补益
代表药黄芪进行比较
将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、
黄芪组和热休克处理对照组(热休克组) 。在活体肝癌
H22腹水细胞腹腔接种后当天，冬凌草组、半枝莲组和
黄芪组分别以30、15、15 g·k g-1·d-1的剂量灌胃给药，
连续12 d；热休克组小鼠以43℃热处理20m i n，每4天
1次，共 3次；模型组不予任何处理。12 d 后处死小
鼠．分别抽取腹水制片，光镜下观察细胞形态，并采
用免疫组化法检测腹水CD4+、CD8 +T细胞表达。
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 这些实验研究中存在的异同
 肝癌小鼠造模的不同
 给药方式的不同
• 抑癌扶正行气活血方(半枝莲、白花蛇舌草、桃仁、丹
参、黄芪、白术等),清热方(半枝莲、白花蛇舌草等)、
活血方(桃仁、丹参等)、健脾方(黄芪、白术等)。采用
标准的水煎醇沉工艺制备的中药及西药加工混合于喂
养大鼠的颗粒饲料中，作为一种治疗方式。
• 用清热解毒、活血化安和健脾益气方药治疗时，将中
药水煎剂提醉、过滤、浓缩后加入饮水中给药。
• 大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究中，水煎液
1g/mL该剂量通过LD50确定，均灌胃0. 2 mL/只，连续
给药15 d。用清热解毒、疏肝理气、活血化瘀治法组
方时，可以通过采用灌胃的给药方式。
• 肝康宁和华蟾素可用局部注射的给药途径。
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国内原发性肝癌的中医药动物实验研究的治法与临床异同
动物实验
同
①
②
③
④
⑤
⑥
异
①
②
③
临床试验
清热解毒：半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草
活血化瘀：大黄螫虫丸，莪术、三棱、郁金、赤芍、桃仁
健脾理气：以四君子汤为基础方，如益气免疫冲剂（四君子汤
加减），健脾理气方（党参、白术、茯苓、八月札、甘草等）
，补脾益气方（四君子汤加黄芪）
滋补肝阴肝血：生地、女贞子、鳖甲、当归
所用的经方：四君子汤、小柴胡汤、四君子汤加减
选用华蟾素注射液
滋阴凉血、清热润肺的百合
地黄汤
自拟方剂如扶正化瘀319方、
扶正抑瘤方等
收涩类中药
①
化湿
②
以毒攻毒
③
疏肝理气
④
滋补肝阴肝血
选用的方剂范围更大，使用的中
药更多更复杂
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 临床用药与实验研究药物的异同及其可能原因
• 临床上，治疗原发性肝癌以经方、名方偏多,出现
频次最多的前20种依次排列如下:
一贯煎、逍遥散、茵陈蒿汤、四君子汤、龙胆泻肝
汤、膈下逐瘀汤、柴胡疏肝散、补中益气汤、小柴
胡汤、香砂六君子汤、参苓白术散、茵陈五苓散、
六君子汤、血府逐瘀汤、知柏地黄汤。
• 而在已有实验中，我们确实可以看到对于四君子
汤、小柴胡汤等的实验研究，但是对于临床上的
常用方的研究并不全面。
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 临床用药与实验研究药物的异同及其可能原因
• 而我们所查找到的文献中，有相当数量的文献进行
动物实验研究的是一些上市成药如复肝春6号、木
回春片、自制中药复方等。
• 我们小组讨论认为可能与以下原因有关：
a) 新药的研发与推广需要
b) 研究的难易度（实验设计的难度、结果获取难易度、
成效的预期等因素）
c) 科研的一些其他软硬件问题（如经费、科研设施、
研究人员等）
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 在中医药动物实验研究中应注意的问题
• 中医动物实验研究应以中医理论为指导
• 中医动物实验研究应从中医临床出发
• 中医动物实验研究应突出中医治疗原则
• 中医动物模型不能照搬西医动物模型
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 中医药动物实验研究的发展趋势
随着现代医学的发展，实验研究越来越受到人们的重
视。经过近几十年的不懈努力，我国目前已建立中医
动物模型150余种，这仅仅是初步的探索，还有待于
进一步研究。
中医药只有通过大量实验研究，借用现代医学先进技
术和方法，才能使中医药逐渐发扬光大，逐步走向世
界，为人类健康事业做出更大贡献。
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Thank you
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