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胺类药物分析进展
－－－局部麻醉药
ppt 制作：严洁萍
指导老师：姚彤炜
局部麻醉药的构效关系：
O
Ａr
１.亲脂性部分：
芳烃和杂环烃
C
X
(C) x
２.３.中间连接部分
N
４.亲水性部分：
仲胺和叔胺
X=O /S
芳酸酯类
O
Ａr
ＮH
C
(C) x
酰胺类
电子等排体Ｓ代替
Ｏ，酯溶性增大，
显效快，毒性大，
硫卡因已停用．
N
１.芳酸酯类
盐酸普鲁卡因
盐酸丁卡因
２.酰胺类
盐酸利多卡因
盐酸布比卡因
盐酸普鲁卡因
盐酸利多卡因
该类药物的鉴别分析
Part 1
主要化学性质
Part 2.1
鉴别
Part 2.3
含量测定
Part 2.2
特殊杂质检查
Part 1 主要化学性质
芳酸酯类
易水解，产物为对氨基苯甲酸（ＰＡＢＡ）
Ｈ２Ｎ
芳伯氨基：重氮化－偶合反
Ｓchiff碱反应；易氧化
弱碱性
Part 1
酰胺类
主要化学性质
酰胺上的氮原子可于水溶液中与
铜离子或钴离子形成有色配合物
弱碱性
水解后显芳伯氨基特性：
重氮化－偶合反
Ｓchiff碱反应；
水解产物易酯化
Part 2.1 鉴别
１.重氮化－偶合反应
２.与重金属离子反应
３.水解产物反应
４.制备衍生物测熔点
５.紫外特征吸收光谱
６.红外吸收光谱
１.重氮化－偶合反应
NaNO2
NaOH
注
橙黄－猩红色沉淀
２.与重金属离子反应（铜
钴等）
条件：具芳酰胺
结果：生成有色配合物
举例：盐酸利多卡因在碳酸钠试液中，与硫酸铜
反应生成蓝紫色配位化合物，转入氯仿显黄色．
２
４.制备衍生物测熔点
１）三硝基苯酚衍生物
２）硫氰酸盐衍生物
反应得沉淀
洗涤
干燥
Step 1
Step 2
Step 3
测熔点
Step 4
Part
2.2
特殊杂质检查
例：盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的
检查
问：为什么要检查对氨基苯甲酸？
答：该注射液在制备过程中，发生水解反应，
产生对氨基苯甲酸．对氨基苯甲酸进一步脱
羧转化为苯胺，苯胺可被氧化成有色物质，
从而使注射液变黄．
中国药典2005版规定 对氨基苯甲酸
限度不得超过1.2％
采用硅胶H-CMC薄层色谱法检查时
对氨基苯甲酸最低检测量为0.01ug
Part 2.3 含量测定
１.亚硝酸钠滴定法
２.非水溶液滴定法
３.分光光度法
原理：芳伯氨基于酸
性溶液中与亚硝酸钠
定量反应，用永停法
或外指示法．
４.高效液相法
５.提内药物分析
叔胺氮具弱碱性，
非水溶液滴定，
一般可用冰醋酸
做溶剂，高氯酸
做滴定剂
１.亚硝酸钠滴定法
Ar-NHCOR+H2O
Ar--NH2+RCOOH
Ar-NH2+NaNO2+ 2HCl
Ar-N2+ Cl-+ NaCl+2H2O
测定的主要条件：１）加入适量溴化钾加快反应速度
２）加入过量盐酸
３）室温（１０－３０）
４）滴定管尖端插入液面下滴定
指示终点的方法：１）永停滴定法（中国药典）
２）外指示剂法
next
反应历程：
NO+ ClAr-NH2
Ar-NH-NO
慢
快
Ar-N=N-OH
HNO3+HBr
NOBr+H2O
K1
HNO3+HCl
NOCl+H2O
K2
快
Ar-N2+Cl-
K1 >> K2
(1)NO+ >> (2)NO+
反应加速
back
盐酸在亚硝酸钠滴定法中的作用
１
２
３
注意
加快反应速度－－－胺类药物
的盐酸盐较其硫酸盐溶解度大
.
重氮盐在酸性溶液中稳定
防止偶氮氨基化合物的生成
芳胺类药物：盐酸＝１：２.５～６
ＢＡＣＫ
温度过低，重氮化反应速度慢
温度过高，亚硝酸逸失，
重氮化盐分解
一般温度每升高10．C，
反应速度加快2.5倍；
但是其分解速度
相应加速２倍，
滴定一般在低温下进行
实验室可在室温下进行
back
１.重氮化反应为分子反应，反应速度
比较慢，滴定不宜过快．滴定时将滴定管
尖端插入2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴
定液在搅拌条件下迅速加入，使其尽快反
应，以避免亚硝酸挥发和分解．
２.然后将滴定管尖端提出液面，用少
量水淋洗，在缓缓滴定．
３.近终点时，在最后一滴加入后，搅
拌1min~5min，在确定重点是否真正到
达．(未反应的芳伯氨基药物浓度极稀）
back
盐酸普鲁卡因含量测定的各种光谱方法：
１.直接紫外分光光度法
２.正交函数分光光度法
３.一阶导数分光光度法
４.吸收度线性组合分光光度法
５.吸收度比值法
６.倍增差示双波长分光光度法
７.等吸收双波长分光光度法
next
６ 倍增差示双波长分光光度法
以磷酸盐缓冲液(pH6.5)为溶剂，选
盐酸普鲁卡因的最大吸收波长291nm和
PABA的最大吸收波长265nm为测定波长，
在该两波长处两组分有最大吸收灵敏度，
能得到最大的倍增差示值，根据比尔定律
和吸收度加和性原理，可同时测定盐酸普
鲁卡因和PABA的含量
原理：比尔定律 Ａ＝aCL
其中：Ａ吸光度
吸收度加和性 Ａ＝a1 C1L+a2C2L
Ｃ为待测液浓度，Ｌ为比色池厚度(1cm)
a1 a2分别表示盐酸普鲁卡因和ＰＡＢＡ的吸光系数；
Ｃ１Ｃ２为盐酸普鲁卡因和ＰＡＢＡ的浓度
在291nm和265nm处总的吸光度为：
Ａ(291)＝a 1(291) C1L+a2(291)C2L
Ａ(265)＝a1(265)C1L+a2(265)C2L
(1)
引入配平系数m, n：
m=A 1(291) /A 1(265) =a1(291/a 1(265)
n=A 2(291) /A 2(265) =a 2(291) / a 2(265)
(2)
将（２）代入（１）：
n A291-A265=n a 1(291) –a 1(265) =k1C1
m A291-A265=m a 2(291) –a 2(265) =k2C2
(3)
K1,k2为工作曲线斜率（标准曲线斜率）
k1 k2
标准曲线斜率即得
a1(291) a1(265) a2(291) a 2(265)
标准曲线中可以得到
m n
通过吸收系数比得到配平系数
C1 C2
（３）由配平系数
ｍｎ
得到浓度
简单步骤：
back
１.吸收系数的测定：配制不同浓度的盐酸普鲁卡因标准溶液
(4,6,8,l0,12,14ug／ml)和PABA标准溶液(3,4,5,6,7,8ug／
ml)，在波长291nm,265nm下分别测定吸收度，计算两个波长
下的吸收系数
２.配平系数及工作曲线斜率的确定：由吸收度可按（３）式
计算配平系数m和n，并按相应浓度计算吸收系数
３.回收率试验：按不同比例配一系数盐酸普鲁卡因和PABA混
台溶液， 在选定的波长处测定吸收度，按下式计算盐酸昔鲁
卡因和PABA 的浓度。
４.样品测定：精密量取盐酸普鲁卡因注射液适量，用缓冲液
稀释成适当浓度， 测定供试品中盐酸普鲁卡因和ＰＡＢＡ的
浓度．
７等吸收双波长分光光度法.
△A
盐酸普鲁卡因的质量浓度在某线形范围内
与△A成很好的线性关系。
简单步骤
1
吸收光谱的测定
2
标准曲线测定
3
样品测定及对照实验
4
精密度和回收率实验
back
吸收度
线性组合法
一阶
导数法
正交函数法
吸收度
比值法
直接法
1 直接紫外分光光度法
比亚硝酸钠滴定法简便，但水解产物
PABA在波长290 mn处也有紫外吸收，对测定
造成干扰，使结果偏高，因此用直接法不能
准确地反映出盐酸普鲁卡因的实际含量．
2 正交函数分光光度法
从盐酸普鲁卡因和PABA的吸收曲
线可看出，在265nm,310nm处，盐酸
普鲁卡因的吸收曲线为二次曲线，而
PABA的吸收曲线近乎于直线，因而可
用正交函数法消除PABA的干扰。
结果准确，可靠．
3 一阶导数光谱法
导数光谱能有效提高重叠谱带分辨
力．从盐酸普鲁卡因和PABA的一阶导数光
谱可以看出．在26５nm 处PABA的振幅是零，
因而盐酸普鲁卡因的振幅DⅫ与PABA无关。
简便，准确，但若PABA含量较少，则
振幅小，故应用本法误差较大，乃不足之
处．
4 吸收度线性组合分光光度法
选择291 nm、265 nm及介于两个吸
收峰间盐酸普鲁卡因和PABA吸收度值均
较大的275 nm为测定波长。
5 吸收度比值法
盐酸普鲁卡因的最大吸收波长为
290nm．在258 nm处两者的吸收度相等，
因此可利用吸收度比值法测定盐酸普鲁
卡因注射液的含量
各紫外方法的比较表
方法
溶剂
波长(nm)
回收率
备注
290
291
100.18
99.83
PABA 有干扰
直接法
水
磷酸盐缓冲
液PH6.9
100.43
PABA大时也
有效
260
307.9
100.3
100.16
PABA 小时误
差大
274 285 290
265 275 291
99.66
99.72
PABA大时可
消除干扰
290 258
100.4
正交函数法
水
一阶导数法
水
水
吸收度线性
水
组合法
磷酸盐缓冲
液PH6.9
吸收度比值
法
水
268.5
284.5
300.5
276.5
292.5
308.5
个人
小小心得
1
2
3
仪器设备的
发展把药物
分析推向一
种半自动的
状态
数学的发展
推动分析仪
器的发展
期待药物分
析与数学更
好地结合
参考文献：
1. 中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国药典(二
部)．北京:化学工业出版社，2005：580-581
2. 刘文英．药物分析第５版．北京：人民卫生出版社，2006:139154
3. 齐艳,许有威，韩旭．不同紫外方法对盐酸普鲁卡因注射液含量
测定的研究进展．大连医科大学学报．2000,22(2):147-149
4. 孙金平,季瑛．倍增差示双波长分光光度法测定盐酸普鲁卡因注
射液的含量．现代应用药学,1991,9(5):231-232
5. 林涛,陈洁,杨青平,詹先成.等吸收双波长分光光度法测定盐酸普
鲁卡因注射液的含量.四川大学学报(医学版) ,2005;36(4):578579
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