Transcript 降压物质试验

质量检验的基本程序与方法
朱伊娜 药学1班
 包括以下项目：
来源与种类、性状、鉴别、氨基酸组分分
析、肽图、糖含量、纯度、干燥失重或水
分、炽灼残渣、生物活性、热原试验和含
量分析等。
主要介绍如下：
 鉴别试验
需用标准品或对照品在同一条
件下进行对照试验
 杂质检查
 安全性检查
 含量（效价）测定
 理化鉴别法
1、化学鉴别法
呈色反应、沉淀反应
2、紫外分光光度法 共轭系统
3、高效液相色谱法 保留时间和肽图谱
 生化鉴别法
1、酶法
2、电泳法
3、样品脱盐后用等电点聚焦法测定
 生物鉴别法
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举例
 溶菌酶的鉴别采用呈色法，溶菌酶分子中的四个肽
键上的氮原子能与酮离子(Cu2+)络合，生成有颜色
的配位化合物，肽键越多，产生的颜色越深。
 胃蛋白酶是具有高效、专一催化活性的特殊蛋白质，
易受酸、碱、重金属或有机溶剂的作用，破坏蛋白
质肽链的空间结构，引起蛋白质变性，生成不溶性
沉淀。
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举例
 三磷酸腺苷二钠的分子结构中具有共轭双键，
可吸收紫外光产生特征吸收峰。
本品的0.01mol/L盐酸水溶液(20ug/ml)在
257nm的波长外有最大吸收。A250nm／A260nm
的比值应为0.17～0.27。
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举例
重组人生长激素：
1. 供试品主峰的保留时间应与相应的对照品
的保留时间一致;
2. 肽图谱供试品与对照品一致。
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 尿激酶能特异性激活牛纤维蛋白溶酶原而
具有相同作用的链激酶不能，以此加以区
别，并用直接观察溶解纤维蛋白作用的气
泡上升法作为判断指标。
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 肝素的糖凝胶电泳法鉴别，肝素是由D－硫
酸氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸分子间组成的酸
性粘多糖，其水溶液带强负电荷，于琼脂凝
胶板上，在电场作用下，向正极方向移动，
与肝素标准品进行对照，其移动位置应相应
一致。
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 一般杂质检查：
氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、
重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜
色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。
 特殊杂质检查：
1、原料药的纯度分析
（1）多糖类
（2）酶类药物
2、生产过程中杂质的检查
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 热原检查法和细菌内毒素检查法
 异常毒性试验 异性蛋白
 过敏试验
豚鼠
 降压物质试验
 无菌试验
 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
 致突变试验
 生殖毒性试验
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异常毒性试验
急性毒性反应
限度试验
实验动物：小鼠
反应的判断以试验动物死亡与否为终点。
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 导致血压降低的杂质：
组胺、类组胺或其它导致血压降低的物质
 来源：
正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形
成的组胺、酪胺等胺类物质。
 实验动物：猫（或狗）血压法
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基因工程
 杂质：残留DNA、宿主细胞蛋白质、内毒素、蛋白
质突变体、蛋白质裂解物等。
 污染物：微生物、热原、病毒。
 检查项目：
外源性DNA、宿主细胞蛋白质、其它有关杂质和细
菌内毒素
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致突变试验
 微生物回复突变试验
 哺乳动物培养细胞染色体畸变试验
 啮齿动物微核试验
 微生物电极法的致突变试验
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生殖毒性试验
 一般生殖毒性试验
 致畸敏感期毒性试验
 围生期毒性试验
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含量（效价）测定
 含量表示方法：
用百分含量表示，适用于结构明确的小分子
药物或经水解后变成小分子的药物。
用生物效价或酶活力单位表示，适用于酶类
和蛋白质类等药物的测定。
含量测定
 HPLC法
纯度要达95%以上
凡有紫外吸收的物质均能在图谱上显示出来。
 十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳法
（SDS-PAGE法）
表明产品中的蛋白质纯度。
效价测定
采用国际或国家参考品，以体内或体外法
（细胞法）测定其生物学活性，并标明其活
性单位。
一般用免疫学方法测定的效价不能代替生物
学效价，只能作为中间品的质量控制。
同时，应测定蛋白质含量，计算出特异比活
性，活性以单位数/毫克蛋白（IU /mg)表示。
谢谢！
HPLC胰肽图谱法可用于鉴别
重组与天然蛋白质结构的同一性，比较各批重
组蛋白质产物一级结构的一致性，监控由于蛋
白水解、脱氨和氨基酸替代等原因而产生的重
组蛋白质分子结构的微小改变。此法高度专一
，具分辨率好、检测灵敏度高等特点。
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