Transcript 13第十三章生化药物分析

第13章 生物药物分析概论
中国药科大学药物分析教研室
本章主要内容
生物药物种类
与特点
生物药物质量
检验的基本程
序与方法
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生物药物理化
测定法：HPLC
法、酶法、电
泳法
一、概述
生化药物
生物制品
（生物技术药物）
生物药物（
biopharmaceu
ticals）：利用
生物体、生物
组织和器官制
得的天然活性
物质及其类似
物
分类没有严
格的界限
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生化药物biochemical drugs
动植物及微生物提取、分离的天然生物活
性物质及半合成得到生命基本物质及其衍
生物等
人纤维蛋白原
氨基酸、Pr类
凝血酶、胰蛋白酶
酶、辅酶类
肝素、玻璃酸
多糖类
脂类
核酸类
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生物制品biological products
应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工
程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各
种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品
菌苗、疫苗、类毒素
免疫血清
其他（血液制品、组织制品等）
自动免疫制品
诊断制品
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基因工程药物 biotechnology drugs
利用重组DNA等生
分离纯化
物技术生产的药物
受体细胞表达该Pr
将该基因导入受体细胞
分离或合成控制该Pr合成的基因
发现并确定有治疗作用的Pr
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重组胰岛素原的合成
胰岛素原
胰岛素原基因
mRNA
反转录酶
(A)n
胰脏
胰岛素原
mRNA
与质
粒连
接
cDNA
感染
E.col
i
重组质粒
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转化细菌
基因工程药物主要类别
蛋白质多肽类：
人生长激素释放抑制因子
激素类及神经递质类 （Human Somatotin）
细胞因子类
干扰素（Human Interferons）
酶及凝血因子类
链激酶（Streptokinase）
核酸类：
反义寡核苷酸 等
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5. 生化药物和基因工程药物特点
1）共同特点：活性强，毒副作用小
2）分子量大，结构确证难
3）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、
中间体、产品
4）生物活性检查
5）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、
外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等
6）效价（含量）测定
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二、检验的程序和方法
收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》
鉴别
杂质
检查
安全性
检查
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含量（效价）
测定
反应序列信息
1.鉴别
1）理化鉴别法：UV、肽图等
RP-HPLC法分析重
组人胰高血糖素类
多肽－1（7－36）
肽图谱
标准品
《药物分析杂志》
2005，25(1)24-26
样
品
rhGLP-1(7-36)由30
个氨基酸组成，结
构中含2Lys、1Arg、
1Asp、3Glu
胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解
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专属性强，应用广泛
2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等
Marker
免疫双扩散法
3）生物鉴别法：动物试验等
Sample
116.0k
66.2k
45.0k
35.0k
25.0k
18.4k
14.4k
SDS-PAGE
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2. 杂质检查
1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等
2）特殊杂质：有关物质等
高效凝胶过滤色谱法(High Performance
Gel Filter ，HPGFC）、RP-HPLC
CH2
H2C
HO
HO
O
O
O
HO
O
CH2
HCOH
CH2
OH
O
HO
H2C O
OH
O
O
CH2
HCOH
CH2
O
O
O
O
HO
CH2
HO
O
OH
O
CH2
HCOH
O
O
HO
OH
OH
HO
O
CH2
O
CH2
HCOH
CH2
HO
O
HO
O
O
H2C
HO
CH2
HO
HO
O
O
CH2
HCOH
CH2
O
OH
CH2
O
HO
O
OH
O
O
CH2
O
CH2
OH
O
OH
OH
CH2
O
H2C
O
CH2
HCOH
CH2
O
HO
O
OH
O
CH2 OH
HCOH
CH2
O
O
HO
O
H2C
HO
O
O
O
CH2
HCOH
CH2
O
O
HO
OH
O
CH2
O
O
O
CH3
OH
CH2
OH
H2C
OH
CH2
O
O
HO
O
H2C O
O
O
O
H2C
O
O
O
O
OH
O
CH2
HCOH
CH2
O
O
OH
O
CH2
CH2
O
萄聚糖凝胶
立体网状结构图
HO
OH
O
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标准蛋白色谱图
1
6
2
4 5
3
0
4
8
12
时间(min)
1.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸酐酶 5.抑蛋白
酶肽 6.酪氨酸
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重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体
（rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究
《药物分析杂志》2005，25（3）253-257
Synmetry 300 C18柱（3.9×150mm）
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3. 安全性检查
1）热原检查
家兔法、鲎试剂法
2）降压物质检查
3）过敏试验
4）异常毒性试验
豚鼠、大鼠存活试验
5）无菌试验
6）宿主细胞蛋白残留、DNA残留
ELISA法
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4. 含量（效价）测定
1）理化分析法：
重量法、滴定法、 电化学法、光谱法
色谱法（HPLC法）
例：蛋白质含量测定（ChP2005三部）
凯氏定氮法
Lowry法
双缩脲法
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2）生化分析法
 酶法：
酶活力测定法
以酶为分析对象进行分析
酶分析法
以酶为分析工具或分析试剂
的分析方法
免疫分析法
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3）生物检定法
药物对生物体或离体器官所起的生物活性
测定效价时采用参考品，体内、体
外方法测定活性，计算效价IU
同时测定蛋白含量，计算特异比
（比活性，IU/mg）
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例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程
本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基因重组质粒，传染
大肠杆菌，使之高效表达人α1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于
治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。
主要包括以下内容：
1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备
5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤
7 半成品检定
8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期
12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书
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半成品和成品的检验项目包括：
鉴别：
分子量测定
肽图测定
等电聚集
紫外光谱扫描
外观
检查：
纯度：
1电泳纯度
2高效液相色谱纯度
pH值
水分
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安全性检查：
残余外源性DNA含量
残余IgG含量
残余工程菌蛋白含量
抗生素活性
含量：
效价测定：细胞病变
抑制法
蛋白含量
比活性
无菌试验
热原质试验
异常毒性
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