Transcript 分析方法验证的可接受标准(2)

含量及有关物质
分析方法验证的可接受标准
文章来源：药审中心 审评二部
黄晓龙
本文介绍了在对含量及有关物质测定所用的
分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接
受标准，以利于判断该分析方法的可行性。
内容包括：准确度、线性、精密度、专属性、
检测限、定量限、耐用性和系统适应性 。
1.准确度
含量：
 该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般
要求分别配制浓度为80％、100％和120％的供
试品溶液各三份，分别测定其含量，将实测值
与理论值比较，计算回收率。
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率均
应在98.0%-102.0%之间，9个回收率数据的相
对标准差（RSD）应不大于2.0%。
准确度

有关物质：
验证时一般要求根据有关物质的定量限与质
量标准中该杂质的限度分别配制三个浓度的供
试品溶液各三份（例如某杂质的限度为0.2%，
则可分别配制该杂质浓度为0.1％、0.2％和0.3
％的杂质溶液），分别测定其含量，将实测值
与理论值比较，计算回收率，并计算9个回收
率数据的RSD。
准确度
可接受的标准为：各浓度下的平均回收率
均应在80%-120%之间，如杂质的浓度为定量
限，则该浓度下的平均回收率可放宽至70%130%，相对标准差应不大于10%。
2.线性

含量：
线性一般通过线性回归方程的形式来表示。
具体的验证方法为：在80％至120％的浓度范
围内配制6份浓度不同的供试液，分别测定其
主峰的面积，计算相应的含量。以含量为横坐
标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性
回归分析。
线性

可接受的标准为：回归线的相关系数（R）不
得小于0.998，Y轴截距应在100％响应值的2
％以内，响应因子的相对标准差应不大于
2.0%。
线性

有关物质：
在定量限至一定的浓度范围内配制6份浓
度不同的供试液，分别测定该杂质峰的面积，
计算相应的含量。以含量为横坐标（X），峰
面积为纵坐标（Y），进行线性回归分析。
可接受的标准为：相关系数（R）不得小
于0.990，Y轴截距应在100％响应值的25％以
内，响应因子的相对标准差应不大于10%。
3.精密度
含量：
1）重复性
配制6份相同浓度的供试品溶液，由一个分析
人员在尽可能相同的条件下进行测试，所得6份供
试液含量的相对标准差应不大于2.0%。
2）中间精密度
配制6份相同浓度的供试品溶液，分别由两个
分析人员使用不同的仪器与试剂进行测试，所得
12个含量数据的相对标准差应不大于2.0%。
精密度

有关物质：
1）重复性
配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供
试品溶液，由一个分析人员在尽可能相同的条件
下进行测试，所得6份供试液含量的相对标准差应
不大于15%。
2）中间精密度
配制6份杂质浓度（一般为0.1%）相同的供
试品溶液，分别由两个分析人员使用不同的仪器
与试剂进行测试，所得12个含量数据的相对标准
差应不大于20%。
4.专属性


含量：
可接受的标准为：空白对照应无干扰，主
成分与各有关物质应能完全分离，分离度不得
小于2.0。以二极管阵列检测器进行纯度分析
时，主峰的纯度因子应大于980。
有关物质：
可接受的标准为：空白对照应无干扰，该
杂质峰与其它峰应能完全分离，分离度不得小
于2.0。
5.检测限

含量：
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3 。

有关物质：
杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于3。
6.定量限


含量：
主峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。
另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份
溶液主峰的保留时间的相对标准差应不大于2.0%。
有关物质：
杂质峰与噪音峰信号的强度比应不得小于10。
另外，配制6份最低定量限浓度的溶液，所测6份
溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%，
峰面积的相对标准差应不大于5.0%。
7.耐用性

含量：
分别考察流动相比例变化±5％、流动相
pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、流速相对
值变化±20％时，仪器色谱行为的变化，每个
条件下各测试两次。可接受的标准为：主峰的
拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂质峰必须达
到基线分离；各条件下的含量数据（n=6）的
相对标准差应不大于2.0%。
耐用性

有关物质：
分别考察流动相比例变化±5％、流动相pH
值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化
±5nm、流速相对值变化±20％以及采用三根不
同批号的色谱柱进行测定时，仪器色谱行为的变
化，每个条件下各测试两次。可接受的标准为：
各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，杂质峰与其他
成分峰必须达到基线分离；各条件下的杂质含量
数据（n=6）的相对标准差应不大于2.0%，杂质
含量的绝对值在±0.1％以内。
8.系统适用性

含量：
配制6份相同浓度的供试品溶液进行分析，
主峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，主
峰保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另
外，主峰的拖尾因子不得大于2.0，主峰与杂
质峰必须达到基线分离，主峰的理论塔板数应
符合质量标准的规定。
系统适用性

有关物质：
配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析，
该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%，
保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外，
杂质峰的拖尾因子不得大于2.0，理论塔板数
应符合质量标准的规定。
9.溶液稳定性

有关物质：
按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品
溶液，平行测定两次主成分与杂质的含量，然后
将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室（4℃）
中，在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主
成分与杂质的含量。
可接受的标准为：主成分的含量变化的绝对
值应不大于2.0%，杂质含量的绝对值在±0.1％
以内，并不得出现新的大于报告限度的杂质。
化学药品溶出度方法研究
文章来源：审评二部 唐素芳
化学药品普通口服固体制剂
溶出度方法验证易忽视的几个问题
文章来源：审评四部审评八室 郑国钢
溶出度研究试验主要包括以下内容：
（1）溶出介质的选择
（2）溶出介质体积的选择
（3）溶出方法（转篮法与桨法）的选择
（4）转速的选择
（5）溶出度测定方法的验证
（6）溶出度均一性试验（批内）
（7）重现性试验（批间）
（1）溶出介质的选择
溶出介质通常采用水、0.1mol/L盐酸溶液、
缓冲液（pH值3～8为主）。对在上述溶出介
质中均不能完全溶解的难溶性药物，可加入适
量的表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（0.5%
以下）等，应有文献依据，并尽量选用低浓度，
必要时应做生物利用度考察。
（2）溶出介质体积的选择
溶出介质的体积需使药物符合漏槽条件，
大杯法（第一、二法）常用体积为500、900
和1000ml，小杯法（第三法）常用体积为
100～250ml。部分品种为满足在溶出量测定
时药物浓度的需要，可采用低于上述限度范围
的溶剂。
溶出介质体积的选择
漏槽条件即做溶出的最佳条件，是指药物
所处释放介质的浓度远小于其饱和浓度，生理
学解释为药物在体内被迅速吸收，制剂的体外
包括释放度等测定需要模仿体内生理条件的，
满足药物溶解-吸收的过程，漏槽条件起到了
修正作用，一般释放介质的体积为药物饱和溶
液所需介质体积的3～5倍。
（3）转篮法与桨法的选择
一般情况下，片剂多选择桨法，转篮法
多用于胶囊剂或漂浮的制剂，研究资料应进
行两种方法的对比试验，以确定最佳方法。
（4）转速的选择
目前，各国药典中收载的溶出度测定方法中
的转速，大部分在50～100转/分。转篮法以100
转/分为主；桨法以50转/分为主。一般认为桨法
50转/分相当于转篮法100转/分。转速的设置与具
体品种有关，通常，药物制剂的溶出速度随着转
速的增加而增大。转速过快，可能会导致对不同
制剂溶出行为的区分能力差，所以不推荐选择过
高转速。转速的选择应以能区分不同处方和生产
工艺的产品为宜， 如确实需要选择高转速，应进
行充分的验证。
（5）溶出度测定方法的验证
方法学验证内容与含量测定基本相同。应
该注意的是，在方法学验证中，试验所用的溶
媒应为溶出介质，即应考查辅料、胶囊壳在溶
出介质中的干扰，药物在溶出介质中的线性、
回收率及稳定性等。
溶出度测定方法的验证
应该注意的问题：
1.
对于溶出度，范围规定为限度的±20％
（回收率高、中、低常设为50％、限度浓度、
100％）。
2.
测定干扰2%以下可忽略不计，2～5%可
考虑在限度上适当提高，超过5%以上测定方法
不可取，如是空胶囊产生的应进行囊壳的消除
试验。如空胶囊干扰大于标示量的25%，实验
无效，如干扰不大于标示量的2% ,可忽略不计。
溶出度测定方法的验证
3.滤膜吸附的验证
一般认为吸附量在2%以下时可忽略不计，
超过2%时应考虑选用其他滤过方法或更换适宜
的溶出介质。
（6）取样点和限度的确定
通过溶出度均一性试验（ 考察同一批样
品的溶出曲线）和重现性试验（ 考察至少3批
样品的溶出曲线），确定合理的溶出度测定取
样点和限度。为避免多次取样造成的误差，测
定溶出曲线时取样点不宜过多，通常为5～6个
点，小规格的制剂因采用100～250 ml溶出介
质，所以溶出曲线一般可选3～4个时间点。限
度应综合考虑溶出曲线拐点和一般性要求。
总结及个人观点：
在进行分析方法的验证时，首先还是要参
考中国药典和指导原则，文章中提到的试验方
法和可接受标准也是专家的一些经验总结，我
们在进行研究时应根据具体的项目分析参考。
2.
在耐用性试验时，文中要求每个条件下各
测试两次，且每次要平行测定6份样品？
1.
总结及个人观点
3.
在进行溶出度测定方法的选择时，仅考
虑不同条件下单点的溶出度是不合适的，应
结合溶出曲线的测定结果来确定。
个人建议：（1）桨法和篮法均考查50、
75和100rpm。（2）将溶出曲线测定放在溶
出度测定方法验证之前进行。
现场考核中的几个问题：
1. 资料中溶液配比80：20应改为比号80 : 20 。
2. 线性试验中含量或有关物质浓度的溶液应设
计在线性的中间点上。
3. 需对溶出介质体积的选择进行考察
4. 精密度试验做的不够全面
现场考核中的几个问题
5.
经咨询审评中心李超科长获知，湖南省
局审评科会对申报资料中的附图全部看一遍，
发现有问题的将不通过检查，近二个月以来已
有两家因为图谱有造假情况而未通过检查，且
要求问题企业就此事向省局做全面汇报。