Transcript BCA法测定蛋白质浓度

BCA法测定蛋白质浓度
七年制200603班吴垣辕
BCA ( bicinchoninic acid，二辛可酸 )
: 让我们来告诉你提纲吧！
一.实验目的
二.实验原理
四.实验步骤
三.实验器材与试剂
五.注意事项
一.【实验目的】

学习掌握BCA法测定蛋
白质浓度的基本原理。
■
二.【实验原理】

在碱性条件下蛋白质与二价铜离子Cu2+络
合，并将其还原成一价铜离子Cu1+。
Cu1+和BCA试剂反应, 形成稳定的紫蓝色复
合物。

反应所生成的复合物，在562 nm处有强烈
的光吸收，且吸光值和蛋白质浓度在广泛
范围内有良好的线性关系，可用于蛋白质
浓度的测定。
■
三.【实验器材与试剂】
1．器材
2．试剂
1．器材
（1）仪器：分光光度计；恒温水浴箱；枪式
移液管。
（2）玻璃仪器：试管13支，吸管2ml 1支、
O.1ml 3支。
2．试剂
（1）试剂A：1％BCA二钠盐
2％无水碳酸钠
0.16%酒石酸钠
0.4％氢氧化钠
0.95％碳酸氢钠
混合，调pH值至11.25。
（2）试剂B：40/L硫酸铜。
（3）BCA工作液：试剂A 100ml ＋ 试剂B
2ml，混合即成。市面有BCA法试剂盒销售。
（4）蛋白质标准液：用结晶牛血清白蛋白，
根据其纯度用生理盐水配制成1.5mg/ml的
蛋白质标准液。（纯度可经凯氏定氮法测定
蛋白质含量而确定）
（5）待测样品。
■
四.【实验步骤】
1. 配备样品
2.绘制标准曲线
3.计算待测血清蛋白质的含量
4.求待测血清的蛋白质浓度
1. 配备样品
取试管13支，编号（除空白管只做1管
外，其它各号测定管均重复做两管），
按表操作并记录：
标准管
管号
试剂(μl)
测定管
×2
空白管
1×2
2×2
3×2
4×2
5×2
蛋白质标准液
(1.5mg/ml)
—
20
40
60
80
100
—
双蒸水
100
80
60
40
20
—
—
待测样品
—
—
—
—
—
—
100
BCA工作液(ml)
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
混匀，37℃保温30min，比色测定
光吸收值
(λ=562nm)
2.绘制标准曲线
以蛋白质含量为横坐标，光吸收值为纵坐标
绘制标准曲线。
3.计算待测血清蛋白质的含量
用测定管平均光吸收值在标准曲线上
查出相应的蛋白质含量，计算求出该
待测血清蛋白质的含量(g/L)。
4.求待测血清的蛋白质浓度
从标准管中选择一管与测定管光吸收值
相接近者，按比色法计算公式计算求出
该待测血清的蛋白质浓度(g/L)。
■
五. 注意事项
1. BCA法测定蛋白质浓度的范围：
20μg/ml~200μg/ml;
2. 微量BCA测定范围： 0.5μg/ml ~10μg/ml。
■
大
谢
家
谢