Salmonella

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PRACTICA 2

“Detección de Salmonella en Alimentos

Azucena Anabel Alba Guadalupe Liliana

Salmonella

Salmonella

es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae         Bacilos gram negativos Anaerobios facultativos Flagelos perítricos No desarrollan cápsula ni esporas Bacterias móviles Producen sulfuro de hidrógeno (H 2 S) Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa No producen ureasa.

 Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.

MEDIOS A UTILIZAR:

 Agua Peptonada  Caldo Urea  Caldo Rappaport Vassiliadis  Agar BGA (Agar Verde Brillante)  Agar TSI (Agar Triple Azúcar Hierro)  Agar XLD (Agar Xilosa Lisina Desoxicolato)  Agar Citrato de Simmons  Agar LIA (Agar Lisina Descarboxilasa)

AGUA PEPTONADA

 Medio usado como diluyente y para enriquecimiento bacteriano a partir de alimentos y otros materiales de interés sanitario.

 Medio de enriquecimiento no selectivo, recomendado para ser utilizado en lugar de solución fisiológica para recuperar células de enterobacterias dañadas por procesos fisicoquímicos, a los que ha sido sometido el alimento.

 Compuesta por:   Peptona de carne Cloruro de Sodio

CALDO UREA

 Se utiliza para la valoración de la producción de ureasa por algunas enterobacterias. Este medio contiene glucosa, peptona, urea y rojo de fenol. Las bacterias que producen ureasa a partir de la urea dan lugar al carbonato de amonio y el indicador se vuelve rojo púrpura.

CALDO RAPPAPORT VASSILIADIS

 Es un medio líquido para el enriquecimiento selectivo de Salmonella a partir de carne vacuna y productos lácteos, heces y agua contaminada.

 Este medio se utiliza para el aislamiento de Salmonella diferente de Salmonella Typhi a partir de muestras alimentarias y fecales

AGAR BGA

 Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de

Salmonella

spp., excepto

S. typhi

y

S. paratyphi

, a partir de muestras clínicas, alimentos, y otros materiales de importancia sanitaria.

AGAR TSI

 El Agar-hierro-triple azúcar (TSI) es un medio de cultivo, es uno de los medios de cultivo más empleados para la diferenciación de enterobacterias según:     Fermenten o no glucosa.

Fermenten o no lactosa o sacarosa.

Produzcan o no ácido sulfhídrico.

Produzcan o no gas.

 Correspondientemente las reacciones sobre Agar TSI son:     Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificará el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecerá de color rojo.

Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidificará el medio en su superficie volviéndolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuará de color rojo.

Si produce ácido sulfhídrico (debido a la reducción de las sales de hierro), se presentará un ennegrecimiento del tubo. La producción de sulfhídrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentación de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa.

Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.

AGAR CITRATO DE SIMMONS

 El Agar Citrato de Simmons es un medio utilizado para la diferenciación de enterobacterias en base a su capacidad de utilizar el citrato. Este medio es recomendado para el estudio de enterobacterias a partir de muestras clínicas, de agua y alimentos.

 Este medio contiene citrato de sodio y fosfato de amonio como fuentes de carbono y de nitrógeno respectivamente y azul de bromotimol como indicador de pH. Sólo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte basificación del medio que será aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.

AGAR LIA

      La peptona de gelatina funciona como soporte de crecimiento, el extracto de levadura proporciona la fuente de vitaminas necesarias y la dextrosa el carbohidrato fermentable.

En este medio se observa la fermentación de glucosa, producción de ácido sulfhídrico, la descarboxilación u desaminación de la lisina.

Los microorganismos tienen enzima descarboxilasa, descarboxilan el aminoácido lisina a cadaverina (amina primaria, liberando CO2) , debido a la alcalinidad, el pH se modifica con los siguientes resultados: La prueba se considera POSITIVA si la coloración en el fondo se observa morada o violeta-púrpura.

NEGATIVA si la coloración en el fondo es amarilla y la superficie permanece del color del medio, ya que solo hay fermentación de glucosa.

La desaminación de la lisina a ácido cetocarbónico, este forma compuestos pardo-rojizos en el pico de flauta del medio con la sal de hierro y por la acción del oxigeno.

La formación del ácido sulfhídrico da una coloración negra debida al sulfuro de hierro producido.

PROCEDIMIENTO

 Se Divide en:  Preenriquecimiento  Enriquecimiento  Aislamiento  Identificación Bioquímica

PREENRIQUECIMIENTO

 Transferir asépticamente 25ml o 25gr de muestra a un matraz de 225ml de Agua Peptonada  Licuar si fuera necesario (muestras solidas) durante un minuto  Incubar a 35°C durante 24hrs.

ENRIQUECIMIENTO

 Transferir 0.1ml del cultivo anterior a un tubo de 9.9ml de caldo Rappaport Vassiliadis  Incubar 24hrs. A 42°C

AISLAMIENTO

 Sembrar por estría simple 2 placas de Agar XLD y BGA  Incubar 24hrs a 37°C

IDENTIFICACIÓN BIOQUIMICA

 Selecciona al menos dos colonias típicas sospechosas que se encuentren bien aisladas de cada placa  Transferir con un asa cada colonia seleccionada a la siguiente serie de tubos que contiene los siguientes medios:

 Agar TSI  Agar LIA  Agar Citrato de Simmons  Sembrar por picadura en el fondo y por estría en la superficie.

 Caldo Urea  Inocular el Caldo  Incubar los tubos de esta prueba a 35 C por 24hrs.  Comprobar los resultados de las pruebas bioquímicas con la tabla de resultados de los microorganismos enteropatogenos.

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