Transcript 疑难血型问题分析与血型研究新进展

疑难血型问题分析
与
血型研究新进展
江苏省血液中心 刘衍春
E-mial：[email protected]
025-85411563-6516
2014-06-27 常州
一 疑难血型问题分析
何为血型？
表型
多糖类
聚糖，如ABO、P1Pk、
Lewis 、H、I、GLOB
称组织血型抗原或糖抗原。存
在红细胞及中枢以外的组织和
体液中。可结合可游离于血浆
中。自然界有相似的物质。
发育晚。
基因型
多肽类
蛋白类
除左侧血型外的其它血型
称器官血型抗原。主要存在于
红细胞和组织细胞。糖蛋
白、脂蛋白。发育早。
何为疑难血型
（临床）血型工作中所需
各种血型抗体试剂
各种工具细胞
酶 / 化学试剂
各种仪器
各种检测方法 // 实验技术
工具细胞
标准细胞
筛选细胞
谱细胞
酶处理细胞
特定抗原细胞
用于反定型等
用于意外抗体的发现
用于抗体的鉴定
对冷抗体检出极敏感; 须设阴、
阳性对照试验; 增强Rh及Kidd
系统、抗-Lea 、抗-Leb 、抗P 、抗-H 等凝集反应, 对M 、
N、S、s 、Fya及Fyb、Lua 、
K、Kidd、Sutter 等抗原决定
簇有破坏作用，所以酶法必须
与其他方法合用。使用的蛋白
酶一般以能检出128~256 倍稀
释的抗-D 为酶活性的大致标准。
须冷冻保存。
酶与试剂的作用
试剂
抗原减弱或改变
蛋白水解酶 M, N, S, Fya, Fyb, Yta, Ch, Rg, Pr, Tn, g,
Mia/Vw, Cla, Jea, Nya, JMH,some Ge, Inb
DTT/AET
Yta, JMH, Kna, McCa, Yka, LWa, LWb, all
Kell, Lutheran, Dombrock, and Cromer
ZZAP
以上抗原
无花果酶、木瓜酶、胃蛋白酶破坏或减弱
M, N, S,Fya, Fyb,Yta, Ch, Rg抗原；
增强Rh, P, I, H和Lewis抗原。
酶处理的细胞可以增加抗JKa，
抑制抗JKb的反应
ZZAP ：DTT 和
蛋白酶的混合物
DTT：
二硫苏糖醇
AET ：溴化~2胺乙基
lisothiouronium
特定抗原细胞
如：标本有混合抗E，抗c不能排除时
设
计
抗
原
组
合
病人血清(抗E、抗c)Ps
细胞1
细胞2
CCDEE
ccDee
结果 结论
+
+
抗E
抗c
反应条件
改变细胞/抗体比例
反应温度
抗体最高可达5-10倍于细胞体积，
在37℃60’不时摇动，增强抗体反应。
但Liss、PEG介质不适用。低离子反
应需要一定的比例。
某些抗体在室温或以下有较好的特异性。
在冷的温度下自身对照是特别的重要，
因为不少血清含抗-I 或其他冷自身抗体。
增加反应时间
盐水和白蛋白介质需时要30-60’，
Liss、PEG不可延长，会减低凝集。
改变pH
抗原灭活
pH6.5使抗M反应增强；pH＜6.0 时，
Rh、Duffy、 Kidd 和 MNS 血型失去反应
DTT/AET， ZZAP
不变的原理多样的技术
试管法
低离子Liss强度实验
凝聚胺法
凝胶介质法
白蛋白介质法
微孔板法
抑制技术
盐水IgM、抗人球IgG等
Liss红细胞悬液当天使用为好，否则，可使Fya、
Fyb等发生变性，抗原性消失，并在上清液中出现
阻止抗-Fya 、抗-Fyb特异性的活性物质。
适用Rh系统，对Kell敏感性低于抗人球
有利于混合外观的发现
2%或30% 的牛血清白蛋白溶液
适合于大规模筛查
Lea,Leb,P1, Sda,
Chido and Rodgers 物质
如怀疑有抗P1
可加入P1物质
吸收与放散实验
热放散—IgM
甘氨酸放散--IgG
吸收实验
放散实验
热放散
冻融放散
乙醚放散
毛地黄放散
磷酸氯喹放散
冷甘氨酸放散
甘氨酸EDTA放散
吸收放散实验
甘氨酸放散
Ac、Bc、Oc：游离液
A’c、B’c、O’c：放散液
甘氨酸放散：应用液：红细胞=2:1；
热放散：生理盐水：红细胞=1:1。
凝集
☆ 血型抗原
血型系统
血型集合
901高频系列
血型系列
700低频系列
22个血型引起输血反应，12个血型引起HFDN---1
血型
HTR
(AHTR/DHTR)
HFDN
ABO
严重AHTR、DHTR
严重、中等
MNS
-M、-N，37℃罕见AHTR、DHTR；-S、s、-U及其他引起ATHR、DHTR
-S、-s、-U及其他引
起~，-M罕见
P1Pk / p
罕见引起37 ℃ AHTR、DHTR / p
Rh
严重AHTR、DHTR
Lutheran
-Lua、-Lub引起中等强度DHTR；抗Lu8
，AHTR
Kell
严重AHTR、DHTR
严重
Duffy
-Fya、-Fyb引起AHTR、DHTR；-Fy5引
起DHTR
-Fya、-Fyb引起
HFDN
Kidd
DHTR ;-Jka、-Jk3引起AHTR
不常见
Diego
-Dia引起DHTR，但少见；-Dib引起DHTR -Dia、-Dib、-Wra、
；-Wra引起HTR
-Wrb引起严重
Yt
-Yt引起少见的HTR
Dombrock
-Doa、-Dob引起AHTR、DHTR
严重
22个血型系统引起输血反应，12个血型引起HFDN---2
血型
HTR
(AHTR/DHTR)
HFDN
Colton
-Coa引起AHTR、DHTR，-Coa、 -Coa严重、-Co3中等
-Co3引起中等HTR
H
引起血管内HTR
Kx
-Kx、Km严重HTR
Gerbich
仅在男性发现抗体
3例-GE抗体
Indian
1例引起HTR
OK
罕见
JMH
1例报道HTR
I
i成人有抗I，引起I（+）RBC破坏
Globoside
血管内HTR
无，但有较高自发流产
Junior
HTR
有
Lan
HTR
有
Vel
-Vel引起HTR
有
RED CELL GENOTYPING AND BLOOD, 9 JULY 2009 VOLUME 114, NUMBER
2 PRETRANSFUSION TESTING 248-256
红色有意义，黄色偶尔，绿色少见
☆ 血型抗体
血型抗体的种类
血型Ig M
抗体长度大于350 A , 在盐水介质中能直接连接相应的红
细胞,使之发生肉眼可见的凝集反应， Ig M 抗体能引起严重
的血管内溶血性输血反应。
血型Ig G
抗体长度约为240 A，常经妊娠或输血等免疫产生，在盐
水介质中只能致敏红细胞, 但不能凝集相应的红细胞, 必须通
过其他介质, 如牛白蛋白、蛋白分解酶法、低离子强度试验及
抗球蛋白法等才能显示凝集。血管外溶血性输血反应
何为不规则抗体
指不符合A BO 血型系统的Landsteiner法则、
意外存在于血清中的血型抗体, 也就是抗-A、
抗-B 以外的血型抗体。但A BO 系中的亚型、
变异型抗-A , 某种抗-B 等也称为不规则抗体。
加藤俊明 检查与技术1988，16（6）：516
何为意外抗体
现在把正常情况下不应当出现在血液
中的血型抗体叫意外抗体。
unexpect
自身抗体与同种抗体
自身抗体
同种抗体
自身抗体与同种抗体的共存
疑难血型原因
抗原或抗体减弱
正反定型不符
抗原的问题
抗体的问题
介质问题
疾病问题
稀有血型
直抗阳性/自身凝集
多凝集现象
低频抗原~高频抗体
混合抗体
各种疾病原因的标本
无抗体时的窘境
抗原/抗体变化
 抗原的变化
 抗体的变化
 抗原减弱性、“消失
 抗体减弱




”
疾病
干扰
突变
其他
 抗体消失
 抗体出现
 其他
正反定型不符
 正常的ABO系统凝集结果几乎为3+~4+；
 变弱的抗原要考虑亚型的问题；
 重视抗H的检测；
 不忽视混合外观；
 CisAB与B(A)的“多见”；
 CisAB：A抗原较强、B较弱，有抗B，抗H3~4+；
 B(A)：B抗原较强、A较弱＜2+，抗A强与A1、A2反应，
抗H3~4+；
 A(B)：A型与单抗B反应，抗H增强
17th,p368。
ABO亚型的分析
采用的方法
● H抗原检测；
●吸收放散试验；
几种情况的分析
▲红细胞与抗A、抗B及抗AB的凝集
强度
▲血清中是否存在抗A1
▲与人源抗A、抗B反应强度
●４℃增强法；
●唾液中ABO物质检测；
● ABO基因分型技术；
▲红细胞上H物质的强弱（O＞A、B
亚型＞B＞A2B＞A1＞A1B、
孟买及类孟买H抗原阴性）
▲分泌型人的唾液中A、B和H物质
关注H抗原与抗H
干扰ABO血型正确判定的因素
 生理：年龄老人与婴儿、亚型、冷凝集素、先天无抗体；
 实验：血清与血浆、试剂问题（效期、污染）如抗A、抗B
试剂的特异性、敏感性、匀质性。抗D试剂表位的针对性；
、加样顺序、细胞洗涤、弱凝与溶血等等；直抗、抗筛、抗
体鉴定、是否需做对照 (本室：直抗、自身） ；
 标本问题：输血前后、稀释、高分子药物的钱串状、近期输
血的混合外观、移植等、抗体治疗的影响。血清还是血浆；
肝素对Polybrene 的影响、对基因检测的影响；
 疾病：白血病影响抗原、肝脏疾病影响抗体、自身免疫病抗
体、感染抗原与抗体、低免疫球蛋白血症、急性大失血的新
生细胞增加等。
不规则抗体的筛选与鉴定

为了检出各种不规则抗体, 试剂红细胞( 即谱细胞)
应选择含有D 、C 、e 、E 、e 、M、N 、P、Lea 、
Leb 、Fya 、K 、Jka 、Jkb 、Dia等抗原的多个O 型
红细胞。

由于抗-E 、抗-c、抗-M 、抗-S 有剂量效应, 所以
需使用E 、C 、M 、S 抗原纯合子的红细胞才能检出
低效价的抗体。
为什么交叉配血阴性而抗筛阳性？
 试剂红细胞上的抗原是纯合子，有较高的剂量效应，如
JK（a+b-）、Fy（a+b-）；但病人红细胞上的抗原是
Jk(a+b+)。出现阴性结果。
 病人红细胞上没有表达相应的抗原，这类抗原通常是中
度频率的稀有血型抗原，如K、Lua、Coa、Ytb，但试
剂红细胞存在。出现阳性结果。
临床RhD血型的定型如何做？
★临床RhD的定型：IgM试剂
 RhD的确认：
⑴ 3个不同克隆的试剂；
⑵ IgG（人源）、IgG、IgM、IgG+IgM；
 RhDel的检测：
 吸收与放散实验检测；
直抗阳性/自身凝集
 直抗阳性
血型的定型
配血
 自身凝集
血型定型
配血
 如何处理
多/全凝集现象的分析
非特异性凝集
冷凝集现象
认真处理标本
常见的冷凝抗体
更换检测方法
冷自身/同种抗体
特异性多/全凝集现象
间抗试验、4℃或室温的盐水直接反应结果、自身凝集
试验、无花果蛋白酶 或木瓜蛋白酶 处理的谱细胞反应
没有明显免
疫产生的
抗体包括
抗H
(表型是 Bombay or Oh)
抗PP1Pk
(表型是 p (Tja-))
抗P
(表型是 P1k 或 P2k)
抗JKa3
(表型是Jka-b-)
抗Rh17
(表型是 D+C-E-c-e-)
抗Ge2
(表型是Ge2-)
抗Ge2
(表型是Ge2-)
抗Vel
(表型是Vel-)
基本思路
直抗阳性，
采用放散
分离细胞与血清
常见血型定型
正反、直抗、自身
更多血型定型
（全凝集/溶血）
抗体筛查
（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）
抗体鉴定
（谱细胞）
血清/血浆
放散液抗体
酶处理细胞
不同温度
不同介质
无血清学试剂
有血清学试剂
检测（低频）表型
检测（低频）基因
血清学验证
充分了解病史
！！！
输血、怀孕
移植
血液制品IVIG/RhIG
化学药品
产生了意外抗体
发现冷、温自身抗体
冷自身抗体：4℃、22℃、＜30℃；温自身抗体：37 ℃
盐水
自身RBC + 自身血清
聚凝胺
4 ℃↑ 、室温、37 ℃反应
抗人球
常见冷自身抗体：-I、-i、-H、-Pro
常见冷同种抗体：-M、 -N、 -P1、-Lea、 -Leb、（-A1）
冷自身抗体的处理与鉴定
 含冷自身抗体的RBC的处理
压积红细胞用37℃盐水/PBS洗3次以上/56 ℃10’，至自身细胞不
凝（干净）后用于⑴ABO正定型及交叉配血，⑵自身吸收。
 含冷自身抗体血清的处理
含冷自身抗体血清2份 + “干净”细胞1份，混合后4℃1hr/过夜；
至含冷自身抗体血清与“干净”细胞不再凝集后用于⑴ ABO反定
型及交叉配血，⑵与谱细胞反应检测抗体特异性。
 交叉配血：吸收后的病人血清+供者红细胞， 盐水/聚凝胺/AHG
“干净” 的病人细胞+供者的血清，盐水/聚凝胺
/AHG
 冷抗体效价测定
1.取3排试管各10只，均加1滴盐水；第1管加Ps1滴倍比稀释；
2.每管加5%“干净”细胞/O型细胞1滴；4 ℃ 、22 ℃、 37 ℃放
置1hr；
3.3500rpm15’，出现1+的最高稀释度为患者血清抗体效价。
温自身抗体的处理与检测
 含温自身抗体的RBC处理(直抗阳性)
*各种放散实验如热放散、甘氨酸放散、酶处理等。
*如直抗≥2，常为ABO以外抗体，常用用乙醚放散。
*3洗后RBC1份+1%木瓜酶1份37℃10’3洗后为干净细胞。
 温自身抗体的血清处理
*含温自身抗体血清2份 + “干净”细胞1份+1%菠萝酶1份，混合
；37 ℃吸收1-2hr；1500rpm5’取上清；
*吸收后的Ps血清做⑴ ABO反定型及交叉配血，⑵与谱细胞反应
检测抗体特异性。
 含温自身抗体的交叉配血
主侧：吸收后的病人血清+供者红细胞；盐水/酶/聚凝胺/AHG
次侧：“干净”的病人红细胞+供者血清；盐水/酶/聚凝胺
/AHG
药物抗体的鉴定
600mg青霉素
药物红细
胞的制备
300mg头孢
甲基多巴
+
红
细
胞
37℃1Hr
……
药物红细胞1份
Ps2份
+
37℃1Hr
未处理红细胞1份
IgM
有
无
凝
集
药
物
红
细
胞
+
加AHG
IgG
混合抗体的检测
1.抗体筛选细胞：发现有无意外抗体： 室温盐水、 37℃、AHG
2.谱细胞：鉴定抗体特异性：
室温盐水、 37℃、AHG
当出现疑似混合抗体存在时
3.特定细胞吸收的放散液与谱细胞反应，确认抗体特异性；
4.抗体稀释后与谱细胞反应；
5.冷自身抗体与同种抗体混合的检测：用“干净”后的RBC与血清
冷吸收，吸收后的血清与谱细胞反应；
6.温自身抗体与同种抗体混合的检测：用“干净”后的RBC与血清
温吸收，吸收后的血清与谱细胞反应；
7.酶细胞的处理：
抗人球蛋白试验出现错误的原因

假阳性反应：可能与以下因素有关：
1.抗球蛋白血清或试剂红细胞被细菌污染。
2.网织红细胞异常增多。由于结合于网织红细胞上的运铁蛋
白同抗球蛋白血清中的抗运铁蛋白反应, 从而产生假阳性。
此时须用单价抗IgG 鉴别, 反应为阴性。
3.红细胞在体外摄取补体, 同广谱抗球蛋白中的抗补体反应,
所以应注意抗凝剂的选择。常用EDTA 抗凝剂, 使Ca2+赘
合, 以避免血清中补体激活, 出现假阳性反应。
4.离心速度过高, 或抗球蛋白试剂中留有微量种族抗体。
 假阴性反应：可能与以下因素有关：
1.红细胞洗涤不充分, 残留的球蛋白量如果超过2mg
/ m l将中和抗球蛋白试剂血清, 出现假阴性反应。
2.广谱抗球蛋白试剂中缺乏 / 不足抗补体的抗体。
3.试验步骤的延迟或中断, 特别在洗涤期间可导致抗
体从红细胞上解离。
4.孵育时间不充分, 温度不合适等。
☆ 病例讨论
病例1
正定型
表
型
-A
A3
2+H
Cis
AB
B(A)
A(B)
正反定型不符---ABO系统
-B
反定型
A1c A2c Bc
Oc
自身c
-AB -A1
-H
0
2+H
0
3~4+ 0/4+ 0/4+
4+
+/4+
0
4+
2+
4+
0
3~4+
0
0/w
1+
0
0
2+
4+
4+
0
3~4+
1+
1+
w/0
0
0
病例2
血
型
鉴
定
2Me
处
理
后
均
不
凝
，
应
为
IgM
型
抗-P1
抗
体
患者为B型
但反定型全凝
正反定型不符---ABO 以外
天然抗-P1引起ABO定型困难一例
李美霖等《中国输血杂志》
2013-8期
正定型
反定型
筛选细胞
-A
-B
-D
-H
-AB
A1c
Bc
Oc
自身c
OⅠ
OⅡ
OⅢ
4℃
0
4+
4+
1+
4+
4+
2+
3+
0
0
2+
2+
室温
0
4+
4+
1+w
4+
4+
1+
3+w
0
0
2+
2+
37 ℃
0
4+
4+
1+w
4+
4+
1+
3+w
0
0
2+
2+
细胞
编号
Duffy
Kidd
Lewis
P
结果
原血清
试管
2-Me处理血清
Fya
Fyb
JKa
JKb
Lea
Leb
p1
盐水
卡法
盐水
试管
卡法
1
+
+
0
+
0
+
0
0
0
0
0
0
0
2
+
+
0
+
+
0
W
W+
W+
W+
0
0
0
3
0
0
+
0
0
0
+
2+w
2+w
2+
0
0
0
4
0
+
+
0
0
+
+
2+w
2+w
2+
0
0
0
5
0
+
+
0
0
+
0
0
0
0
0
0
0
6
+
0
+
0
0
+
+
1+s
1+s
1+s
0
0
0
7
0
+
0
0
0
+
+
2+w
2+w
2+
0
0
0
8
+
0
+
0
0
+
0
0
0
0
0
0
0
9
0
+
+
+
+
0
+
2+s
2+s
2+
0
0
0
10
0
+
+
0
0
+
+
2+s
2+s
2+
0
0
0
病例3
《抗Tja导致ABO正反定型不一》 吴红等中国输血杂志2011-11期
抗Tja抗体有IgG或IgM型或同时具有。
4℃、37℃溶血。为补体介导，故用EDTA处理避溶血。
正定缺-AB、-H
应为Ps
关键看反定型全凝
病例4
李宝亮等《中国输血杂志》
2013-11期
混合抗体：
《Rh抗体联合抗M致配血困难》
患者血型B、DCCee、M-N+；疑有盐水-M；AHG-E、-c？
检出室温盐水IgM抗M,37℃时无活性为冷抗体；IgG型-E、-c或-Ec？-c+-P1？
采用Dccee（1号）、DCCEe（2号）特定抗原细胞进行吸收后
放散，放散后的抗体进行谱细胞检测，1号检出-c,2号检出-E
病例5
于笑难等中国输血杂志2013-11期《抗Fya导致配血不合》
患者血型AB、DCcee、
MNss、Fya-b+
Ps与抗筛细胞阳性，随后用谱细胞在盐水、酶介质作抗体鉴定见下表。进一步分析病人
可能有抗Fya。用Fya+b-吸收Ps的血清与10号细胞不反应，放散后的血清与10号细胞反
应，证实有抗Fya，效价1:16。
IAT
病例6
血型是表型检测的结果
 正定型
抗A
-
抗B
-
抗AB
-
Bc
2+
Oc
3+
反定型
Ac Bc
Oc
4+ 1~2+ -
 抗H
Pc
4+
 吸收放散实验
Pc、Bc放散液抗体检测：（-） 、（+）
二 血型研究进展
 近年来，分子测序技术的广泛采用，对血型形成的
分子机制有了清楚的了解
 更近些年来，血型研究中采用了模式动物学分析手
段，分析研究血型分子的生物学作用
 采用x-射线衍射分析技术，分析血型蛋白的分子结
构，从而了解血型分子的作用点与差异
 计算机技术和测序技术的飞速发展，产生了一门新
的生物信息学，汇集海量信息的数据库成为研究血
型的重要工具
血型抗原/命名
 2006年Cape town

MNS3个抗原、kell2个抗原、
Scianna2个、Cromer2个、Indian2
个、Knops1个、JMH4个
 2008年Macao

System 30: RHAG （CD241）：
Duclos、Ola、DSLK组成。
 2010年Berlin

P1PK的intron1有了 exon2a、
Rhdel 58、59抗原、CO1个、
Gerbich的GE10、11、12、
Cromer、JMH6个；Collection 209
成为新系统: GLOB；产生了新
Collection 213
血型基因/室间质评

2005年

2007年

2009年
室间质评
 ★2013年标准试剂的研制
，此为重要的趋势。4个
RBC1，RBC4， RBC5和
RBC12基因分型及抗HNA-1a的 WHO参比试剂
，用于及保证试剂的敏感
和特异。
ISBT 33---GenBank 34 血型系统
ABO
MNS
P1PK
RH
LU
ABO
MNS
P1PK
Rh
Luthe Kell
ran
Lewis Duffy
Kidd
DI
YT
XG
SC
DO
LW
CH/R
G
H
Diego
Yt
Xg
Scian
na
Domb Colto
rock
n
Lands CH/R
teiner G
-W
H
XK
GE
CRO
M
KN
IN
OK
RAPH JMH
I
Kx
Gerbi
ch
Crom
er
Knop
Indian OK
RAPh JMH
I
GLOB
GIL
RHAG FORS JR ①
LAN① -----
-----
33
Gill
RhAG Fors
Lan
T/Tn
34
①
KEL
CO
LE
FY
①
------
Junio
r
Vel ①
JK
①
①
RhD/CE合成不能缺少的 RhAG血型系统
Rh-associated glycoprotein Blood Group System
 原来RhCE，RhD，RhAG是一个系统，现在RhAG为一个独
立的系统，RhAG是 Rh50糖蛋白。
 RHAG 由10个外显子组成与RHCE/D （1p36.1）有36%序列
一致性。位于染色体6p12.3。12次穿膜。
 RhAG 是RhD 和/或RhCE形成所必须的。早期绿藻研究发现
这些蛋白作为CO2气体的通道；最近在各种Rh同源性的系统
发育学、生理学、结晶学研究强烈提示Rh作为CO2气体转运
，但铵的转运依然值得讨论。
 RHAG表达限制在红系组织。非红系的同源性产物表达
在肾脏、肝脏、皮肤、睾丸和大脑 。
第3系统P1PK与第28系统GLOB的关系
 一个共同的前体：糖基化神经酰胺
 两个基因： A4GALT；B3GALNT1
 四个抗原： P、P1 、 Pk、 NOR
 P1Pk系统： P1、PK、NOR
 GLOB系统：P
p是无P、P1、Pk抗原
有抗PP1Pk抗体，即Tja抗体
至今未被ISBT命名的 T/Tn 血型系统
基因位点 - C1GALT1(编码T-synthase),
C1GALT1C1(编码 chaperone Cosmc)
 潜在的红细胞抗原。
 T抗原是粘蛋白的氧联蛋白；
 Tn 抗原：T表位的β-1,3-半乳糖基化缺失，阴性。
Tn 的β-1,3-半乳糖基化产生T表位。
 Tn 和T 抗原是许多氧聚糖的前体。
 Tn 和 STn在人类肿瘤细胞中有很高的表达 ，在某些肿瘤中
有 90%。Tn尤其是T抗原可以刺激半乳糖介导的肿瘤细胞的
粘附。
 最近，试图开发基于Tn的疫苗。
血型与病原、疾病

统计FY（a-b-）的个体感染HIV比其他表型的人高
40%。所幸的是国人的FY（a-b-）频率极低，黑人高达
68% 。超表达的抗原与好的预后有关。

众多调查提示在人类ABO血型的起源、分布、相
对比例，可能直接受到来自于恶性疟原虫感染的选择性
基因压力。
GPC是恶性疟原虫受体；Ge阴性红细胞抵抗疟原
虫的侵入。

Ge阴性表型在巴布亚新几内亚部分地区很常见 。

P1PK系统抗原
*作为受体起作用，在肠道细菌的粘附如大肠埃希氏菌、猪链
球菌、绿脓假单胞菌 、志贺氏杆菌、肠出血性大肠杆菌有关；
*作为受体，与人细小病毒B19结合；
*在HIV侵入中起协同因子作用；
*细胞毒性IgM和IgG3抗体在抗P和/或Pk的自发性流产中 比例
较高；
人红细胞膜主要的表面蛋白
Band3：anion exchanger1，AE1。阴离子交换蛋白，
膜蛋白电泳处于第3条带，占RBC膜总量的25%。膜骨架
主要附着点，参与多种物质和信息的跨膜传递和功能调节。
疏水性跨膜域的生理功能是介导Clˉ/HCOˉ交换,
在完成组织CO2运输、肺CO2排出过程中发挥重要作用
电子（交叉）配血
 电子配血的前提：供者、患者没有意外抗体
，采用相同血型的血液相输血；
 电子（虚拟）血库：将血库中的血液前移至
手术（输血）室，在电子配血的基础上，满
足患者及时的输血要求；
 注意点：多抗原的确认、抗体筛查、直抗/间
抗的完成；试剂及细胞谱的一致性。
三年来《Nature Genetics》连续发表红细胞
血型新系统的研究成果 IF=35

Teresa Zelinski等《ABCG2 null alleles define the Jr(a−) blood
group phenotype 》Nature Genetics 44, 131–132 (2012)

Carole Saison等 《Null alleles of ABCG2 encoding the breast
cancer resistance protein define the new blood group system
Junior》 Nature Genetics 44, 174 – 177（2012）

Virginie Helias等《ABCB6 is dispensable for erythropoiesis and
specifies the new blood group system Langereis 》Nature
Genetics 44, 170–173 (2012)

Jill R Storry等 《Homozygosity for a null allele of SMIM1 defines
the Vel-negative blood group phenotype 》Nature Genetics 45,
537–541 (2013)

Ana Cvejic等《SMIM1 underlies the Vel blood group and
influences red blood cell traits 》Nature Genetics 45, 542–545
(2013 )
三个新血型的生物学作用
 Junior血型抗原系统：Junior，JR 或 Jr(a)。
Jr(a)蛋白由ABCG2基因编码。 Jr(a) 阴性的人
产生抗体。
ABCG2是人ATP（腺苷三磷酸）结合盒转运器
(ATP-binding cassette transporter,ABC转运蛋
白) G2。通过限制毒物吸收及运转，维持细胞稳态。
乳腺癌耐药性蛋白，作为一种多种药物转运器，肿
瘤治疗中的药物耐受与其有关。ABCG2-/Jr-的人对
ABCG2运输药物高度敏感，通过检查血型可以了
解对药物的反应。
存在于造血干细胞、成熟红细胞、几乎所有组织
的静脉及毛细血管壁细胞。
Langereis血型抗原系统：
ABCB6由ABCB6基因编码，Lan是MDR/TAP亚家族
成员。Lan（+）高频（日本除外），抗Lan极少。Lan(-)均
为缺失纯合子，Lan(+)为杂合子或未缺失。位于染色体2q36，
19个外显子组成，长约9kb。约35种突变造成。
ABCB6蛋白与血细胞携氧、肝脏解毒和细胞产能有关。
现在认为其主要作用是通过转运保护有机体被毒物的损害，
同时与多种药物/抗癌药物耐药性及抗原递呈有关。能够将
卟啉运转到线粒体内部，卟啉是血红素合成所必须的。
ABCB6↑ 卟啉 ↑
→皮肤型血卟啉病：光暴露区皮肤脆性增加、水疱；
→急性卟啉病：胸、腹、背和四肢疼痛，麻痹、抽筋甚
至智力错乱。
存在于红细胞、线粒体外膜、及肝癌细胞膜。
Vel血型抗原系统
1952年病人Mrs.Vel的血液由于输血反应，其
血液可以凝集许多人的血液，随后其抗体被命名为
抗Vel。
1975年确定为常染色体隐性遗传。
2013年发现转膜蛋白SMIM1带有Vel的表位。
确认 SMIM1的基因有17个核苷酸的缺失。
SMIM1是一个小基因，有4个外显子，编码区
域在外显子3~4。在染色体的 1p36.32 ，与RHD、
RHCE 位点为邻。
斑马鱼的SMIM1基因敲除研究发现有中等程度
的RBC数量的减少， SMIM1转录水平的下降影响
平均Hb浓度，证明是一种新的RBC形成调节因子。
Jill R Storry等证实SMIM1是基因，Vel是血型。
Vel在世界范围内的阴性频率为0.04%，英国
1/4000，瑞典北部略高，中国未知。
存在于成红细胞样的细胞系中。
3个血型的相应抗体均导致输血反应和HDN。
未发现由于表型的缺乏影响生命活动。
 胚胎期




Vel



的基因
敲除
同源杂
交植入
胚胎
固化
整体原
位杂交
染色
观察
定位
定性
定量
班马鱼Smim1（转膜蛋白）基因敲除，整体原位杂交技术。生长3天的
仔鱼染色观察Hb,表明成熟的原始RBC中等程度的减少。Ana Cvejic等
x-射线衍射分析技术
分子时代的血型分析
直接测序
扩增测序
PCR-SSP
克隆测序
基因测序
最为常用的两种方法
杂交
原位杂交
分子杂交
血型基因分型的应用
 近期输血的病人；
 新生儿溶血病；
 直抗阳性的病人细胞；
 为分析AIHA病人潜在的同种抗体，AIHA的细胞往






往DAT(+)；
弱的红细胞抗原；
输血反应；
大规模筛查抗原阴性的供者；
抗体缺乏时；
A、B、D等血型不一致时；
RhD的表型与基因关系。
PCR-SSP
 最为简单，检测已知的位点；
 根据目的要求，设计扩增引物，凝胶成像；
 单位点/多血型；
 Mark的作用，是标尺；
测序分析
1.目的基因的获取
⑴ 引物的设计：⑵ 制备DNA：⑶扩增目的基因
2.目的基因纯化的方法
去除引物、dNTP、盐、非特性PCR产物
⑴胶回收法；⑵柱法；⑶酶法：直接在PCR管中
进行，37℃15’ 酶消化，再80℃15’灭活酶的活性
3.测序样品的制备
目的基因测序前扩增，目的是结合上荧光染料
① 样品不纯化：用于直接测序；② 测序样品纯化：
去除未结合的荧光标记的ddNTP等物质
4.纯化的方法：
⑴BigDye® XTerminator™法：无需转移测序产物；
⑵Centri-Sep柱纯化法：l测序产物转移至凝胶顶端；
⑶酒精-EDTA-醋酸钠沉淀法：
5.测序----毛细管电泳
①将纯化后待测基因加入孔板；每孔10ul，将
孔板置入测序仪中； ②按操作说明书进行操作
Exon6
261一条等位基因出现碱基G缺失
261delG
297A ＞ G
Exon7
467C＞T
297A ＞ G
626G＞A
生物信息学
 1955年胰岛素全序列测定（色谱和标记技术）；
 1960年RNA酶测定；
 每个染色体的长度约为5500万-2.5亿bp，目前的一次测序约
500-600bp，故需通过基因克隆和PCR将需要的目的片段取出
，进行测序分析；
 今天约每一分钟就获知一个新序列；
 由于测序技术的日益进步和计算机技术的飞速发展，产生了一
门新的学科---生物信息学。采用信息技术来管理和分析海量的
生物学基因及相应的信息，并最终为医学与人类健康服务。
血型信息的来源
ISBT
信
息
来
源
三大基因库
GenBank
BGMUT
EMBL
Rh血型库
DDBJ
期刊文献
世界三大基因数据库
 GenBank ，美国国家生物技术信息中心 （NCBI）
所维护的供公众自由读取的、带注释的DNA序列的
总数据库。
 EMBL (uropean Molecular Biology Laboratory)
，欧洲分子生物学实验室。Cambridge, UK。
 DDBJ (DNA Databank of Japan) ，日本核酸数据
库。




一些其他的专门的基因数据库。
人类基因克隆库
〔人类基因组BAC(细菌人工染色体)文库〕；
人类基因探针库
〔 人类染色体FSH(荧光原位杂交)探针库〕；
小鼠基因克隆及探针库 〔小鼠基因组BAC文库和染色体FISH探针库〕
基因序列
GenBank
红细胞血型抗原基因
突变资料库BGMUT
基因序列
IMGT/HLA
EMBL
IPD-KIR
IPD-MHC
IPD-HPA
美国国家生物技术信息中心 NCBI
Nation center for Biotechnology Information
BGMUT -The Blood Group Antigen Gene Mutation Database
CisAB08
A311
A4GAL343T,903G
欧洲生物信息研究所 EBI
The European Bioinformatics Institute
欧洲生物信息研究所 EBI
The European Bioinformatics Institute
到目前已发现28个HPA
Rh/RH资料库
谢 谢