Transcript Proteínas homólogas

Pamplona 7-8 Mayo 2010
Diagnóstico por componentes en alergia
alimentaria
María Luisa Sanz
Departamento de Alergología e Inmunología Clínica
Diagnóstico de precisión en Alergia alimentaria
-Verificar los Ac IgE específicos funcionalmente relevantes
Distinción: Sensibilización-Alergia
Problemas reactividad cruzada:
Pólen-alimento
Alimento-alimento:PP!!
-Identificación de las moléculas o epítopes responsables
Herramientas que han abierto nuevos
horizontes en el diagnóstico de alergia
alimentaria
Pasado y presente del diagnóstico alergológico
Harwanegg C. et al CEA 2003
Diagnóstico basado en componentes permite
Identificar los patrones individuales de
sensibilización frente a:
-Diferentes proteínas de una única fuente alergénica
-Proteínas homólogas en diferentes alimentos
-Diferentes epítopes de una molécula alergénica
Pru p 1
Pru p 3
Pru p 4
Patrones diferentes de sensibilización
según área geográfica
Component-resolved diagnosis (CRD)
Norte de Europa
Pru p 1
Pru p 1
Pru p 3
Pru p 4
SAO
Pru p 4
Europa mediterránea
Pru p 3
Síntomas
sistémicos
Fernández-Rivas M et al. J Allergy Clin Immunol. 2003
Oct;112(4):789-95.
Gamboa PM et al Allergy 2008
Asociación riesgo: LTP Asero 2000
Diagnóstico basado en componentes permite
Identificar los patrones individuales de
sensibilización frente a:
-Diferentes proteínas de una única fuente alergénica
-Proteínas homólogas en diferentes alimentos
-Diferentes epítopes de una molécula alergénica
PR-10
Reactividad cruzada
Sindromes de reactividad cruzada
y componentes alergénicos
Ácaros/Gamba/Caracol/Cucaracha
Tropomiosina
Cerdo-gato
Albúmina sérica
Látex-frutas
Quitinasas de clase I
Artemisia-apio-zanahoria- especias
Profilinas, Proteínas alto peso molecular
Polen de abedul-alimentos (manzana,
zanahoria, avellana, apio, patata)
PR-10 (homólogos de bet v 1)
Gramíneas-melocotón
Profilinas
Cacahuete-guisante
Vicilina
Diagnóstico basado en componentes permite
Identificar los patrones individuales de
sensibilización frente a:
-Diferentes proteínas de una única fuente alergénica
-Proteínas homólogas en diferentes alimentos
-Diferentes epítopes de una molécula alergénica
Persistencia
Gravedad...
Epitopos IgE en los alergenos alimentarios
SPOT
μArrays
μArrays-TAB
J.Lin, H.Sampson. Curr Opin Allergy Clin Immunol 2009
Familias principales de alérgenos
Thaumatin-like proteins
12
Serum albumins
12
Polygalacturonases
12
Expansins, N-terminal domain
12
Caseins
12
Group 2 mite allergens
14
Glutathione S-transferases, C-terminal ...
14
ATP:guanido phosphotransferases
143 familias de alérgenos que
contienen 889 alérgenos
17
Papain-like cysteine proteases
18
Subtilisin-like serine proteases
http://www.meduniwien.ac.at/allergens/allfam/
19
PR-1 proteins
22
Lipocalins
24
Expansins, C-terminal domain
25
Bet v 1-related proteins
25
Trypsin-like serine proteases
27
Cupin superfamily
32
EF hand domain
42
Profilins
51
Tropomyosins
56
Prolamin superfamily
68
0
10
20
30
40
50
60
70
80
Familias mas importantes de alérgenos
alimentarios vegetales
N=8
Karin Hoffmann-Sommergruber & E. N. Clare Mills
Anal Bioanal Chem (2009) 395:25–35
Familias mas importantes de alérgenos
alimentarios animales
N=8
Karin Hoffmann-Sommergruber & E. N. Clare Mills
Anal Bioanal Chem (2009) 395:25–35
Alérgenos moleculares o componentes alergénicos
Bases de datos
www.allergen.org
web internacional de nomenclatura de alérgenos (IUIS-WHO)
www.allergome.org web sencilla, completa y con numerosos links
www.ifr,ac.uk/protall base de datos de Ag alimentos. Proyecto UE
Panalérgeno
-Proteínas homólogas
-Molécula compartida por diferentes fuentes alergénicas separadas
filogenéticamente, con estructura y función similar que explican
fenómenos de reactividad cruzada
Bétula,
manzana,
cataña...
PR-10
Homólogo de Bet v1
Panalérgeno
-Proteínas homólogas
-Molécula compartida por diferentes fuentes alergénicas separadas
filogenéticamente, con estructura y función similar que explican
fenómenos de reactividad cruzada
Tropomiosina
Panalérgenos
Allergome Sequence
Homology ring
Moléculas
relacionadas con
Pru p 3
Allergome Sequence
Homology ring
Moléculas
relacionadas con
Der p 10
¿Que es un microarray?
• Los microarrays son matrices bidimensionales de alta densidad
donde se ha inmovilizado material biológico que permite la
automatización simultánea de miles de ensayos en paralelo.
• El material inmovilizado, que se utiliza como sonda biológica, pueden
ser ácidos nucleicos (Oligonucleótidos o cDNA),
(anticuerpos, enzimas, etc.), pequeñas moléculas, etc.
proteínas,
Primeros estudios de Microarrays aplicados a alergia
con extractos alergénicos completos
Detection of Multiple Allergen-specific
IgEs on Microarrays by Immunoassay
with Rolling Circle Amplification
Steve Wiltshire, Shawn O’Malley, Jeremy
Lambert, Kari Kukanskis, David Edgar,
Stephen F. Kingsmore and Barry
Schweitzer
Clin Chem 2000
Journal of the Federation of American Societies
for Experimental Biology 2002
Microarrayed allergen molecules: diagnostic gatekeepers
for allergy treatment
Reinhard Hiller, Sylvia Laffer, Christian Harwanegg, Martin Huber, Wolfgang
M. Schmidt, Anna Twardosz, Bianca Barletta, Wolf M. Becker, Kurt Blaser,
Heimo Breiteneder, Martin Chapman, Reto Crameri, Michael Duchêne, Fatima
Ferreira, Helmut Fiebig, Karin Hoffmann-Sommergruber, Te Piao King,
Tamara Kleber-Janke, Viswanath P. Kurup, Samuel B. Lehrer, Jonas Lidholm,
Ulrich Müller, Carlo Pini, Gerald Reese, Otto Scheiner, Annika Scheynius,
Horng-Der Shen, Susanne Spitzauer, Roland Suck, Ines Swoboda, Wayne
Thomas, Raffaela Tinghino, Marianne Van Hage-Hamsten, Tuomas Virtanen,
Dietrich Kraft, Manfred W. Müller, and Rudolf Valenta
Presentan la nueva tecnología de microarrays para el diagnóstico en alergia tipo I
Utilizan proteínas naturales purificadas o recombinantes procedentes de 35 diferentes
fuentes alergénicas, que las fijan a portas preactivados mediante técnica de microarrays
La mayor diferencia con otras tecnologías convencionales es que el microarray contiene las
moléculas definidas de cada alérgeno como reactantes.
Permite la identificación de las moléculas responsables
CEA 2007
VENTAJAS
Miniaturización del diagnóstico alergológico
Va a hacer realidad el sueño de conocer todas las especificidades de
la IgE en un paciente alérgico
Diagnóstico molecular de la hipersensibilidad mediada por IgE
Diagnóstico basado en componentes
Microarray
Microarray de IgE
específica
Determinación semi-cuantitativa la IgE específica frente a 103
componentes alergénicos, recombinantes y naturales purificados,
mediante la tecnología MICROARRAY ISAC 103 ( Phadia, Suecia).
7,5 cm
2,5 cm
Microarrays de proteínas para la determinación de IgE
específica
Matriz de componentes alergénicos en la determinación de
sIgE
ISU
MICROARRAY ISAC 103
(Immuno solid phase chip)
Determinación semi-cuantitativa de la expresión de IgE específica
frente a 103 proteínas purificadas y recombinantes
Obtención suero
Revelado.Se añade
espAc
Incubación muestra
Wash
<50 ml suero
Escanea el biochip
Duración: 3 hours
Análisis de imagen
Lavado
Duración: 10 min.
Obtención Informe
PANEL DE ALERGENOS DEL
MICROARRAY ISAC 103
(Immuno solid phase chip)
ISAC CDR 103
ISAC CRD 103
Alérgenos de origen vegetal
-Marcadores especie específicos
-Marcadores de reactividad cruzada
Proteínas de almacenaje
- Proteínas procedentes de
las semillas sirviendo como
materia prima durante el
crecimiento de la planta.
-A menudo prot estables y
resistentes al calor
causando reacciones en
alimentos cocinados
ISAC CRD 103
Alérgenos de origen vegetal
Proteínas PR-10
Homologos Bet v 1
• En el Norte y Centro de
Europa el abedul o los
pólenes relacionados son
considerados los
sensibilizadores más
importantes causantes de
síntomas respiratorios.
-La presencia de proteínas
PR10 en vegetales y frutas
puede causar síntomas debido
a reactividad cruzada con
dichos pólenes.
-Se puede asociar a SAO
Omega 5 gliadina
Asociada a anafilaxia inducida
por ejercicio
ISAC CRD 103
Alérgenos de origen vegetal
LTP
• Proteínas termoestables a
proteasas digestivas,
causantes de reacciones en
alimentos cocinados
asociadas a reacciones
sistémicas graves
Alérgenos de origen vegetal
-Marcadores de reactividad cruzada
Panalérgeno que muestra una
gran homología y reactividad
cruzada entre profilinas de
diversas especies vegetales,
incluso entre aquellas alejadas
filogenéticamente. En algunos
casos asociados a SAO en
síndromes a polen-frutas.
Alérgenos de origen vegetal
-Marcadores de reactividad cruzada
Marcador de sensibilización de
reactividad cruzada por determinantes
carbohidratos.
Raramente asociado con síntomas
clínicos pero posible causa de
reacciones en algunos pacientes
Alérgenos no vegetales
-Marcadores especie específicos
Anisakis
Ani s 1
Marcadores de reactividad cruzada
Ag mayoritario del pescado y panalérgeno
de este grupo.
Marcador de reactividad cruzada entre
especies de pescados y anfibios.
Proteína estable al calor y a la digestión,
causando reacciones con alimentos
cocinados
Proteína fijadora de actina localizada en las
fibras musculares.
Marcador de reactividad cruzada entre
artrópodos (crustáceos, arácnidos e
insectos)
Estudios de validación de la técnica de
microarrays en alergia alimentaria
Allergy 2008
N=130 niños con sospecha de alergia alimentaria mediada por IgE
En todos ellos Prueba de Provocación con leche de vaca y/o huevo
Prueba cutánea
IgE esp (CAP)
Microarrays (ISAC CRD 51, VBC Genomics)
Ovomucoide (Gal d 1)
Ovoalbúmina (Gal d 2)
Lysozyma (Gal d 4)
Alfa lactoalbumina (Bos d 4)
Beta lactoglobulina (Bos d 5)
Caseína (Alfa, beta, kappa)
n=130
145 provocaciones
DBPCFC
Leche
Huevo
PP realizadas
85
60
PP abierta
PP positivas
42 (49%)
45 (75%)
Asociación entre el nº de componentes reconocidos en el
microarray y CAP frente al extracto
PP como parámetro de referencia para análisis de
curvas ROC para PC , CAP y Microarray
LECHE
HUEVO
LECHE
No encuentran dif significativas entre los valores de área bajo
la curva (AUC) entre PC, CAP y Microarray
HUEVO
Solo el Gal d 4 (lisozima) arroja valores inferiores de AUC, respecto al extracto
completo
El resto de componentes, respuesta similar
La combinacion de todos en Microarray similar a CAP y PC
Puntos de decisión clínica
LECHE n=85
HUEVO n=60
Ninguna prueba in vivo o in vitro permite el
diagnostico definitivo en el 100% de los casos de
Alergia alimentaria
Los microarrays frente a componentes de leche y
huevo nos dan resultados equivalentes a los
encontrados con PC y/o IgE esp
Ningún componente exclusivo discrimina entre una
sensibilización irrelevante y una sensibilización
genuina
Leche
Perfiles de reconocimiento de Ag leche
en alérgicos y no alérgicos
40 sueros con IgE total entre 72 y 18591 kIU/L e IgE
específica a proteínas de leche entre 3 y 190 kIU/L.
6 sueros con IgE total entre 66 y 13242 kIU/L y sin alergia a
leche, como controles negativos.
Tecnica uarray propia
Frecuencia de reconocimiento de
alérgenos en alérgicos y no alérgicos
Lactoferrina bovina es un Ag mayoritario en
alergia a leche.
Caseinas: alfa s1 es mas alergénica
Pediatric allergy Immunol 2007
sIgE trigo
sIgG4 trigo
Dermatitis atópica por alimentos
con PP positiva o negativa
IgE, IgG4 Ag-específica mediante
microarrays (tecnica propia) para
leche, clara de huevo, soja y trigo.
La media de los valores IgE/IgG4 es mayor en el grupo PP +
El valor IgE/IgG4 podría indicarnos la gravedad y el progreso de la dermatitis
atópica de un paciente y ser mejor indicador que la IgG absoluta.
Mapeo de Epitopos. Microarray Peptidos
LECHE
CACAHUETE
•
Flinterman AE, Knol EF, Lencer DA,
Bardina L, den Hartog Jager CF, Lin J et
al. Peanut epitopes for IgE and IgG4 in
peanut-sensitized children in relation to
severity of peanut allergy. J Allergy Clin
Immunol 2008; 121(3):737-43.
•
Shreffler WG, Beyer K, Chu TH, Burks AW,
Sampson HA. Microarray immunoassay:
association of clinical history, in vitro IgE
function, and heterogeneity of allergenic
peanut epitopes. J Allergy Clin Immunol
2004; 113(4):776-82.
•
Shreffler WG, Lencer DA, Bardina L,
Sampson HA. IgE and IgG4 epitope
mapping by microarray immunoassay
reveals the diversity of immune response
to the peanut allergen, Ara h 2. J Allergy
Clin Immunol 2005; 116(4):893-9.
•
Cerecedo I., Zamora J., Shreffler
G.W., Lin J, Bardina L, Dieguez M.C.
et al.
Mapping of the IgE and IgG4
sequential epitopes of milk
allergens using a peptide
microarray-based immunoassay. J
Allergy Clin Immunol 2008.122:589594
Estudios de perfiles de
sensibilización frente a epítopos
diversos o fracciones de proteínas
útiles en predecir la historia natural
de la alergia alimentaria
Jarvinen et al JACI 2002
Jarvinen et al JACI 2007
Vila et al CEA 2001
Reconocimiento Epitopos Lineales
Aplicación clínica
¿Biomarcadores de distintos fenotipos clínicos?
Gravedad clínica
Pronóstico
(persistencia de alergia)
Diseño de dianas terapéuticas futuras
Elección de pacientes para tratamiento
IT ( inmunoterapia)
ITO (inducción tolerancia oral)
Reconocimiento Epitopos Lineales
LECHE
JACI 2001
•
•
•
Persistencia de alergia leche
96 decapéptidos con aa de αs1-caseina. SPOT
24 niños (persistente >9años, posible no-persistente <3años)
Reconocimiento Epítopos Lineales
LECHE
JACI 2002
Reconocimiento diferencial de epítopes
frente a proteínas de leche de vaca
entre pacientes
-alergia a leche persistente (n=10)
-alergia transitoria (n=10)
5 epitopes:
2 en alfa s1 caseína
1 en alfa s2 caseína
2 en kappa caseína
no fueron reconocidos por los alérgicos
transitorios y sí por los persistentes
Peptido AA 123-132 de la alfa s1 caseína:
Marcador de persistencia
Reconocimiento Epitopos Lineales
LECHE
Reconocimiento
Epitopos Lineales
LECHE
Beyer K, Jarvinen KM, Bardina L, Mishoe M, Turjanmaa K, Niggemann B,
Ahlstedt S, Venemalm L, Sampson HA
J Allergy Clin Immunol. 2005,116:704-5.
Peptide-specific IgE for individual
peptides at time of clinically relevant
allergy in 3 groups of patients:
(A) with persistent CMA, and
(B) with late and
(C) with regular tolerance
development. Letters highlight the
patients with the highest levels for the
individual peptides.
Epitopos
informativos
de persistencia de
alergia a leche
Mapeo de Epitopos. Microarray Peptidos
LECHE
-Desarrollan un microarray de proteínas alergénicas
de leche para mapear sus epítopos a gran escala,
mediante péptidos de 20 amino ácidos incluyendo
las secuencias primarias de αs1-caseina, αs2caseina, β-caseina, κ-caseina y β-lactoglobulina.
-Comprueban su reproducibilidad, especificidad y
sensibilidad.
-En base al solapamiento de amino ácidos, son
identificados nuevos epítopos:
αs1-caseina, Aas 49-62; αs2-caseina, Aas 69-77; βcaseina, Aas 16-39; β-lactoglobulina, Aas 106-119.
El inmunoensayo basado en microarrays de péptidos puede
proporcionar un método para el diagnóstico de alergia a leche
LECHE
J Allergy Clin Immunol 2010;125:695-702
Sujetos con alergia a leche reconocen
una mayor diversidad de epítopos unidos
a IgE comparado con los que han
superado su alergia, y éstos, similar a los
sujetos tolerantes.
LECHE
J Allergy Clin Immunol 2010;125:695-702
La unión de
mayor número de
péptidos a IgE
está asociada a
reacciones más
graves durante
las pruebas de
provocación.
Reconocimiento Epitopos Lineales
Huevo
Pacientes con alergia persistente a
huevo producen IgEesp frente a
mayor número de epítopes lineales
y conformacionales de ovomucoide
y albúmina
Metodo screening para alergia
persistente a huevo
Reconocimiento Epitopos Lineales
Cacahuete
J Allergy Clin Immunol 2004;113:776-82
Desarrollan un microarray basado en péptidos de cacahuete para mapear epítopos.
213 péptidos de 20 aminoácidos solapados de las secuencias primarias de Ara h 1
Ara h 2 y Arah 3.
77 pacientes alérgicos a cacahuete
15 controles.
Reconocimiento Epitopos Lineales
Cacahuete
A. Frecuencia de reconocimiento de cada péptido
en el microarray:
87% de los sueros de pacientes fueron positivos
al menos a un péptido.
B. Distintos perfiles de
reconocimiento de la IgE de 8
pacientes.
Gran variabilidad entre los
pacientes respecto al número
de epítopos y el patrón de
péptidos reconocidos.
J Allergy Clin Immunol 2004;113:776-82
Reconocimiento Epitopos Lineales
Cacahuete
38 Pacientes con clínica
14 sólo cutánea
24 sistémica
marray
Los pacientes con historia de
reacciones multisistémicas más
graves reconocen un mayor número
de epítopos. A
LA DIVERSIDAD DE IgE CORRESPONDE
A LA GRAVEDAD DE LA HISTORIA
CLÍNICA
CAP
Determinando los niveles de IgE
específica a alérgenos
recombinantes mediante CAP-FEIA,
no hay diferencia entre pacientes
con reacciones más o menos
graves. B
J Allergy Clin Immunol 2004;113:776-82
Reconocimiento Epitopos Lineales.
CACAHUETE
Estudio prospectivo. 24 Niños. PO.
-IgE e IgG4 epitopos peptidos (15 aa) Arah1, Ara h2, Ara h3.
-Correlacion positiva entre diversidad de
epítopos reconocidos por la IgE de un
paciente y la gravedad
-Tras 20 meses de seguimiento el patrón
se mantiene estable.
-No encuentran un grupo de péptidos que
se asocie a gravedad
Reconocimiento Epitopos Lineales. CACAHUETE
Graves
PP. Negativa
Ara h 1aa
Ara h2 aa
Ara h3 aa
Tolerantes
Controles
Cacahuete
J Allergy Clin Immunol 2010;125:191-7
OBJETIVO: diferenciar entre alergia a cacahuete y tolerancia mediante el
diagnóstico basado en componentes (CRD) usando microarrays.
METODOS: Comparar el perfil de sensibilización entre niños sensibilizados a
cacahuete (IgE > 0,2 kUa/L), alérgicos (n=29) o tolerantes (n=52), usando
microarrays con 12 componentes (alérgenos mayores y alérgenos con
potencial reacción cruzada).
PANEL DE COMPONENTES Y CARACTERISTICAS DE LOS
DIFERENTES PERFILES DE RECONOCIMIENTO DE
COMPONENTES
CONTROL NEGATIVO
ALERGIA A CACAHUETE Y
GRAMINEAS
ALERGIA A CACAHUETE
ALERGIA A GRAMINEAS Y
SENSIBILIZACION ASINTOMATICA
A CACAHUETE
Cacahuete
PANEL DE COMPONENTES Y CARACTERISTICAS DE LOS
DIFERENTES PERFILES DE RECONOCIMIENTO DE
COMPONENTES
Cacahuete
CONTROL NEGATIVO
CONCLUSIONES:
ALERGIA A CACAHUETE Y
GRAMINEAS
Hay diferencias notables entre el patrón de sensibilización de niños
alérgicos y tolerantes a cacahuete.
El componente Ara h 2 es el más importante
predecir alergia
ALERGIApara
A CACAHUETE
clínica a cacahuete. El CRD usando microarray puede facilitar el
diagnóstico de alergia a cacahuete.
ALERGIA A GRAMINEAS Y
SENSIBILIZACION ASINTOMATICA
A CACAHUETE
Cacahuete
Verde - Toleran cacahuete
Rojo- Alérgicos a
cacahuete
Trigo
Desarrollan un microarray de moléculas alergénicas purificadas y recombinantes
para diferenciar el diagnóstico entre alergia alimentaria inducida por trigo, alergia
a polen y el “asma de panadero”.
Alérgenos de semillas de trigo recombinantes (10, 37,
38, 112, 123, 126).
Extracto de polen de trigo (WP).
Alérgenos de polen recombinantes (Phl p ).
Marcadores de IgE (1 -13).
n = 22
Trigo
n = 32
n = 17
Trigo
Usando 4 de los alérgenos recombinantes de semillas de trigo se puede diferenciar
entre alergia al trigo respiratoria y alimentaria, ya que los pacientes con asma del
panadero están sensibilizados a éstos alérgenos, mientras que los de alergia
alimentaria no están sensibilizados.
Es posible desarrollar un microarray basado en alérgenos recombinantes de trigo y
alérgenos de polen útil para la discriminación de las 3 condiciones clínicas de alergia
trigo.
1. Asma del panadero.
2. Alergia alimentaria al trigo.
3. Alergia al polen de
gramíneas.
Nuestra experiencia
DIAGNOSTICO por Componentes
perfiles de sensibilización en alergia a
melocotón
IgE esp
TAB
DIAGNOSTICO POR MICROARRAYS
Cabrera et al
Allergy 2008
Number of cases
11 Pacientes con Anafilaxia postprandial
8 adultos (4 mujeres y 4 varones) y 3 niños varones.
4 de estos pacientes presentaron anafilaxia por ejercicio postpandrial.
11
-Sensitisation to LTPs , detected by Microarray
ISAC CRD, was found in 63% of our patients
with anaphylaxis, so it should be studied in
patients with this pathology, given its ubiquity in
different vegetables.
-The microarray technique allows a more
accurate diagnosis of sensitisation in some
pathologies, such as anaphylaxis.
10
9
8
7
N = 7
6
5
4
63%
3
2
N = 1
1
0
9%
LTP
TPM
N = 1
9%
PROFILIN
Acaros-gamba
Tropomiosinas
gamba
cucaracha
Anisakis
CAP
Der f 1 Der f2 Der p1 Der p2 Der p 10
NAS 37,71
68,86
41,36
70,78
3,83
AAL 114,68 26,92
68,65
26,9
38
D1
CAP
Pen i 1 Pen m1 Per a 7 Hel as 1 Ani s 3 p4
7,79
6,3
2,92
3,34
3,31
11,57
9,55
3,32
2,96
10,46
IGR
0
21,68
0
25,32
26,98
17,5
19,46
12,89
7,28
9,57
10,27
DRT
9,15
5,04
11
6,93
9,34
>100
10,63
8,02
3,37
5,15
6,17
JFD
0
0
0
0
125,25
51,78
57.57
142,13 135,16
78,57
GCR**
0
0
0
0
27,5
12,87
15,27
27,18
21,97
* tropomiosina recombinante de gamba
** Detector de marisco. IT sl ácaros
5,6
28,94
caracol
f351*
2,79
3,51
2,28 23,2
Tropomiosinas testadas en el
microarray.
Der p 10
Per a 7
Ani s 3
Pen i 1
Pen m 1
-mismo patrón de reactividad
-alta homología entre todas ellas
CASOS CLÍNICOS
Paciente polínico con alergia
alimentaria
•Paciente varón 12 años
•Clínica de asma bronquial y
rinoconjuntivitis de abril a junio,
que precisa de tratamiento diario
•Con la ingesta de cacahuetes,
cuadro de edema y urticaria
generalizada
IgE total: 907 kUA/l
IgE esp
Alternaria:13,9 KUA/l
Phleum G5: 7,09 kUA/l
Olivo t9: 8,02 KUA/l
Plantago: 7,41 KUA/l
Cacahuete:>100 kUA/l
Melocotón:4,72 kUA/l
LTP
Profilinas
• Sensibilización a profilinas, lo que
Profilinas
justifica la positividad a múltiples
pólenes en pruebas cutáneas y a los
alimentos vegetales.
• Sensibilización a LTP justifica la clínica
sistémica con cachuete y la positividad
del melocotón en prueba cutanea.
• Sensibilización subclínica al ciprés.
Paciente anafilaxia por ejercicio
Paciente varón de 22 años con episodios
repetidos (3) compatibles con anafilaxia
realizando ejercicio físico al aire libre.
Desde la infancia rinoconjuntivitis
estacional que ocasionalmente precisa de
antihistamínicos
Triptasa urg: 10,90
bas: 4,70
IgE total 670 kU/L
IgE esp:
gram1: 1,88 kU/L
rgram1: 6,27 kU/L
trigo:0,32 kU/L
omega5-gliadina: 5,72 kU/L
Paciente varón de 22 años con episodios
repetidos (3) compatibles con anafilaxia
realizando ejercicio físico al aire libre.
Desde la infancia rinoconjuntivitis estacional
que ocasionalmente precisa de
antihistamínicos
Exploraciones
•Rinoconjuntivitis. Sensibilización
a gramíneas
Triptasa urg:
10,90
4,70
•Anafilaxia inducida por ejercicio. bas:
Sensibilización
al trigo (omega5-gliadina) IgE 670
IgEAg: gram1: 1,88
rgram1: 6,27
trigo:0,32
omega5-gliadina: 5,72 kU/L
Paciente alergia ácaros y alimentos
•Varón de 5 años, diagnosticado de asma
bronquial mal controlado, rinitis
persistente y anafilaxia con marisco.
Primera consulta
•IgE total 1483 KU/L
•IgE Ag (CAP) D.pteronyssinus 7KU/L,
gamba 13 KU/L
Segunda consulta:
•Asma bronquial controlado con
corticoides inhalados y antileucotrienos.
•Medidas de desalergenización
ambiental.
•IT??
•Asma bronquial controlado
•Alergosis alimentaria crustáceos
•Sensibilización tropomiosina
•No inmunoterapia.
Paciente
Síndrome ave-huevo
Mujer, 43 años. Trabaja en hostelería sin contactar con alimentos.
Desde los 18 años con la ingesta de huevo no cocinado: - prurito faríngeo,
- dificultad respiratoria y para la deglución
- edema labial.
Al contacto con huevo (no con la cáscara) y con pollo:
- prurito palmar
- lesiones “maculares” blanquecinas en
palmas de las manos
Años más tarde con huevo cocinado y productos que contienen huevo dificultad respiratoria y para la
deglución
En ambientes donde hay periquitos o cuando se cocina huevo o pollo: malestar general
Anteriormente toleraba huevo en todas sus presentaciones.
Evita la ingesta de huevo y de aves (codorniz, pollo...) de forma absoluta desde hace 4 años,
permaneciendo asintomática durante este tiempo.
Durante su infancia convivió con gallinas !!!
Pruebas cutáneas (prick): Histamina 4x4 mm
Clara de huevo: 5x5 mm
Yema de huevo: 6x7 mm
Mezclas plumas pato-pollo: 4x3 mm
Canario plumas:4x4mm
IgE específica:
- ovomucoide < 0,35 kUA/l
- ovoalbúmina 0,52 kUA/l
- Plumas de canario: 1,67 kUA/l
Diagnóstico molecular
Microarray:
Unica positividad a Gal d 5
Alfalivetina o seroalbúmina del
huevo
DIAGNÓSTICO
Síndrome de ave-Huevo
PARVÁLBUMINA
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•
•
Proteína muscular controla flujo de Ca++.
Termoestable.
Alérgeno mayoritario del pescado (b-parvalbúmina). Similitud entre diferentes
especies.
Menor en el músculo rojo ( atún, emperador tienen menor cantidad de parvalbúmina)
En microarray: parvalbúmina de carpa y bacalao
•
•
35
30
25
20
IgE merluza
parvalbúmina carpa
Parvalbúmina bacalao
15
10
5
0
caso1
caso2
caso3
caso4
Ejemplo de cuatro casos en
los que hay una relación
directa entre el valor de IgE
específica de merluza y
parvalbúmina.
Conclusiones
El diagnóstico por componentes mediante tecnología de
microarrays de IgE específica
Diagnóstico
refinado
-Perfiles de sensibilización
-Confirma reactividades cruzadas
-Precisión en las indicaciones del tratamiento
mediante IT Ag-específica
-Monitorización de la respuesta inmunológica
tras IT
-Biomarcadores de
fenotipos clínicos
-Predicción de gravedad
-El análisis de microarrays abre nuevas opciones en el diagnóstico de alergia
a alimentos.
-Permite medir un numero de proteínas mucho mayor para un mismo
paciente.
-Sin embargo también es el mayor inconveniente de la técnica. Nuestro actual
conocimiento del significado de resultados positivos a muchas proteínas es
limitado.
-Para el buen uso de esta técnica en el diagnóstico de alergia alimentaria
habrá que establecer los perfiles de los resultados en relación con el perfil
clínico especifico para cada paciente.
-Hace falta un buen análisis. Valoraciones clínicas con un alto poder estadístico
Demasiada información no siempre
es una buena información!!!
Pamplona 7-8 Mayo 2010
GRACIAS!!
Nuevo ISAC CRD 130
Nuevas proteínas de alimentos
Melocotón: Pru p 4 (profilina)
Nuez: Jug r 1, Jug r 2, Jug r 3 y Jug r 4
Anacardo : Ana o 2
Cacahuete: Ara h 9
Soja: Gly m 2s
Trigo: Tri a 114 (LTP)
Alforjón: Fag e 16 KD
Leche: Lactoferrina
Clara de Huevo: Gal d 4 (lisozima)
Gamba: Pen m2 y Pen M 4