Transcript TP_mutations_levures

TP 8/TP 9 : Les mutations à
l’origine de la variabilité de la
molécule d’ADN
1ère partie (TP 8) :
Rappel des acquis : Les cellules possèdent une activité métabolique
qui leur permet de se multiplier, cette activité est sous le
contrôle d’un programme génétique.
Introduction : Par exemple, avant de se reproduire, une levure va
devoir reproduire son matériel génétique, l’ADN, et notamment
fabriquer des bases azotées telles que l’adénine (cf. TP 7)
Fabrication de l’adénine dans les levures sauvages :
Produit
intermédiaire
Produit
intermédiaire
Produit
intermédiaire
X
Y
Z
adénine
Action d’une
molécule
Action d’une
molécule
Action d’une
molécule
M1
M2
M3
Fabrication de l’adénine dans les levures Ade2 (souche mutée) :
Produit Y de couleur rouge
Produit
intermédiaire
Produit
intermédiaire
Produit
intermédiaire
X
Y
Z
adénine
Action d’une
molécule
Action d’une
molécule
Action d’une
molécule
M1
M2
M3
inactive
Les levures Ade2 ne peuvent pas fabriquer d’adénine : quel
lien peut on faire entre cette particularité métabolique et
le programme génétique de ces levures ?
Le couple de bases azotées à la position 661 est T-A chez la
souche sauvage et G-C chez la souche Ade2 :
Cette mutation est à l’origine de l’inactivité de la molécule
M2 chez la levure Ade2 (et donc de leur couleur rouge)
Observation de mutations dans les conditions naturelles
On parle de
mutations
spontanées.
Certains facteurs de l’environnement peuvent être à
l’origine de mutations.
Objectif : L’objectif
est de mettre en évidence la
variabilité de la molécule d’ADN par l’observation de ces
mutations provoquées.
Problématique : Quel est l’effet des rayons ultra-violets
sur des organismes unicellulaires tels que les levures ?
Hypothèse : On suppose qu’un facteur physique tel que les
rayons U-V est capable d’altérer la séquence d’ADN, donc
de modifier un gène et par conséquent, le caractère dont il
est à l’origine.
Protocole
expérimental :
Attention : Dans ce TP il est indispensable de
manipuler dans des conditions de stérilité
totale !
Mettre sa blouse
S’attacher les cheveux
Se laver très soigneusement les mains :
- au savon,
- puis à l’alcool
- et les laisser sécher à l’air libre
Allumer le bec électrique et le
laisser chauffer plusieurs minutes :
Vous disposerez d’une zone stérile
d’un rayon de 10 cm environ autour du
bec électrique
Avant que le bec ne soit trop chaud pour passer en dessous :
Nettoyer le plan de travail à l’eau de
Javel ou à l’alcool
Tout objet qui sera sorti de la zone stérile est susceptible
d’être contaminé par des bactéries ou des champignons.
1ère étape : ensemencement des boîtes de Pétri
Chaque binôme a à sa disposition 4 boîtes de Pétri.
L’une d’entre elle sert de témoin, elle ne sera pas exposée
aux UV.
Les 3 autres seront soumises à des durées d’exposition aux
UV variables (30s, 60s et 90s)
Après avoir secouer le tube contenant les
levures Ade2 (concentration de l’ordre de 1000
cellules par mL), prélever 100 µL de suspension.
Déposer la goutte au centre de la boîte.
Étaler la goutte avec le râteau stérile (sans
« labourer » la gélose).
Attention : Veiller à ne pas « laisser traîner » le matériel (couvercle de boîte de
Pétri, râteau, suspension mère de levures…) en dehors de la zone stérile !
2ème étape : irradiation des boîtes de Pétri
Marquer le nom des membres du binôme et le temps
d’exposition sur chaque boîte (et pas sur le couvercle, qui se
retire
!!!) : Les rayons UV s’ils sont susceptibles de
Attention
provoquer
la mutation
desla levures,
aussi
très
Placer
les boîtes
de Pétri sous
lampe UV sont
pendant
les durées
dangereux pour
vous :(30s,
ne pas
lampe,
mettre
d’exposition
variables
60sregarder
et 90s).laNe
pas ni
oublier
de
ses mains
à proximité
retirer
le couvercle
! lorsque la lampe est allumée. Porter
des lunettes de protection et des gants.
Les boîtes sont placées, à l’envers, à température ambiante
pendant 1 semaine ou 4 jours à l’étuve à 28°C puis 3 jours au
frigo.
Résultats attendus :
?
2ème partie (TP 9) :
Résultats observés :
?
Durée d’exposition aux UV (s)
Nombre de colonies rouges
Nombre de colonies blanches
Nombre total de colonies
Pourcentage de colonies blanches
(= « taux de mutation »)
0
30
60
90
Interprétation :
Conclusion :
?
?