Transcript Blood Cell Counts (혈소판, 호산구

Blood Cell Counts
(platelet, eosinophil)
p59
혈소판 측정법(수기법)
① 과정
㉠ 적혈구 pipette에 희석액을 0.5mark까지 넣고
㉡ EDTA 처리된 전혈을 잘 혼합하여 1.0mark까지 넣고(외부혈액
제거)
㉢ 희석액을 101mark까지 정확히 넣는다.
㉣ shaker에서 1분 이상 혼합하고
㉤ 처음 3~4방울 버리고
㉥ 세포 계산 용 chamber에 cover glass 놓고 9mm2 내에 채우고
㉦ Petri dish에 젖은 여과지를 깔고 면봉을 안에 적당 크기로 하여
놓고
㉧ 그 위에 ㉥의 chamber를 넣고 Petri dish 뚜껑을 닫고 15분간
세포를 가라앉히고
㉨ 현미경 10×10 배율로 chamber 중앙의 0.1mm3 내의 혈소판
수를 모두 계수한다.
1 x 1 x 0.1 = 0.1 mm3
혈소판 수 계산 희석액
① Rees-Ecker 법
: 광학현미경 사용
* Rees-Ecker solution
1. Sodlum citrate 3.8g
2. Brilliant cresyl blue 0.1g
3. 40% Formaldehyde 0.2mL
4. Distilled water 로 녹여 100mL 되게 함
※ 여과 후 사용, 1주일 이내에 사용.
혈소판은 brilliant cresyl blue에 의하여 light bluish
color로 염색된다.
혈소판 수 계산 희석액
② Brecker-Cronkite 법
1% Ammonium oxalate 용액으로
Rees-Ecker 법 같은 방법으로
위상차 현미경(Phase contrast microacopy)을
이용하여 측정하는 방법
reservoir
혈소판 계산공식
PLT cells /㎕=
계수된 혈소판 수 × 희석배수(200) × 계산실 용적에 대
한 수정 =
1. 중앙 1개 대구획 계수
계수된 혈소판 수 ×200 × 1 × 10=
2. 2개 대구획 계수
계수된 혈소판 수 ×200 × 1/2 × 10=
3. 혈소판수 감소한경우 희석배수 100배
For example :
중앙 1개 대구획의 혈소판 수 = 150
혈소판 간접 계산법(Fonio법)
㉠ 혈액 도말 표본을 Wright 염색 후 적혈구 1000개 셀
때 혈소판 수(p)를 계산하여 다음 공식에서 혈소판을
계산하다.
도말의 혈소판수(p)
혈소판 수(/㎕) 〓
Ⅹ적혈구 수(/㎕)
1,000
Ex) 오일렌즈에서 적혈구는 200개, 혈소판이 12개 발견
되었다. 총 적혈구수 450만개라면?
혈소판 간접 계산법(Fonio법)
㉡ 혈액도말을 Wright 염색한 후 ideal zone
에서 oil lens로 10시야의 혈소판 수를 계
수하고 평균하여 20,000을 곱한다.
Ex) 혈소판이 오일렌즈에서 평균 12개 계수
되었다면 총 혈소판 수는 얼마인가?
호산구 측정법
과정
㉠ 백혈구 pipette 1.0mark까지 혈액을 넣고 외부에 묻은
혈액제거
㉡ 11mark까지 희석액을 넣는다.(희석배율은
배)
㉢ mix
㉣ 처음 3～4방울 버리고 혈구 계산 chamber에 넣는다
㉤ 여과지에 물을 묻혀 습하게 한 Petri dish에 넣어 5분
(eosin)~15분간(phloxine) 방치, 이때 적혈구는 용혈,
호산구는 염색된다.
㉥Chamber의 아래, 위의 계산 구역 Nuebauer chamber
일때는 1.8㎕, Fuchs- Rosenthal chamber 일 때는 6.4
㎕, 호산구 모두를 계산한다.
호산구 희석액
①Hinkelman 희석액
가장 많이 사용
Yellow eosin 0.5g
Phenol(95%) 0.5ml
Formalin(원액) 0.5ml D.W 100ml 장기보존가능, 흑색으로
염색
②Dunger 희석액
2% Eosin Y 5ml
Aceton 5ml, D.W. 1000ml 혼합 여과 , 냉장 2주 보관
그외 ③Pilot's(phloxine) 용액④Randoph's,
⑤Manner‘s
호산구 계산공식(p98)
Eosinophil cells/㎕ =
계수한 호산구 수 × 희석배수(10) × chamber
용적에 대한 수정
1. Nuebauer chamber 계산
: 계산실 양편의 면적(18mm2) 모두 계수
호산구수/㎕ =계수된 호산구 수 × 10 × 10/18
3×3×0.1=0.9
3×3×0.1=0.9
0.9+0.9=1.8=18/10mm3
2. Fuchs-Rosenthal chamber 계산
: 계산실 양편의 면적(32mm2) 모두 계수
한쪽편의 계산실
모양
호산구수/㎕ =계수된 수 × 10 × 1/32 × 10/2
=계수된 수 × 10 × 10/64
참고치 범위(reference ranges)
1) 적혈구 수
5.0×106/㎕ or ㎣ or 5.0×1012/L
2) 백혈구 수
5～10×103/㎕ or ㎣ or 5～10×109/L
3) 혈소판 수
150～400×103/㎕ or ㎣ or 150～400×109/L
4) 호산구: 50 ～ 400/㎕
5) 뇌척추액:
성인에서는 단핵구 0～5/㎕, 어린이 단핵구
0～20㎕
혈구의 생리적 변동
1) 적혈구：
신생아：5.0～6.0×1012/L(5.0～6.0×106/㎕)
1세전후：3.2～4.5×1012/L(3.2～4.5×106/㎕)
어린이：4.2～5.0×1012/L(4.2～5.0×106/㎕)
성인 남자 : 5±0.5×1012/L성인 여자 : 4.5±0.5×1012/L
2) 백혈구：
1day：9.0～38.0×109/L(9.0～38.0×103/㎕)
2months：5.5～18.0×109/L(5.5～18.0×103/㎕)
12year：4.5～13.5×109/L(4.5～13.5×103/㎕)
Adult：4.5～11.0×109/L(4.5～11.0×103/㎕)
아침과 저녁의 차이가 심하다, 자극(정신적 육체적), 노동, 분노,
식사, 활동, 연령, 여성의 생리 등에서 상승한다.
3) 호산구：0.05～0.45×109/L(0.05～0.45×103/㎕)
4) 혈소판：150～450×109/L(150～450×103/㎕)
16. 각 혈구들의 수가 증가 및 감소했을 때 관련
된 질환
1) 백혈구 증가(호중구 증가)
① 염증 및 감염(bacterial, viral, rickettsial 등)
② 조직 상해(수술 후, infarction(심장, 뇌, 폐 등), 화상, 용혈, 상해 등
③ 악성질환(CML, 림프종, 암 등)
④ 대사성 질환(당뇨성 산혈증, 요독증, 통풍, 자간 등)
⑤ 급성 실혈
2) 백혈구 감소(호중구감소)
① 세균 감염(장티푸스, 유사 장티푸스, brucellosis, 재귀열, 심한 전신감염)
② Viral 감염(홍역, 독감, 수두, 이하선염, 전염성 간염, 전염성 단핵구증)
③ Rickettsial 감염
③ 원충 감염(malaria, kala-azar)
④혈액질환(aleukemic leukemia, 악성 빈혈, 재생 불량성 빈혈, 골수성 빈혈,
SLE, agranulocytosis)
⑤ Hypersplenism
⑥ Chemical, Drugs, Irradiation
⑦ 투석, alcoholism 등
3) 호산구증가
① Allergy 질환(기관지 천식, 담마진, 고초열, 과민증 등)
② 기생충 감염(섬모충증, 회충증, 분선충증, 옴 등)
③ 만성 피부질환(천포창, herpetiform 피부염, 건선, 습진)
④ 악성 질환(CML, Hodgkin's disease, Sẻzary‘s syndrome,
carcinomatosis etc.)
호산구성 폐렴
⑤ Loeffler's syndrome (Pulmonary eosinophilia)
⑥ 기타 (Irradiation, 비장적출 후, 성홍열, 악성 빈혈, 가족성
호산구증)
4) 호산구 감소증
급성 감염증의 초기, 급성 중독 및 뇨독증, 심한 골수 기능부
전, 내분비 질환(Hyperadrenalism - Cushing disease 환자로
cortisone (ACTH)투여 후, insuline 투여 등)
5) 호염기구 증가증
CML, 진성 다혈증, 골수 섬유종, mastocytoma, 호염기성
백혈병, 점액수종, 궤양성 대장염, 과민상태 등
6) 호염기구 감소증
감염과 출혈을 야기하는 급성 stress, Cushing병, ACTH
투여, 급성 담마진, 급성allergic 반응, 갑상선 기능항진
증, progesterone 투여
7) 림프구 증가증
① 세균성 질환(결핵, 백일핵, Brucellosis, 장티푸스, 유사 장티푸
스, 급성 감염 회복기)
② Viral 질환(전염성 간염, 이하선염, 홍역, 수두, 전염성 단핵구
증 등)
③ 악성 질환(림프구성 백혈병, 림프종, macroglobulinemia)
④ 기타 질환(매독, Rickettias, 갑상선 기능항진, 자가 면역성 질
환, allergic reaction)
8) 림프구감소증
속립성 결핵, 요독증, SLE, Hodgkin's 질환, Irradiation, ACTH와
steroid 및 화학 약제 등
9) 단구증가증
결핵, Brucellosis, 아급성 심내막염, 원충 및 rickettsia 감염,
Hodgkin's, Gaucher's, 단구성 백혈병 등
10) 단구감소증
심한 과립구증가, 악성 빈혈
용수법으로 혈구수 측정시 오차의
원인
1) 부적당한 pipette 사용과 혈액을 부정확하게
pipetting할 때
2) 부적당한 pipette을 진탕했을 때
3) 처음 3～4방울을 버리지 않을 때
4) 계산실에 바르게 채우지 않았을 때
5) 계산판에서 혈구 계산시 이중 계산할 경우
6) 혈액이 희석 또는 농축될 때
7) 부적당한 항응고제와 비율
8) 일부 혈액응고
Thorn test의 검사 목적과 원리
1)검사목적; 부신피질 기능저하(hypoadrenalism)와
부신피질기능항진(hyperadrenaliism) 감별목적
2)원리; ACTH((0.25～0.5㎎) 주사 전과 주사 후의 호
산구 수 계산
3) 결과
① 정상：주사 후 호산구 50% 감소
② 부신피질기능 저하(Addison disease)：주사 전과
후 거의 변화 없다.
③부신피질기능 항진(뇌하수체 이상 Cushing병)：주
사 후 50%이하로 떨어져 거의 “0”로 나타남.
위상차 현미경을 사용하는 혈구계산법
- 특별한 염색이 필요하지 않고, 습윤표본(wet
preparation)으로 관찰한다.
- 혈소판 수 계산, Heinz 소체 검사
희석액
①적혈구 측정용 희석액: 생리식염수, Hayem's,
Toisson's, Gower's, Dacie's, Strong's 용액
②백혈구 측정용 희석액 : Türk's 용액, 0.1N HCl
용액, 2% acetic acid
③ 뇌척수액 : Türk's 용액(10% acetic acid),
Pappenheim 용액, Samson 용액
④ 활액 세포(synovial cell)：생리식염수
⑤ 호산구：Hinkelman's, Randoph's, Dunger's,
Manner's, Pilot's 용액
⑥혈소판：Rees-Ecker 용액, Brecher Cronkite(위상차현미경)
뇌척수액 세포수 측정
• (
) 피펫 사용
• 희석액
: pappenheim액
• 희석배수
: 백혈구 피펫에 희석액 1mark+뇌척수액
11mark ㅡ> 10/9
• 계수 면적
: 1mm2 구획 내 세포수 계수