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8장 결합조직 염색 (Connective tissue staining)
학 습 목 표
1. 결합조직을 구성하고 있는 3가지 섬유의 조직학적 특성과 분포 2. 결합조직 섬유의 조직 병리학적 의의 3. 기저막의 구조적 특성, 화학적 조성 및 조직병리학적 의의 4. 아교섬유 검출에 사용되는 염색법의 종류와 삼색 염색의 기본 원리 5. 탄력섬유-Verhoeff 염색 6. 세망섬유 검출에 사용되는 염색법 7. 암모니아성 은용액의 조성, 제조방법, 문제점 8. 콩팥침생검조직의 처리 방법 9. PAM(periodic acid methenamine-silver)염색의 원리 10. 도은법의 진행과정과 단계별 의의를 설명한다.
11. 섬유소 염색법의 종류와 PTAH염색의 조직병리학적 의의를 설명한다.
조직의 유형
상피조직은 기관의 겉이나 속을 싸고 있는 조직 : 조직을 보호 기능- 피부, 위장점막, 혈관내피 등 상피조직의 한계 : 기적막(Basement membrane) 연결조직과 상피를 연결
2) 결합조직(connective tissue)
인체에서 가장 많고, 지주(supporting)역할 아교섬유 ,교원섬유 : collagen이라는 단백질로 구성 세망섬유 : collagen이라는 단백질로 구성 탄력섬유 : elastin이라는 단백질로 구성-피부, 혈관
결합조직의 기원 및 구성물질 1. 결합조직의 기원 1) 중배엽 에서 다잠재성의 중간엽 세포가 발생 2) 중간엽 세포가 몸 전체로 이주하여 다양한 결합조직을 형성 2. 결합조직의 기능 1) 생체의 통합적인 기능을 유지 (1) 지지기능 (2) 영양분이나 대사물질의 교환매체 (3) 방어기전 2) 다른 조직과 연속된 결합체 형성 3. 결합조직세포 : 여러 가지 세포로 구성됨 4. 세포사이물질 : 매우 풍부하며 밀도, 인장력, 견고성, 탄성 등을 결정 1) 결합조직섬유 : 아교섬유, 탄력섬유, 세망섬유 2) 무형질 (Ground substance) (1) 글리코아미노글리칸 (가) 황산화 콘드로이틴 : 연골, 뼈, 각막, 피부 등에 분포 조직을 단단하게 함 (나) 히알루론산 : 기질의 점도를 높여 윤활제 및 외부물질 침투의 방어작용 (2) 당단백 (3) 산성점액다당류 : 라미닌이나 콘드로넥틴과 같은 부착성 당단백
결합조직 염색의 목적 결합조직은 우리 인체에서 가장 풍부하면서 여러 가지 세포와 섬유질로 구성되 어 있으며, 특히 섬유질의 변화에 따라 여러 가지 질환을 구분 할 수 있다.
1. 아교섬유 1) 아교질의 과축적에 의한 질병 : 진행성 전신성 경화증, 켈로이드 등 2) 간경변증 : 정상간 소엽이 자극에 의해 진행성섬유화와 재생성결절에 의해 변형되는 병변 3) 종양 : 섬유육종과 평활근육종을 감별 2. 세망섬유 1) 간병변 : 초기 간경변증에서 간세포 괴사에 의한 세망섬유의 농축상 관찰 간세포암종 시 간암세포에 세망섬유가 관찰안됨 2) 림프조직종양의 감별 : 전이성 암종은 암세포 자체에서 독특한 세망섬유 그물을 만들어 그 종양 특유의 세망섬유 양상을 보임
급성 알코올 간염 . 대량의 음주 후에 간이 종대되고 , 발열과 황달이 동반된다 . 중심정맥주위의 소엽 중심대에 있 는 간세포가 괴사에 빠져 사라지고 , 알코올 초자체 ( 말로리소체 ) 가 간세포의 내외에 출현한다 . 호중구가 죽어가는 간세포 주위 에 나타난다 .
대공포성 지방 변화 . 간세포의 세포질이 큰 공포로 대치되고 , 핵은 한 쪽으로 밀려 핵막에 반달모양으로 붙어 있다 . 오랜 음주 후에 잘 동반되고 , 술을 안마시면 정상으로 복귀한다 .
지방간 . 간은 대단히 커져있고 황색이며 , 절단면에 기름을 바른 것처럼 미끈거린다 .
가역성 육안 간세포 섬유화 발병원인 지방간과 간경화증의 차이 지방간 간경변증 가역적 크기증가, 무결절 지방세포화 비가역적 초기는 크기증가 후기 크 기 감소, 결절형성 간세포 소실 및 재생 경도의 섬유화가 중심정맥 중심으로 알코올 섭취, 영양장애 등 고도의 섬유화가 간문맥, 간문맥간 또는 중심정맥까 지 연결되어 간소엽구조가 파괴 간염, 알코올 섭취, α1-항 트립신 결핍 등
5 간경변증의 합병증, 위험성 5.
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복수 발생 간기능저하에 의한 공팥기능 상실, 간뇌병증 감염, 출혈 내분비계 이상 (여성화) 과알도스테론증 (고혈압) 식도정맥류, 치질, 배꼽주의 정맥 울혈(메두사의 머리) 간암
간경화증의 육안적 변화 . 소결절성 경화증 ( 왼쪽 ) 의 재생성 결절은 직경 3mm 이하의 크기고 , 대결절성 경화증 ( 오른쪽 ) 의 재생성결절은 직경 3mm 이상이다 . 이러한 육안적 분류는 진행과정을 반영할 따름이고 원인과는 무관하다 .
알코올성 간경화증 . 오랫동안 습관적인 음주 결과로 간경화증이 발생한다 . 비교적 크기가 작고 서로 비슷한 크기의 결절들이 간의 전표면을 덮고 있다 . 대개 결절의 크기는 직경이 2-3mm 에 불과하다 . 절단면은 황색을 띈다 .
간기능상실의 임상 발현
3. 탄력섬유 1) 혈관질환 : 동맥경화증에서 탄력판이 얇아지거나 소실 고혈압성 혈관질환에서 탄력판이 갈라지거나 중첩 동맥염에서 탄력판이 파괴 2) 신장 : 양성 및 악성 신장경화증, 신장이식거부반응, 신장다발성동맥염 등 3) 비정상 심판막 4. 기저막 1) 암종의 진단시 : 상피내암과 침윤암을 구분 2) 신사구체질환의 감별진단 : 사구체신염시 기저막 비후
A. 장간막조직의 HE염색 B. 고유결합조직의 모형도
아교섬유의 형성과정의 모형도
사람 아교섬유의 세로단면과 가로단면의 전자현미경 사진
1. 아교섬유
힘줄(tendon), 인대(ligament) 간생검조직으로 부터 간섬유증 아교섬유 Ⅰ 구조 섬유내 원섬유 다발 출현부위 뼈, 인대, 피부, 힘줄, 섬유연골 Ⅱ 가는 원섬유 유리연골, 탄력연골 기능 매우질김, 흉터형성 염색 HE-분홍색 도은법-황갈색 Masson trichrome-청색 압력에 저항 Ⅲ Ⅳ 그물망 원섬유를 형성하지 않음 세망섬유 림프조직 간 바닥막 기관의 골격 도은법-흑갈색 호은성섬유 상피조직의 지지, 여과 장벽 PAS-양성
1. 아교섬유 염색
1. 밴기슨(van Gieson)염색
2. 마손 삼색(Masson trichrome)염색
3. 시리우스 레드(Sirius red)염색
4. 하이덴하인 아잔(Heidenhain AZAN)염색
Van Gieson
1. 원리 : 염료분자의 크기에 따른 염료투과성 pH1.5~3.0의 산성유지 2. 시약 : Acid Fuchsin, 포화picric acid 사용 3. 결과 : 교원섬유: 적색, 근섬유·세포질: 황색 핵: 흑갈색 4. 목적 : 교원섬유와 근섬유를 분리 관찰
밴기슨(van Gieson)염색. A. 간섬유증(hepatic fibrosis)조직의 간.
B. 정상 자궁의 근육층조직. 아교섬유는 적색, 세포질과 근육은 진노랑색 그리고 핵은 흑갈색으로 염색된다.
결합조직의 염색 (Stain of Connective tissue) collagen fiber Van Gieson 염색 muscle
Masson Trichrome
1. 원리: 염료 분자량의 크기에 따른 염료투과성 2. 시약; 1) Weigert iron hematoxylin - 핵염색 2) Biebrich scarlet-acid fuchsin - 세포질 3) Phosphotugstic acid-phosphomolybdic acid: 분별 4) 1% acetic acid 5) 2% Aniline blue - 아교섬유만 선택적 염색 3. 결과 1) 아교섬유 (청색) 2) 근육 및 세포질 (적색) 3) 핵 (흑청색) 염료분자가 가장 큰 Aniline blue 에 의해 청색 중간크기 acid fuchsin에 의해 적색 가장 작은 Biebrich scarlet에 의해 적색 *염색전 매염-Bouin fix
3) 염색과정 (1) 탈파라핀, 함수를 거쳐 수세 5분 (2) Bouin sol.에 slide를 넣고 56℃ 부란기에 1시간 동안 매염 시킴 (3) 흐르는 물에 10분간 수세(picric acid 색소 제거) (4) Weigert hema로 10분간 핵염색 후 흐르는 물에 10분간 중화 (5) Biebrich scarlet-acid fuchsin용액으로 10 - 15분간 염색 (6) 수세로 과량의 염색액 제거후 P.T.A.-P.M.A.용액으로 5분간 처리 (7) 수세 후 0.5% acetic acid로 10분간 감작 (8) 수세없이 aniline blue용액으로 5분간 염색 (9) 수세로 염료를 깨끗이 씻고 탈수, 투명, 봉입 4) 염색결과 교원섬유 : 청색 세포질, 근육 : 적색 핵 : 흑청색
교원섬유 (청색) 근육 및 세포질 (적색) 핵 (흑청색)
마손삼색(Masson trichrome)염색. A. 간경변증환자의 간 침생검조직. 청색의 아교섬유가 소엽(적색) 주위를 둘러싸고 있다.
B. 콩팥침생검조직. 콩팥의 사이질 섬유증(interstitial fibrosis). 요세관(적색) 사이의 사이질 부위를 증가된 청색의 아교섬유가 채 우고 있다.
시리우스레드(sirius red)염색
사염화탄소로 유도한 쥐의 기간에 따른 간섬유화. A. 2주 B. 4주 C. 6주 D. 8주
아잔(AZAN)염색.
간경변증(liver cirrhosis) 환자의 간바늘생검조직. 아교섬유는 청색, 세포질은 적색, 핵은 염색되지 않는다
결합조직의 염색 (Stain of Connective tissue) II. 아교섬유 염색법의 종류와 원리 종류 원리 van Gieson Masson trichrome 염색액의 pH의 차이를 이용 염료성분의 분자량 차이를 이용 . 가장 큰 염료분자인 아닐린 블루는 교원섬 유, 중간크기의 염료분자인 acid fuchsin에 근섬유, 가장 적은 염료분자인 biebrich scarlet에 세포질이 염색 Martius-scalet -Blue (MSB) 염색기전은 M-T염색과 유사, 노쇠섬유소와 어린섬유소를 구별 Mallory's PTAH Heidenhain AZAN Hematoxylin 과 Phosphotungstic acid 를 혼 합 하 면 Lake 를 형 성 하 여 Muscle의 cross Striation에 염색되고 남은 Phosphotungstic acid ion은 collagen fiber에 염색된다 MT와 유사한 염색으로 아조카민과 아닐린블루-오렌지의 첫머리 글자를 합 성, MT보다 염색시간이 길고 핵의 구별이 좋지않아 사용빈도가 낮으나, 병적생성물을 볼 수 있어서 사구체신염의 진단에 필수적이다.