Transcript 8장 결합조직 염색2 (4Mbyte)

2. 세망섬유 염색




Ⅲ형 아교섬유=호은성섬유(argyrophilic fibers)
은 염색에 선택적으로 염색되는 호은성 섬유라고 함
평활근, 신경섬유막, 림프기관(림프절, 흉선, 비장, 편도), 간, 콩팥
도은법: 1904년 빌쇼스키(Bieschowsky)
1905년 마레(Maresch)
1921년 퍼드루(perdrue)
현재: 윌더(wilder), 고든-스위트(Gordon-Sweet), 고모리(Gomori)
세망섬유 염색법의 종류와 원리
종류
원리
Gomori
reticulum
세망섬유내 기질의 호은성을 이용하여 기질표면에 은염을 침착시킨 후 금속
은으로 환원시켜 관찰하는 물리적인 염색기전
도은법의 차이
1. 호은성 : 은과 친화적 결합을 하지만 환원을 시키지 못하여 인위적으로 환원시킴
2. 환원성 : 은과 친화적 결합을 하고 직접 환원도 시킴
3. 유도성 : 은을 환원시킬 수는 있으나 친화적 결합을 못하므로 유도물을 사용하여
결합시킴
1) 은, 銀, silver, 원소기호(Ag),
*. Gr. Argyrous, 반짝였다
원소의 주기율표
2) 질산은(AgNO3):
1. 은이온을 이용하는 모든 염색법에 사용
2. 널판지 형태의 무색 결정체
3. 물에 녹이면 이온이 되어
눈에 보이지 않는다
Na+
Ag+ AgNO3
NO3-
☞ 금속의 성질
1) 이온상태 → 눈에 안보인다
2) 환원상태 → 눈에 보인다
Ag
Ag0+ + HCHO(환원제)
Ag+ + e- → Ag0 (환원상태)

호은성염색에 은이온(Ag+)을 이용하는
염색법의 염색단계:
+)을 반응시킨다
Ammonical
silver
1단계: 은이온(Ag
20% formalin
2단계: 환원과정
Sodium
thiosulfate
3단계: 반응하지
않은
은이온 제거
Gomori’s ammonical silver
stain
* 세망섬유 증명, Gomori(1937)
(1) 원 리
세망섬유는 은이온을 흡착하는 특성 소유
→ 호은성섬유
2) 은이온(ammonical silver)을 세망섬유에
흡착 시킨다
1)
1단계: 은이온 흡착
Ag+
세망섬유에 은이온 흡착
Gomori’s ammonical silver
stain
* 세망섬유 증명, Gomori(1937)
(1) 원 리
세망섬유는 은이온을 흡착하는 특성 소유
→ 호은성섬유
2) 은이온(ammonical silver)을 세망섬유에
흡착 시킨다
3) 환원제(formalin) 처리 → 금속은으로 전환
⊙ 결과: 세망섬유 → 흑색(검정색)
1)
1단계: 환원제
2단계:
은이온 반응
흡착
환원제
세망섬유 → 흑색
(2) 세망섬유 염색과정
(탈파라핀, 함수, 수세)
산 화
Pot. permanganate
Sod. metabisulfite
(보라) 염색성 증가
감 작
노 출
Ferric ammonium sulfate
비특이적 염색 억제
Ammonical silver
세망섬유 표면에 침착
환 원
20% formalin
흑색
조 색
0.2% gold chloride
toning
정 착
Sod. thiosulfate
반응중지, 금속이온 제거
산화제제거
(무색) 과량의 PP제거
(탈수, 투명, canada balsam 봉입)
(3) 염색결과
1.
2.
세망섬유 ------------ 검정색(흑색)
아교섬유 ------------ 갈 색
세망섬유 염색(간의 중심정맥)
은이온 흡착
굴절율 변화
검정색

염색과정의 첫 번째 문제점:
(1) Ag+ 이온을 직접 사용하면
1. 조직내 음이온(-)으로 하전된 부위에
정전기적 결합:
2. 예: 산성점액 다당류
3. 해결방법: 미리 양이온(Fe3+)으로 처리
Ag+
Fe
Fe Fe Fe Fe +
+
+
+
+
Ag+
- Fe
- Fe
- Fe
- Fe
+
Ag+
+
Ag+
+
+
산 화
Pot. permanganate
Sod. metabisulfite
(보라) 염색성 증가
감 작
노 출
Ferric ammonium sulfate
비특이적 염색 억제
Ammonical silver
세망섬유 표면에 침착
환 원
20% formalin
흑색
조 색
0.2% gold chloride
toning
정 착
Sod. thiosulfate
반응중지, 금속이온 제거
산화제제거
Fe3+
(무색) 과량의 PP제거

염색과정의 두 번째 문제점:
(1) 은이온(Ag+ )을 흡착하는 조직성분이 많다
1. 세망섬유
pH 11.0
2. 신경원섬유
pH 11.0
3. 칼슘
pH 7.0
4. 나선균
pH 4.0
5. 멜라닌색소
pH 11.0
*. 해결방법: 은이온 염색액의 pH를 달리한다
*. 세망섬유를 염색하기 위해서 은이온용액에
알카리(ammonia 수) 첨가
AgNO
질산은3 증류수 용해
Ag+
은이온(Ag+) 용액
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
Ag+
은이온 용액에 암모니아수 첨가
흑색의 침전물 형성
Ag2O↓
암모니아수 계속첨가
Ag+
이온
침전물 용해
[Ag(NH3)2]+
착이온
이온 형성 2[Ag(NH3)2]+ ammonical silver
암모니아성은(ammoniacal siver)용액 제조과정.
A. 질산은(AgNO3)용액과 수산화칼륨(KOH)용액
B. 산화은(Ag2O) 생성물
C. 은암모니아착염[Ag(NH3)2]을 형성하여 무색으로 변한다.
산 화
Pot. permanganate
Sod. metabisulfite
(보라) 염색성 증가
감 작
노 출
Ferric ammonium sulfate
비특이적 염색 억제
Ammonical silver
세망섬유 표면에 침착
환 원
20% formalin
흑색
조 색
0.2% gold chloride
toning
정 착
Sod. thiosulfate
반응중지, 금속이온 제거
산화제제거
(무색) 과량의 PP제거
호은성(Argyrophilic)
도은법
1. 원리: 은이온을 잘 흡착하는 특성
환원제
2. 처리 단계:
은이온 흡착-환원제 처리-조색-정착
Ag+
3. 증명성분:
환원제
1) 세망섬유
Formalin
2) 신경원섬유
Hydroquinone
3) 칼슘
UV lamp
4) 나선균
Hydroquinone
* 선택성을 높이기 위해 은이온 용액의
pH를 달리한다
pH
11
7
4
5. 도은법을 이용하는 염색법의 염색과정에
포함되는 단계는? 06년
가. 매염 나. 감작 다. 중화 라. 조색
1) 가나다 2) 가다 3) 나라 4) 라 5) 가나다라
감작
은침투
환원
조색
정착
6. 세망섬유 염색을 위한 도은법의 진행과정은?
02년
1) 산화-감작-은침투-환원-조색
2) 산화-환원-은침투-감작-조색
3) 조색-감작-은침투-산화-환원
4) 은침투-산화-감작-환원-조색
5) 은침투-환원-조색-감작-산화
은환원성(Argentaffin)
1. 원리: 은이온을 흡착•환원시키는 특성
2. 처리 단계:
은이온 반응(노출)-조색-정착
Ag+
3. 증명성분:
멜라닌 색소
*. 환원제 불필요
은용액 pH
11
Gomori Reticulin
1. 원리: 세망섬유가 은과 결합하여 흑색의 금속성 은으로 환원
2. 시약 :
1) 0.5% Pot. permanganate - 산화제
2) 2% Pot. metabisulfite - 환원제
3) 2% Ferric amm. sulfate - 매염제
4) Diamine silver - 세망섬유염색
5) 20% Formalin - 은 환원제
6) 0.2% Gold chloride - 조색제
7) 2% sod. thiosulfate – 안정제
3. 결과 :
세망섬유 – 흑색
교원섬유 – 적갈색
핵 - 흑색
암모니아성은용액: 강 알칼리 (조직탈락주의-코팅슬라이드사용)
• 질산은(AgNO3)
• 수산화칼륨(KOH)
• Ammonia 수(NH4OH)
Gomori Reticulin
세망섬유 – 흑색
교원섬유 – 적갈색
핵 - 흑색