Transcript Document 7809836

ปฏิบัติการที่ 2
1. การทาให้ เจือจาง (Serial dilution)
2. ปฏิกริ ิยาระหว่ างแอนติเจนและ
แอนติบอดี
1
การทาให้ เจือจาง (Serial dilution)
0.5 ml
0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
นา้ สี
1
2
3
0.5 ml
4
0.5 ml
5
6
นา้ กลัน่
0.5 ml
Dilution
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
control
2
การคานวณ Dilution
N1V1 = N2V2
N1 = dilution ของสารที่ดูดมา
V1 =ปริ มาตรของสารที่ดูดมา
N2 = dilution ของสารในหลอดที่คานวณ
V2 = ปริ มาตรสุ ดท้ายของหลอดที่คานวณ
(V2 = V1 + ปริ มาตรของน้ าในหลอดที่คานวณ)
3
V1
0.5 ml
N2 = N1 x
V2
V1
N2 = 1/4 x 1/2 =1/8
1
2
3
V2 = 0.5+0.5 =1
นา้ กลัน่ 0.5 ml
N1
1:4
?
N2
4
การทดลองที่ 1. Tube precipitation test
ดูสาธิต - ตามทีต่ ้งั แสดงไว้ ทบี่ ริเวณริมหน้ าต่ าง
หรือโต๊ะกลาง
ตอบคาถามว่ า Ab titer มีค่าเท่ ากับเท่ าไร
5
Serum 0.5 ml
0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml
1
2
3
0.5 ml
4
0.5 ml
5
6
Diluent
0.5 ml
Dilution
1:32
Antigen
1
1:2
1:4
control
1
1
1 หยด
1:8
1:16
1
1
6
Dilution
1:32
1:2
control
ตะกอน (precipitate)
1:4
1:8
1:16
Ab Titer = 1:8 or 8
7
การทดลองที่ 2
Immunodiffusion
1
6
Ag1
2
Ag3
Ab
7
5
3
4
Ag2
Ag2
Ag3
Ag1
-ให้ ฝึกหัดหยอดสาร Ag และ Ab ลงในช่ องต่ าง ๆ ตามที่กาหนด
-ดู precipitin band ทีเ่ กิดขึน้ (ให้ อาจารย์ แสดงให้ ดู)
8
9
การทดลองที่ 3. Blood grouping
- ให้ น.ศ. จับคู่กนั เจาะเลือดจากปลายนิว้ เพื่อทา
การตรวจหมู่เลือด
- ใช้ sterile technique ป้ องกันการติดเชื้อ
- เช็ดสาลี-แอลกอฮอล์ , ใช้ lancet จิม้ นิว้ , หยดเลือด
บน slide 2 หยด
- ทิง้ อุปกรณ์ ต่าง ๆ ทีใ่ ช้ แล้วลงในถังทีจ่ ดั ไว้ ให้
11
เลือดจากปลายนิว้
Anti-A
Anti-B
Agglutination
12
เกิด Agglutination
ไม่เกิด Agglutination
13
การสาธิต
1. Single radial immunodiffusion (SRID)
2. Immunoelectrophoresis (IEP)
3. Immunodiffusion (ID)
4. Tube precipitation
5. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)
14
15
16
Enzyme-linked immunosorbent
assay (ELISA)
By...
Assistance Professor Suwin Wongwajana,MD.
17
Microtiter Plate (ELISA Plate)
96 wells plate (8 rows, 12 columns)
18
19
Indirect ELISA (For detection of antibody)
1. Coat plate with Antigen
20
2. Wash
21
22
3. Add specimens (with Ab, or No Ab)
Y
Y
No specific Ab
Y
with specific Ab
23
4. Wash
with specific Ab
No specific Ab
Y
24
4. Add conjugate (anti-human IgG=Enzyme)
E
E
E
E
E
E EE E
E
E
E
E
E
25
Y
5. Wash
with specific Ab
No specific Ab
E
E
E EE E
Y
26
Human-IgG
Y
= Ag
immunized
YY
Y
Rabbit anti-human IgG
27
6. Add substrate (Chromogenic)
EE
EE
E EE E
28
Y
29
Y
E EE E
E
E
วัดค่ า Absorbance (O.D.)
ความเข้มข้นของสี จะผันแปรกับปริ มาณspecific
antibody ในสิ่ งส่ งตรวจ
30
31
Immunofluorescence(IF)
Cell
Tissue
32
Direct Immunofluorescence
(For detection of antigen)
CD4
CD3
33
Anti-CD4 = Fluorescein dye
+
F* F*
F*
F*
CD4
CD3
34
CD4+ve
Fluorescent Microscope
35
CD8
CD8
CD4
CD4
CD4
CD4
CD8
CD8
CD4
CD4
CD4
CD4
CD8
CD8
CD4
CD4
36
Indirect Immunofluorescence
(For detection of antigen)
F*
F*
F* F*F*
F*
Conjugate
Specific Ab
37
F*
F*
F*
F*
F*
F*
Mouse anti-rabbit = F*
Rabbit anti-CA Ag
CA Ag
38
39
40
สิ่ งที่ น.ศ. ต้ องทา
1. ฝึ กทา serial dilution
2. ตรวจหาหมู่เลือดของตัวเองโดยจับคู่กนั ทา
3. หัดหยอดหลุม slide immunodiffusion
4. ดูสาธิตทีต่ ้งั แสดงไว้ ทบี่ ริเวณริมหน้ าต่ าง หรื อโต๊ ะ
กลาง
5. Conference วันศุกร์ ที่ 22 มิ.ย.50 8.00-9.00 น.
มี Quiz
41