Transcript 면역학 실습 미생물학교실 권 형 주

면역학 실습
미생물학교실
권 형 주
항원항체반응
응집반응
정의 :
항원항체반응의 일종으로, 과립상의 항원(세균, 적혈구등)과 그에 대한 특이항체
가 반응하여 서로 엉켜서, 육안적으로 식별할 수 있는 덩어리를 형성하는 것으로,
항체가 응집소 (agglutinin) 로 작용하여 마치 다리처럼 (bridge) 응집원
(agglutinogen, 항원)을 서로 연결시켜 (interconnect) 눈으로 확인할 수 있는 반응
이다. 응집반응은 일반적으로 IgM의 항체가 IgG의 항체에 비하여 응집능력이 훨씬
높다.ㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐㅐ
Hemagglutination
응집반응의 종류
a) 능동응집법 (active agglutination)
이 방법은 입자상태의 항원을 항체가 직접 결합하여 입자를 응집시키는 방법을
말한다. 혈액형 검사에 이용되는 혈구응집법 (hemmagglutination)은 대표적인
능동응집법으로 적혈구에대한 항원-항체반응을 확인할 때 사용한다
b) 수동응집법 (passive agglutination)
수용성인 항원을 미리 입자에 결합시켜 물에 녹지않는 입자상태로 전환시킨 후,
그 항원에 대한 항체를 이용하여 입자가 응집되는 것을 확인한다. 양의 적혈구
(SRBC)에 수용성 항원을 결합시켜 사용하기도 하며, 인공적인 고무입자 (latex
polymer)에 항원을 결합시켜 응집반응에 이용하기도 한다.
평판(슬라이드)응집반응
- 정성검사로서, 모르는 균의 부유액을 평판에 떨어뜨린 후 항혈청 한 방울
과 혼합하여 균의 응집이 일어나면 균을 동정할 수 있는 방법
- 세균 감염증의 진단 및 혈액형 검사에 널리 이용
시험관 응집반응
- 정량검사로서, 시험관에서 환자혈청을 2배 계단희석한 후 균액을 첨가하
여 균의 응집여부를 관찰하는 방법
- 장티프스 진단에 이용되는 Widal법이 대표적인 예로, 혈청내 항체가를 측
정할 때 사용
슬라이드 응집반응의 결과 판독
(좌측: 음성, 우측: 양성)
시험관 응집반응의 결과 판독
침강반응 (precipitation)
정의 :
물에 녹아서 침전이 형성되지 않는 항원을 항체를 이용하여 항원-항체 복합체의
침전을 형성하게 하여 항원의 존재를 확인하는 방법으로, 일반적으로 단백질과
같은 수용성 항원을 확인 할 때 이용된다. 침전의 형성은 항원이 너무 많거나 항
체가 너무 많아도 형성되지 않으며, 언제나 항원과 항체의 역가가 일치하는 등가
의 지역 (zone of equivalence)에서 얻어진다.
종류 :
Ring test 중층법
정량침강반응(Quantitative precipitation reaction)
면상반응(Flocculation reaction)
한천층내 침강반응(Gel내 침강반응) – 일차원 이중확산법, 이차원이중확산법
면역 전기영동법(Immunoelectrophoresis)
Ouchterlony 한천확산법(gel diffusion)
정의 :
한천(gel)상에서 적정(equivalence)농도의 항원과 항체를 분리되어 있는 구멍
(well)에 넣으면 이들이 확산(diffusion)되어 서로 만나는 곳에서 육안적으로 볼
수 있는 침강선이 형성된다.ㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡ
장점 :
다수의 항원을 동시에 검사 가능, 항원상호간의 관계(동질성, 이질성)를 한장의
평판에서 확인할 수 있고, 특이성이 높다.
단점 :
민감도가 낮아 비교적 높은 농도의 항원 또는 항체(mg정도의 양)가 필요
Ouchterlony법을 위한 한천제조
Ouchterlony법에 의한 항원 항체반응
(a)
(b)
(c)
(a) 항원 1 및 2는 동일(항체는 1에 대한 것)
(b) 항원 1 및 2는 일부가 동일(항체는 1에
대한 것)
(c) 항원 1 및 2는 서로 다름(항체는 1 및 2
에 대한 것)
Ouchterlony법에 의한 항원의 동질성 및 이질성관찰
결과 판독
면역전기영동법(immunoelectrophoresis) :
많은 종류의 항원을 포함하고 있는 시료내 항원성분을 분석할 때 주로 이용하는
방법. 항원을 넣는 구멍과 항체를 넣는 도랑을 만든 후 먼저 항원을 넣고 전기영동
을 실시하여 항원을 분리한 다음 면역확산에 의해 항체와 반응시키는 것으로 여러
종류의 항원의 존재를 동시에 확인할 수 있는 방법
결과 판독
항체(anti-BS)
항체(anti-BSA)
항체(anti-BS)
항체(anti-BSA)
항원(bovine serum)
항원(bovine serum)
Ring test 중층법